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    公开号:WO1989001163A1
    申请号:PCT/JP1988/000725
    申请日:1988-07-20
    公开日:1989-02-09
    发明作者:Masaru Ishii；Yuko Seino
    申请人:Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha；
    IPC主号:C07K16-00
    专利说明:
    [0001] 明 糊 尿 中 の塩基性胎児蛋 白 の測定方法及びそ れ に 用 い る 測 定 キ ッ 卜
    [0002] [ 技 術 分 野 ]
    [0003] 本発明 は尿中 の塩基性胎児蛋 白 の測定方 法及びそ れ に 用 い る 測定 キ ッ 卜 に 関 す る 。
    [0004] [ 背 景 技 術 ]
    [0005] 塩基 性胎児蛋 白 （ Basic Fetoprotei n: BFP と 略記 ） は本発明 者の 中 の一人が ヒ 卜 胎児の血清 ， 腸.お よ び脳組織中 に 見出 し た も ので あ っ て 、 後記 の文献等で既 に 公知 の塩基性 蛋 白 で あ る 。 既知 の胎児蛋 白 が 酸性蛋 白 で あ る の と 対照 的 に 、 こ の 蛋 白 は塩 基性で あ る と こ ろ か ら 、 特 に 塩 基性 胎 児 蛋 白 と 呼 称 さ れ る 。 さ ら に 本発 明者の 中 の一人 は 当 該蛋 白 に つ い て の ラ ジ オ ィ ム ノ ア ツ セ ィ （ R I A と 略記 ） を確立 し 、 血清 中 に お け る 当 該蛋 白 の測定が癌の 診断お よ びその病状経過 、 治療効果の 判定 に 役立 つ こ と を知見 し た 。 と り わ け 当 該蛋 白 は ひ - フ 1 卜 プ ロ テ イ ン ( A F P と 略記 〉 の よ う に 特定臓器の癌診断 し か役立 た な い も ので は な く 、 非癌 と 癌 と の鑑 別 診断 、 す なわ ち 担癌 の有無 の診 断 に 役立つ こ と が判 明 し た 。 上記従来知見に つ い て は 、 下記の 列挙する文献（1)〜（7)を参照 さ れた い 。
    [0006] (1 ) 石井 勝ほか ： Feto-Neop I ast ic ntigen
    [0007] に 関 す る研究 。 第 34回 日 本癌学会総会記事、 P.173 ( 1975 )。
    [0008] (2) 石井 勝 ： 諸種 悪 性腫瘍 に 存在 す る 新 胎 児 蛋 白 basic fetoprotein に 関 する研究 。 医学の あ ゆ み、 100 (3 ), 344- 346 (1977)。
    [0009] (3) 石井 勝 ： べ ィ シ ッ ク フ エ 卜 プ ロ テイ ン （ 塩基性胎児蛋 白 〉 。 医学の あ ゆ み、 106(5 ), 273-281 ( 1978 )。
    [0010] (4) Ishi i'H, ： A new care i noembryon ί c rotein character i zed by basic property. Scand . J. Immunol. , 8 ( Su p I - 8 ) ) , 61 ( 1 -620 ( 1978 ) 0
    [0011] ( 5 ) I s i i , H . ： Character i zat i on of basic feto rotein
    [0012] and cl inical usefulness of B F P for i mmu nod i ag nos i s of human cancer. Carci no -Embryonic Proteins. Chemistry, Biology, CI i n i c a I Appl ications, Vo I . 1， Le mann, Γ. -G. ( ed . ) , Elsevier/ orth-Hoi land Biomedical Press, Amsterdam, 333-340 (1979) Q
    [0013] (6) Ish i i , H. , Nishiniura. K. , Hattor！ , M. , a n d a . Y . and Ish i hara, Λ. ： Postoperative su rve i f i ance in patients with stomach cancer and monitoring of i mmu no-and po I ychemotherapy i n patients wit leukemia by basic fetoprotein. Care i no-Embryon i c Proteins. Chemistry, Biology, Cl inical Appl ications, Vol.2 Lehmann , F . -G . ( ed . ) , Fisevier / North-Hol land Biomedical Press, Amsterdam, 603-606 ( 1979 ) Q
    [0014] (7) I sh i i , H. ： Cl inical usefulness of basic feto rotein for immunodiagnosis of humancanccr. Compendium o f Assay for I mmu.nod i agnos i s of Human Cancer, Deveiopmen 【· in Cenccr Research, Herberman, R . B . (ed. ), Vol .1, Else ier/North-Hol land Biomedical Press, e w York,
    [0015] 45-50 (1979) 0
    [0016] (8) 第 6 回腫瘍マ ー カ ー 研究会 （ 昭和 61年 10月 20日 、 礼榥 ） プ ロ グ ラ ム ♦ 抄録集 111頁
    [0017] (9) 第 6 回腫癟マ — カ ー研究会 （ 昭和 61年 10月 20日 、 札榥 ） 記録 248〜 250 頁
    [0018] さ て 、 癌患者血清中 の B F P はそ の存在爆 が微修 で あ る た め に 、 そ の定 Mの た め に は 高感度測 定 法 の確 立 が必要で あ り 、 主 と し て R 1 A法お よ び E I A法 （ 酵素免疫測 定法 ） が 開発 さ れ て き た 。 R I A法 の 詳細 に つ い て は 上記文献 （ 3 )〜 （ 7 ) を 、 ま た 、 E I A 法の詳細 につ い て は下記文献 （ 10 )〜（ 1 υを参照 さ れ た い 。
    [0019] (10) 石井 勝ほか ： Basic Fetoprotein,現代臨床機能検査— そ の実際 と 解釈。 日 本臨床 37 ： 1536〜 1539, 1979。
    [0020] (11) 石丼 勝 ： 塩基性 フ エ 卜 ブロ ティ ン （Bas i c Fetoprotei n) 臨床検査 24 (8)： 931〜 936, 1980。
    [0021] そ の後 、 本発明者は モ ノ ク ロ ー ナル抗塩基性胎児蛋 白抗体を 得る こ と に成功 し た 。 当 該モ ノ ク ロ ー ナ ル抗体の作製並び に成 鑌につ い て は下記文献 （ 12 )を参照さ れた い 。
    [0022] (12) 石井 勝ほか ： Production of Monoclonal Ant i -Basic Feto rotein (BFP) and Usefu lness of Monoclona l Ant i -B FP for Immuno - d iagnosi s of Human Cancer, Tumor Research Vol .18 (Spec i a I Issue) . 1983, p75〜 86。
    [0023] さ て 、 上記 モ ノ ク ロ ー ナル抗体の B F P に対する反応特異性 につ いて E I A法 お よび M 0法を用 い て検討す る と 、 B F Pの 分子上に は少な く と も 3種のそれぞれ異な る抗原決定基が存在 し て お り 、 各抗原決定基に対応 し て モ ノ ク ロ ー ナ ル抗体 は 3種 類 に分類さ れる こ と が判 明 し た 。 3種の 抗原決定基を A , B , C と し 、 各抗原決定基 に 対応す る モ ノ ク ロ ー ナ ル抗体 を列記す れば 、 例 え ば以下の ご と く な る 。 抗原決定基 ノ ク ロ ー ナル抗休
    [0024] A 5C4, 5C5, 5C6, 7D1 , K1 B 5B3, 5C2 C 5A2, 5A3, 7D3, 8A2, 7B4,
    [0025] 5D6-2 , 8A1 , 7A5, 8A5 , 7B6 以上の知見 に 基づき 、 本発明者 は 、 こ れ ら モ ノ ク ロ ー ナ ル抗 体を使用 し たサ ン ド イ ッ チ法 に よ り 、 血清中 の B F Pを精度よ く 測定 す る方法 を確立す る に 至 っ た （ 特開 昭 60-80768号公報参 照 ） 。
    [0026] し か し な が ら 、 以上 に紹介 し た 測定 は 、 全て 血清 中 の B F P に 関 し て な さ れた も ので あ る 。 一方 、 B F Pが健常人及び各種 疾患患者の尿 中で検出 さ れた と い う 証拠 は こ れ ま で な い 。
    [0027] ま た 、 従来か ら 知 ら れて い る 腫瘍マ ー カ ー 、 例 え ば癌胎児性 抗原 （ C E A と 略記 ） 及び A F P等 は 、 そ れ ら の尿 中 の測定値 に関 し て 健常人 と 癌患者の 間で有意な差が認め ら れず 、 特 に 泌 尿器癌の診断 に於いて 有効 と さ れる腫瘍マ ー カ ー は こ れ ま で の 処知 ら れ て ない 。
    [0028] 本発明者 は 、 健常人及び各種疾患患者の尿 中 に も B F Pが存 在 す る こ と を発見 し 、 当 該蛋 白 の腫癟マ ー カ ー と し て の有用 性 につ い て 種々 の検討を行 な っ た 結果 、 本発明に 至 っ た も ので あ る 。
    [0029] [ 発明 の開示 ]
    [0030] 即ち 、 本発明の 目 的 は 、 各種癌 、 特 に泌屎器癌の診断及び治 療の経過観察な ど に極め て有用 な測定方法を提供す る も の であ り 、 該測定方法 は尿中 の B F P を検出 す る こ と を特徴 と す る も のであ る 。
    [0031] 本発明 の測定方法 は免疫学的測定法例えば E I A法及び R I A 法等の いずれも利用 で きる が 、 安全性 · 測定感度等の点か ら E I A 法が好ま しい 。
    [0032] [ 図面の簡単な説明 ]
    [0033] 第 Ί 図 は健常人 と良性泌尿器疾患に お け る尿及ぴ血清 B F P の測定結果を示す 。
    [0034] 第 2 図 は泌屎器癌 に お け る尿及び血清 B F P の測定結果 を示 す 。
    [0035] [ 発明を実施する た め の最良の形態 ]
    [0036] 更に 、 本発明 の よ り 好適な具体例 と し て 、 第一抗体及び第二 抗体 に モ ノ ク ロ ー ナ ル抗体を使用 す るサン ドィ ツ チ 法 に よ .る E I A 法を挙げる こ と ができる 。
    [0037] 以下 、 本発明 を 、 好適具体例であ る前記モ ノ ク ロ ー ル抗体 を用 い る E ί A法 （ サ ン ド イ ッ チ法 ） に 基づい て詳細 に 説明 す る 。
    [0038] 本発明 に よ っ て 測定 さ れる B F P は臓器特異性 の低い腫瘰マ — カ ー であ る こ と は前記 し た と お り で あ る 。
    [0039] 本発明 に 係る抗塩基性胎児蛋 白 モ ノ ク ロ ー ナル抗体 は例 え ば 次 の よ う に し て 作 製 す れ ば よ い 。 ま ず B F P を 感 作 せ し め た BALB/cマ ウ ス か ら 抗体産生細胞を用意 し 、 ミ エ ロ ー マ細胞 と し て P3-X63-Ag8-U1 を用 い て 、 こ れ と の 間 に Herzenbe rgら の変法 に よ り 細胞融合 す る 。 次 に H A T 培地 に よ り 選択 し た 融合細胞 か ら の抗体価を 125 I 標識 し た B F Pを用 い る プ レ ー 卜 バ イ ン デ イ ング ア ツ セ ィ に よ り 測定 す る 。 高抗体価を示 し 、 か つ 細胞 増殖の よ い融合細胞を 限界希釈法 に よ り ク ロ ー ニ ン グ し'、 高抗 体価を産生 す る細胞株 を数種類収得す る 。 最後 に 各細胞株 をマ ウ ス 腹腔 内 に 移植 し 、 得 ら れ た 腹水 を 硫 安 塩 祈 し 、 透 析 後 、 DEAE-cel lu loseに か け て I g G成分を集 め れ ば 、 本発明ぶ 係る 数種類の モ ノ ク ロ ー ナ ル抗体 を収得す る こ と がで き る 。 得 ら れ た モ ノ ク ロ ー ナル抗体を B F P の異な る 抗原決定基 に 対応 し て 分類す る た め に は下記 に 示す M O法 お よ び E I A 法 を 実施 す れ ば よ い 。
    [0040] M 0 法
    [0041] 二種類の モ ノ ク ロ ー ナ ル抗体 を Ί ： 1 の 比率を も っ て 混 合 し た も の を全て の モ ノ ク ロ ー ナル抗体の組合せ に つ いて用 意 し 、 M O 法に よ り こ れ ら 混合物 と B F P と の間 に お ける 沈降線の生 成並び に融合の有無を観察する 。 明瞭な沈降線が観察さ れる場 合 は組合せ に 係る モ ノ ク ロ ー ナル抗体はそれぞれ異なる抗原決 定基 に反応す る グル ープに 属 し 、 反対に沈降線が ま っ た く 観察 さ れない場合 は同 じ 抗原決定基に反応するグループ に属する 。 ま た 沈降線の生成が不明瞭で あ り 、 判定。が不確実で ある と き は 、 次の E I A 法に よ っ て判定 する 。
    [0042] E I A 法
    [0043] 実施例 1 記載 に お い て Π及び 5 C2 の代 り に任意に選択 し た二 種類の モ ノ ク ロ ー ナル抗体を使用 す る点を除い て実施例 Ί と同 様 に実施 し て調製 し た測定試薬を全て のモ ノ ク ロ ー ナル抗体の 組合せ に つ い て用 意する 。 E I A 操作を お こ な い発色値の吸光 度を読む 。 発色があ る場合は組合せ に 係る モ ノ ク ロ ー ナル抗体 はそれぞれ異な る抗原決定基 に 反応する グル ープ に属 し 、 反対 に発色がな い場合 は同 じ抗原決定基に 反応す る グル ー プ に属す る 。
    [0044] 以上 の ごと く M 0 法お よ び E I A 法 に よ り グルー プ分 け を お こ な う と前記 し た ご と く B F P に は三種の異な る 抗原決定基が あ り 、 モ ノ ク ロ ー ナル抗体 はそれぞれ に 反応する三 つ の グル ー プ に分類さ れる 。 測 定 系全体の 構成要素 は 固 相 、 固 相 コ ー 卜 用 抗 体 （ 第 一 抗 体 〉 、 B F P ( 標準抗原お よ び被検尿 ） 、 標識用 抗体 （ 第二抗 体 ） 、 酵素お よ び基質で あ る 。 固相 と し て は ェ ンザィ ム ィ ム ノ ア ツ セ ィ 用 のマ イ ク ロ タ イ タ ー プ レ ー 卜 の ゥ エ ル又 はプラ ス チ ッ ク ビ ー ズ を用 い れ ば よ い 。 測 定 に 先立 ち 固 相 コ ー ト 用 抗 体 ( 第一抗体 ） と し て 本発明 に 係る モ ノ ク ロ ー ナル抗体 の 一種を 任意 に 選択 し 、 蛋 白濃度 と し て の 0 D 28Qnm が 0.050と な る よ う に 0.1M炭酸ナ ト リ ウ ム緩衝液 （ PH 9.0) に 溶解 し 、 例 え ば ポ リ ス チ ロ ー ル性ェ ンザィ ム ィ ム ノ ア ッ セ ィ 用 ゥ ： I ル又 はブラ ス チ ッ ク ビ ー ズ に入れ 、 4 で 一夜放置すれば 、 固相 表面 は第 一抗体 に よ っ て コ ー 卜 さ れる 。 標準抗原 は肝癌患者か ら 得 た 腹 水を精製処理 し て精製 B F Pを用 意 し 、 標準抗原希 ^ 液を用 い て 所定の濃度 に 調製 し た も の を使用 し た 。 標識用 抗体 （ 第二抗体 ） と し て は第一抗体が反応 す る 抗原決 定基 と異な る抗原決定基 と 反応す る本発明 に 係る モ ノ ク ロ ー ナ ル抗体を選択 す る 。 ま た 酵素 と し て は例 え ば アル カ リ ホ ス フ ァ タ ー ゼ ， グル コ ー ス 才 キ シ ダ ー ゼ ， ペル 才 キ シ ダ ー ゼ ， ベ ー タ ガ ラ ク 卜 シダ ー ゼ等を使用 す る こ と がで き る 。 測定 に 先立ち グ 一.„_― " -—―
    [0045] ル タ ー ル ア ルデ ヒ ドの ご と き結合剤 を も っ て 標識用 抗体 に 酵素 を結合せ し めて酵素標識抗体 と し 、 本発明測定方法の実施のた め の試薬の一部 と し て あ ら か じ 準備 し て お く こ と がで きる 。 基質は選択 し た酵素 に 応 じ て 適宜使用 す,れぱよ い 。 例 え ば酵素 と し て アルカ リ ホス フ ァ タ ーゼを選択 し た場合に お い て は P -二 卜 口 フ エ ニルホス フ エ一 卜等を使用 すればよ い 。
    [0046] 測定 は E I A 法 に お け る通常の手照に従 っ て実施すればよい 。 従 っ て後記実施例 に おい て示さ れる ご と く 、 第一抗体を コ ー ト し た ゥ ヱ ル に標準抗原 ま た は被検尿を加え て イ ン キ ュ ベ ー 卜 し 、 続いて 酵素標識抗体 、 例 え ぱ第二抗体 一 アル カ リ ホ ス フ ァ タ ーゼ標識抗体を加 えて イ ンキ ュ ベ ー ト し 、 最後に 基質、 例 えば P -ニ ト ロ フ エ ニルホ ス フ ェ ー ト を加えて イ ンキ ュ ベ ー ト し 、 基 質の分解量を分光光度計を用 い て 測定 すればよ い 。
    [0047] な お 、 固相 に コ ー 卜す べ き第一抗体は単一種の モ ノ ク ロ ー ナ ル抗体であ っ て も よ い が 、 複数種の モノ ク ロ ー ナル抗体を混合 し た物であ っ て も よ い 。 要は第一抗体 と第二抗体 と がそ れぞれ 別個 の抗原決定基 と 反応する物で あればよ く 、 各抗体が単一種 の モ ノ ク ロ ー ナル抗体よ り 構成さ れる か 、 あ る い は複数種の モ ノ ク ロ ー ナル抗体よ り 構成さ れる かは本発明 に お い て特に 陧定 す べき要件で はない 。
    [0048] 以上、 モ ノ ク ロ ー ナル抗体を用 い る場合に つ いて説明 し て き た が 、 本発明 に お い て は 、 抗体はモ ノ ク ロ ー ナル抗体に 限 ら れ ず 、 従来の ポ リ ク ロ ー ナル抗体を用 い る こ と もで き る 。
    [0049] 従 っ て 、 本発明 の も う 一 つ の 目 的は 、 尿 中 B F P を測定 す る た め に 用 い る 測定 キ ッ 卜 を提供 す る こ と で あ る 。 該キ ッ 卜 は 、 第一抗体 、 標識第二抗体、 固相及び標準塩基性胎児蛋 白 抗原を 含む。
    [0050] 以下 に 記載す る実施例 を も っ て 本発明 を さ ら に 具体的 に 説明 す る 。
    [0051] 実 施 例
    [0052] B F P の異な る抗原決定基 に そ れぞれ反応す る二種類の モ ノ ク ロ ー ナル抗体 K1 お よ び 5C2 を 含有す るマ ウ ス腹水各 に 飽和硫安 （ 4.05M ) を最終濃度 1.8M に な る よ う に 加 え 、 室温 で 2 時間攪拌 す る 。 内容物 を 12, 000 rpmで 20分 間遠心 し て 沈渣 と 上 清 を 分離 す る 。 沈渣を 溶解 し た 緩 衝 液 で 透 析 す る 。 次 に DEAE-cel lu loseカ ラ ム に かけ 、 0.1M リ ン酸緩衝液 （ 以下 P B と 略記 ） （PH 8.0)で 1 g G 成分を溶出 さ せる 。 溶出 I g G 成分 を コ ロ ジ オ ンバ ッ ク （ M W 12000 )で 濃縮 し 、 K1お よ び 5C2 を用 意す る 。 Π を 0.1M 炭酸ナ ト リ ウ ム緩衝液 （ PH 9.0) に 蛋 白 濃度 と し て の O D 280nm が 0.05と な る よ う に 溶解 し 、 ェ ン ザ ィ ムィ ム ノ ア ッ セ ィ 用 マ イ ク ロ タ イ タ ー プ レ ー 卜 の ゥ エ ル に 注入 一 Ί 2 - し 、 一夜放置後排液 し 、 炭酸ナ ト リ ウ ム緩衝液 （ ΡΗ 9.0) で洗浄 し 、 ゥ エ ル乾燥機に て乾燥 し 、 固相化第一抗体 と する 。
    [0053] 他方、 酵素標識抗体の作製は下記 に よ っ て行 っ た 。 グルタ ー ル アルデ ヒ ド を 1.25%含む 0.1Μ リ ン酸緩衝液 （ ΡΗ 6.8) に ヮ サ ビ ペル才キ シダ ー ゼ を溶解 し 、 室温にて 20時間反応さ せた後、 生食水に て透析する 。 この溶液 と あ ら じ め生食水に て透析 し た モ ノ ク ロ ー ナル抗塩基性胎児蛋白抗体、 5C2 溶液を等量混和 し 、 こ れに 1Μ 炭酸緩衝液 （ ΡΗ 9.5 ) を 5% の割合に な る よ う に添 加 し 、 4 °C、 24時藺静置す る 。 次いで 、 0.2M リ ジ ン溶液を 5 の割合で加 え 、 室温 2 時間放置後生食水に て透析する 。 その後 、 0.05 M リ ン酸緩衝液 （ PH 7.4 ) に て透析 し 、 ヮサ ビ ペル才キシ ダ ーゼ標識抗塩基性胎児蛋 白 抗体を作製 し た 。
    [0054] 別 に 反応希釈液， 発色液， 反応停止液お よび標準抗原希釈液 を以下の よ う に 調製する 。
    [0055] 反応希釈液 は 正 常仔牛血清 ， 正 常マ ウ ス 血清 （ 非働化処理 56Ό , 30分間 ） ， E叮 A 3Na, 塩化ナ ト リ ウム ， ア ジ化ナ ト リ ウ ムを 0.05M 卜 リ ス塩酸緩衝液 （ PH 8.0 ) 中 に各々 11.8% , 2% , 10mM, 0.15 , 0.1% と な る よ う に 含有せ し め て調製する 。
    [0056] 発色液 は 2, 2， - ア ジ ノ ビス （ 3-ェチルベ ンゾチアゾ リ ン - 6- スルホ ン酸 ） 二 ア ン モニ ゥム （ ABTS) を 0.1M ク ェ ン酸緩衝液 (pH 4.0)中 に 3 ^ ^ と な る よ う に 含有せ し め 、 さ ら に過酸化 水素を 0.02% の割合 に な る よ う に 加 え て 調製す る 。
    [0057] 反応停止液 と し て は 0. 01 % の ア ジ化ナ ト リ ウ ム を 含む 0. 1 M ク ェ ン酸 リ ン酸緩衝液 （ PH 4.0 ) を用 い る 。
    [0058] 標準抗原希轵液 は正常仔牛血清 （ 非働化処理 56 ， 30分 間 ） ， EDTA 3Na， 塩化ナ ト リ ウ ム ， ア ジ化ナ ト リ ウ ム を 0.05M 卜 リ ス 塩酸緩衝液 （pH 8.0)中 に各々 18. 1 % , 10mH, 0. 1 % と な る よ う に 含有せ し め て 調製す る 。
    [0059] ま ず検体お よ び既知濃度の標準抗原を反応希釈液 に よ っ て 11 倍希釈 し 、 あ ら か じ め 洗净 し た ゥ ヱ ルに ず つ 注入 し 、 37 で で 1 時間イ ンキ ュ ベ ー シ ョ ン し た 。 生 食水で洗净 し 、 次 に 至 適濃度の酵素標識抗体 を加 え 、 37 で 1 時間 イ ン キ ュ べ ー シ ヨ ン し た 。 再び生 食水で洗净 し 、 発色液 100 ^を加 え 、 37 。C で 1 時間 イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン し た 。 0. 01 % ア ジ化ナ 卜 リ ウ ム 液 を加 え て 反応を停止さ せ 0 D 42Qnffl 吸光値を測定 し 、 B F P 値を算出 し た 。
    [0060] 検体 の 内訳 は健常人 26例 ， 良性泌尿器疾患症例 45例 ， そ の他 の良性疾患症例 27例 ， 泌尿器癌症例 27例 ， そ の他の癌症例 6 例 ， 泌尿器癌術後再発例 11例 の計 142例であ る 。 尿 は 随時尿 を採取 し 、 ア ジ化ナ 卜 リ ウ ム添加 に て 4 C 保存 し た 検体を使用 し 、 血 - Ί 4 一
    [0061] 清は採尿 と同時に採血 し た周一症例の検体を使用 し た 。
    [0062] 健常人 26例 における尿中 B F Ρ平均値は 2.6 ng/ ^で平均値 + 2SD は 7.3 ng/ であ っ た 。 良性疾患 と癌症例の測定成績か ら cut-off 値を 20 ng/ と した 。 一方、 血清 B F P の cut:-oif 値は 75 g i と した 。
    [0063] 尿 B F Pおよび血清 B F Pの陽性率はそれぞれ、 良性泌尿器 疾患で 11% , 0 % , その他の良性疾患で 0% , 18.5% , 泌尿器 癌で 48% , 33% , その他の癌疾患で 17% , 33% , 泌尿器癌術後 ' 再発例で 2796 , 25 %であ っ た。 尿 B F P の泌尿器癌に おける'陽 性率の内訳は、 膀胱瘙 70% (7/10)、 尿管癌 100% (2/2) 、 前立 腺癌 2596 (2/8) 、 腎癌 3390 (2/6) 、 睾丸癌 0% (0/1 ) であ り 、 特に膀胱癌及び尿管癌の尿路癌に於いて 、 血清 B F P と較べて その陽性率が著 し く 高い こ とが判る 。 以上の結果を第 1 図及び 第 2 図 に示 した 。 図中 、 U 及び S は夫々尿 B F P値及び血清 B F P値を示す。
    [0064] 尿 B F P値と血清 B F P値は全く 柜関が認め ら れなかっ た 。 尿 B F P と血清 B F P の両者の Combi nation assay に よ る陽性 率は泌尿器癌において 70% に向上 した 。 その内訳をみる と 、 賢 癌は 83% (5/6) 、 前立腺癌は 50% (4/8) 、 睾丸癌は 100% ( 1 / 1 ) に向上 した 。 ま た 、 B F P 値への血尿 の影響を検討 し た が 、 尿沈渣 に お け る赤血球数 と 尿 B F P 値 と の 間 に は相関 は な か っ た 。 溶血尿 は 膀胱炎 、 前立腺肥大症の 2 症例 に み ら れた が 、 尿 B F P 値 は そ れぞれ 164.7 ng/ wi , 14.9 ng/ で あ っ た 。
    [0065] [ 産業上の利用 可 能性 ]
    [0066] こ の よ う に 、 尿 B F P は泌尿器癌で高い陽性率を示 し 、 と り わ け膀胱癌、 尿管癌 に 特異性の髙ぃ腫瘍マ ー カ ー と 考え ら れる 。 さ ら に 本発明方法 と 血清 B F P と の Combi nat ion assay に よ り 賢癌、 前立腺 に お け る 陽性率が著 し く 向上 し 、 泌尿器 の 診断 に お け る高い有用 性 が示さ れた 。
    [0067] 以上の記載か ら 明 ら かな よ う に 、 本発明 の 測定方法 は 、 癌、 特 に 泌尿器癌の ス ク リ ー ニ ン グ 、 診断及び治療の経過観察 に 於 い て 極め て 有用 な デ ー タ を提供 し 得る も ので あ る 。
    权利要求:
    Claims

    請 求 の 範 囲
    . 抗塩基性胎児蛋白抗体を使用する抗原抗体反応に基づく 尿中の塩基性胎児蛋白 の測定方法。
    2 . 前記抗原又は抗体が酵素標識さ れている こ と を特徴とす る請求の範囲第 1 項に記載の測定方法。
    3 . 前記抗塩基性胎児蛋白抗体を使用する抗原抗体反応をサ ン ドイ ッ チ法で行なう こ とを特徴と する請求の範囲第 1 又は 2 項に記載の測定方法。
    4 . 前記抗塩基性胎児蛋白抗体が夫々特異性の異なる第一モ ノ ク ロ ーナル抗体および第二モノ ク ロ ー ナル抗体から成るこ と を特徴 とする請求の範囲第 3 項に記載の測定方法。
    5 . 請求の範囲第 1 項の測定方法を実施するため に用いる測 定キ ッ 卜であ っ て 、 第一抗塩基性胎児蛋白抗体、 標識第二抗塩 基性胎児蛋白抗体、 固相及び標準塩基性胎児蛋白抗原を含み、 第一抗体及び第二抗体の反応する抗原決定基が異なるものであ るこ とを特徴と する前記測定キ ッ 卜 。
    6 . 第一抗体及び第二抗体がモノ ク ロ ーナル抗体である こ と を特徴とする請求の範囲第 5 項に記載のキ ッ ト 。
    7 . 標識物質が酵素である こ と を特徴とする請求の範囲第 5 又は 6項に記載のキッ 卜 。
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    同族专利:
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    DE3887314D1|1994-03-03|
    EP0328664B1|1994-01-19|
    DE3887314T2|1994-05-11|
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    EP0328664A1|1989-08-23|
    KR890702040A|1989-12-22|
    KR960011098B1|1996-08-20|
    引用文献:
    公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题
    法律状态:
    1989-02-09| AK| Designated states|Kind code of ref document: A1 Designated state(s): KR US |
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    1989-08-23| WWP| Wipo information: published in national office|Ref document number: 1988906110 Country of ref document: EP |
    1994-01-19| WWG| Wipo information: grant in national office|Ref document number: 1988906110 Country of ref document: EP |
    优先权:
    申请号 | 申请日 | 专利标题
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