台湾专利TW201314207A 依據補體c3蛋白質的糖鏈測定的阿爾茨海默氏型癡呆症的診斷套組、診斷標記以及檢測方法

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【課題】本發明涉及阿爾茨海默氏型癡呆症的早期檢測。【解決手段】本發明提供一種診斷套組用於診斷阿爾茨海默氏病，診斷套組具有一糖鏈檢測單元，糖鏈檢測單元用於定量檢測一糖鏈的量，其中該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質。另外，提供一種診斷標記用於診斷阿爾茨海默氏病，診斷標記含有一糖鏈的量，該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質。還提供一種檢測方法用以檢測阿爾茨海默氏病的症狀指標，該檢測方法包含定量檢測一糖鏈的量的步驟，該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質。
公开号:TW201314207A
申请号:TW101128365
申请日:2012-08-07
公开日:2013-04-01
发明作者:Katsuya Urakami；Miyako Kimura
申请人:Nat Univ Corp Tottori Univ；
IPC主号:G01N33-00

专利说明:
依據補體C3蛋白質的糖鏈測定的阿爾茨海默氏型癡呆症的診斷套組、診斷標記以及檢測方法
本發明涉及依據補體C3蛋白質的糖鏈測定的阿爾茨海默氏型(Alzheimer's)癡呆症的早期檢測。
在日本，近年隨著人口的高齡化，老年癡呆症成為一個重大的社會問題。現在，65歲以上的人中，每10人就有1人是癡呆症患者，對認知功能有障礙的高齡者目前有130萬人，預計在2035年達到300萬人。癡呆症中大多為腦血管性癡呆症和阿爾茨海默氏病(AD;Alzheimer's disease)，阿爾茨海默氏病占其中的約半數。對於腦血管性癡呆症，能夠進行血壓管理、再復發預防等醫學處理，而對於阿爾茨海默氏病，其原因、治療法、預防法尚不明確，急待醫學上解決。另外，除阿爾茨海默氏病以外的癡呆症中，除上述的腦血管性癡呆症以外，特別還有總稱為Tau病(tauopathy)的癡呆症(額顳葉變性症、路易體癡呆症、皮層基底節變性症、進行性核上性麻痺等)，由於這些呈現與阿爾茨海默氏病類似的症狀，所以是一種很難與阿爾茨海默氏病進行鑑別的癡呆症。如果能夠在產生障礙的癡呆症狀出現之前與其他的癡呆症區別從而對阿爾茨海默氏病進行鑑別診斷，則能夠在更早期開始目前所嘗試的治療法，能夠延緩癡呆症的惡化，因此，確立阿爾茨海默氏病的早期診斷法是現今社會的當務之急。
在阿爾茨海默氏病患者中，能夠發現大腦皮質的萎縮，在病理學上除了能夠觀察到高度的神經細胞脫落以外，還能夠觀察到老年斑、神經原纖維變化等特徵的病變。其中，由於老年斑最先出現，其屬於阿爾茨海默氏病的最具特徵的變化，所以認為老年斑的出現是阿爾茨海默氏病的最重要變化。老年斑的主要構成成分為澱粉狀(amyloid)β蛋白質(Aβ)，在顯示常染色體顯性遺傳的家族性阿爾茨海默氏病中，由於變異為作為Aβ的前體基因的澱粉狀前體蛋白質(APP)等，所以認為Aβ的產生或分解的異常與阿爾茨海默氏病的併發症以及進展密切相關。Aβ是對澱粉狀前體蛋白質經2次切斷而產生，其分別為，利用屬於天冬氨酸(aspartic acid)蛋白酶的β-分泌酶和γ-分泌酶(早老素(presenilin)複合體)進行切斷而產生。
作為阿爾茨海默氏病的治療藥，已知有乙醯膽鹼酯酶抑制劑，其發揮補充不足的乙醯膽鹼的作用，另外，還有正在開發中的其他依據上述機理的各種信號傳達標靶藥物。
對於阿爾茨海默氏病(阿爾茨海默氏型癡呆症)的診斷而言，診斷是否在臨床上滿足各種診斷基準。因此，進行如下所述的詳細問診，即，臨床症狀、神經心理學的檢查、生理學的檢查、腦功能圖像檢查等各種檢查。但是，阿爾茨海默氏病的病初期幾乎沒有特別異常的檢查結果，由於需要對本人和家族進行徹底的依據問診和診察的排出診斷，因此現狀是病症的判斷很大程度取決於專門的醫生。實際上在阿爾茨海默氏病初期，能夠發現性格的改變、說話發聲困難、記憶力減退、忘記物體放哪、忘記人名等症狀，但正確區分病初期的病的“健忘”與由於年齡增長導致的健忘(生理的健忘)是非常困難的。這也是很難早期發現阿爾茨海默氏病的主要問題點。
現在，藉由神經心理學檢查、圖像診斷、神經生理學的檢查、生物學的檢查等綜合的進行阿爾茨海默氏病的診斷。作為神經心理學檢查，有mini-mental state examination(MMSE)、修正版長穀川式簡單認知功能評定量表(HDS-R)、Alzheimer’s disease assessmentscale(ADAS-cog)等。作為圖像診斷，有computed tomography(CT)、magnetic resonance imaging(MRI)、singlephoton emission computed tomography(SPECT)、positronemission tomography(PET)等。對於阿爾茨海默氏病，能夠用SPECT、PET從早期確認後扣帶回的腦血流降低、氧代謝以及糖代謝的降低，在進行確認的同時，顳葉(temporallobe)、頂葉的腦血流、糖代謝逐漸降低。
早期，出於篩查多人的目的，認為最有效的是能夠簡便且可靠地檢測出阿爾茨海默氏病的生物學診斷標記(marker)。如果藉由確立阿爾茨海默氏病的診斷標記而能夠進行早期診斷或發病前診斷的話，則能夠做出根據確定診斷的投藥、治療的計畫，還能夠為預防阿爾茨海默氏病鋪開一條道路。同時，藉由這些早期診斷，還能夠控制阿爾茨海默氏患者的醫療和看護所需要的大量的費用。因此，迫切期望發明或開發出能夠簡便且可靠地檢測阿爾茨海默氏病的診斷標記。
診斷標記是反映阿爾茨海默氏病的症狀，並且，必須使檢測阿爾茨海默氏病的靈敏度及特異度均高的標記。作為阿爾茨海默氏病的診斷標記，至今國內外的許多研究組提出了各種方法。作為阿爾茨海默氏病的診斷標記，例如已提出了澱粉狀β蛋白質、糖鏈化乙醯膽鹼酯酶、白細胞介素-6、P-物質、胱抑素C、血清載脂蛋白、血清同型半胱氨酸、APP亞型、白細胞介素-6、α1-抗糜蛋白酶(ACT)、氧酶-1、24S-羥基膽固醇、乙醯膽鹼、生長抑素、垂體後葉素、乙醯膽鹼轉移酶活性、乙醯膽鹼酯酶活性的測定等。
非專利文獻1中記載了阿爾茨海默氏病的WGA鍵合蛋白質的量的變化。另外，非專利文獻2中記載了脊髓液中的補體C3蛋白質的量的變化。
但是，這些多數報告中的大多數診斷標記與病理變化的關係不明確，未必能確立診斷的價值。目前，作為可確認臨床上的有用性的阿爾茨海默氏病的診斷標記，認為只有腦脊髓液中Tau蛋白、磷酸化Tau蛋白和澱粉狀β42這2種。
Tau蛋白係在阿爾茨海默氏病患者的腦中產生的神經原纖維變化這種病理學的變化的原因的物質。在阿爾茨海默氏病的脊髓液中，磷酸化Tau蛋白(或總Tau蛋白)會增加，藉由測定該蛋白質，能夠有助於阿爾茨海默氏病的診斷。
作為診斷標記使用的澱粉狀β蛋白質主要是Aβ42，係由42氨基酸形成的澱粉狀β肽(amyloid β peptide， Aβ)的一種，係在阿爾茨海默氏病患者的腦中產生的顯現老年斑這種病理學變化的原因物質。由於阿爾茨海默氏病患者的腦中澱粉狀β蛋白質凝聚，形成老年斑，因此，脊髓液中的Aβ42反而減少，藉由對其進行測定，能夠有助於阿爾茨海默氏病的診斷。
【非專利文獻1】Lisa R.Fodero，JavierSaez-Valero， Maria-Sagrario Barquero， Alberto Marcos， Catriona A.McLean and DavidH.Small;“Wheat germ agglutinin-binding glycoproteins are decreased inAlzheimer’s disease cerebrospinal fluid.”， Journal ofNeurochemistry， 2001，79，1022-1026【非專利文獻2】William TH et al.，Biomarker discovery for Alzheimer’s disease，frontotemporal lobar degeneration， and Parkinson’sdisease. Acta Neuropathol. ，2010
關於使用了Tau蛋白的阿爾茨海默氏病的診斷，由於伴隨著神經原纖維變化的磷酸化Tau蛋白的增加引起的癡呆症不限於阿爾茨海默氏病，因此有必要與其他癡呆症(Tau病(tauopathy))進行區別。另外，作為另一課題，在磷酸化蛋白上升的時期神經細胞已持續死亡，因此，即便在該時期開始治療也無法恢復完全的神經功能。
另外，作為診斷標記使用的澱粉狀β蛋白質，雖然與阿爾茨海默氏病後期的嚴重化相關，但個體之間存在較大差異，並不因阿爾茨海默氏病而一律減少。另外，澱粉狀β蛋白質的減少與阿爾茨海默氏病特異性並不一定相關。
另外，發現阿爾茨海默氏病患者的脊髓液(CSF)中含有的被糖蛋白質修飾的唾液酸減少(非專利文獻1)，可期待作為用於阿爾茨海默氏病診斷的新的標記，但是，存在著蛋白質並未鑒定到、反復冷凍解凍時唾液酸變得不穩定等問題。另外，可發現阿爾茨海默氏病患者的CSF中的補體C3蛋白質的量發生變化(非專利文獻2)，可期待作為用於阿爾茨海默氏病診斷的新標記，但由於CSF中的補體C3蛋白質的量的變化係在各種疾病中都能發現的變化，並不是對阿爾茨海默氏病有特殊變化，因此認為用於阿爾茨海默氏病的診斷的可能性低。
作為理想的標記，能夠在神經細胞死亡前進行診斷，能夠進行阿爾茨海默氏病併發症前的診斷為佳，能夠與正常腦、其他癡呆症進行鑑別診斷，並且能夠簡便篩查多個為更佳。然而，如上所述，目前提出的標記均與理想的標記之間差距甚遠，阿爾茨海默氏病的確定診斷不充分，目前還沒發現用於阿爾茨海默氏病診斷的決定性標記。
本發明鑒於以上情況而完成，其目的在於開發用於阿爾茨海默氏病的診斷的有效性高的新的診斷套組(kit)、診斷標記以及檢測方法。
本發明提供一種診斷套組，係用於診斷阿爾茨海默氏病的診斷套組，其一糖鏈檢測單元，糖鏈檢測單元用於定量檢測一糖鏈的量，其中該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質。對於患有阿爾茨海默氏病的患者，以體液中的補體C3蛋白質為來源的糖鏈的量發生變化，這在後述的實施例中得到證實。因此，藉由使用該診斷套組，能夠進行阿爾茨海默氏病的早期診斷、阿爾茨海默氏病與呈現類似症狀的其他癡呆症的鑑別診斷。
另外，根據本發明，提供一種診斷標記，係用於診斷阿爾茨海默氏病的診斷標記，含有一糖鏈的量，該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質。對於患有阿爾茨海默氏病的患者，以體液中的補體C3蛋白質為來源的糖鏈的量發生變化，這在後述的實施例中得到證實。因此，該診斷標記能夠具有如下所述的作為標記的作用:能夠進行阿爾茨海默氏病的早期診斷、阿爾茨海默氏病與呈現類似症狀的其他癡呆症的鑑別診斷。
另外，根據本發明，提供一種檢測方法，是阿爾茨海默氏病的症狀指標的檢測方法，包含定量檢測一糖鏈的量的步驟，該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質。對於患有阿爾茨海默氏病的患者，以體液中的補體C3蛋白質為來源的糖鏈的量發生變化，這在後述的實施例中得到證實。因此，藉由使用該檢測方法，能夠進行阿爾茨海默氏病的早期檢測、進行與呈現類似於阿爾茨海默氏病的症狀的其他癡呆症區別檢測。
上述診斷套組、診斷標記以及檢測方法只不過是本發明的一個實施方式，根據本發明，還提供利用它們的阿爾茨海默氏病的診斷方法。【發明效果】
本發明能夠進行與阿爾茨海默氏的症狀相關性高的診斷。
本發明人等進行深入研究，結果發現藉由定量檢測以體液中的補體C3蛋白質為來源的糖鏈的量，能夠可靠的診斷阿爾茨海默氏病。另外發現，藉由結合已知的阿爾茨海默氏病診斷標記，能夠綜合診斷阿爾茨海默氏病。進而發現，定量地檢測上述糖鏈中的甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量，並由其量比例能夠簡單且迅速診斷阿爾茨海默氏病。
以下，對本發明的實施方式進行詳細說明。應予說明，為了避免重複繁瑣，對相同的內容省略摘示說明。
<診斷套組> 本發明的實施方式相關的診斷套組，係用於診斷阿爾茨海默氏病的診斷套組，該診斷套組具有一糖鏈檢測單元，該糖鏈檢測單元用於定量檢測一糖鏈的量，其中該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質，根據該診斷套組，能夠進行阿爾茨海默氏病的早期診斷，或者，能夠進行阿爾茨海默氏病與呈現類似症狀的其他癡呆症之間的鑑別診斷。
本實施方式中的“補體C3蛋白質”係指體液中所含的介由免疫反應的一組蛋白質中的一種成分。補體C3蛋白質係由116 kDa的α鏈與70 kDa的β鏈的二倍體構成的糖蛋白質。對於α鏈，對序列號268的天冬醯胺(asparagine)修飾Man8-9GlcNAc2的N-鍵合型糖鏈，對於β鏈，對序列號63的天冬醯胺修飾Man5-6GlcNAc2的N-鍵合型糖鏈(Crispin MD et al.，(2004) Monoglucosylated glycans in the secreted human complementcomponent C3: implications for protein biosynthesis and structure. FEBS Lett566， 270-274 以及 Hase S et al.，(1985) Structures of sugar chains of the third component of humancomplement. J Biochem 98， 863-874.)。補體C3蛋白質通常為非活性的前體型，但輔助病原體的排除時，分解為C3a(分子量9000)和C3b(分子量185000)，成為活性型。已知補體C3蛋白質是各種疾病的原因，且測定血中的補體C3蛋白質的檢查已經實用化。從其含量與活性的觀點出發，一直對阿爾茨海默氏病與補體C3蛋白質的相關性進行各種研究，但補體C3蛋白質；與源自於其的糖鏈的相關性至今尚不明確。
如在後述的實施例中證實的那樣，對於患有阿爾茨海默氏病的患者，以體液中的補體C3蛋白質為來源的糖鏈的量發生變化。因此，例如，定量檢測上述糖鏈的量、並且能夠確認變化的情況下，診斷為阿爾茨海默氏病的可能性高。但並不局限於此，即便涉及有關阿爾茨海默氏病的其他症狀或狀態，也能藉由該技術領域的醫師所熟知的日常方法進行測定，能夠使用本實施方式的診斷套組容易地獲得這些症狀指標。
本實施方式中的“阿爾茨海默氏病”可以說是發現大腦皮質的萎縮、病理學上高度的神經細胞脫落、並且能夠觀察到老年斑、神經原纖維變化等特徵的病變的癡呆症，將由阿爾茨海默氏病引起的癡呆症叫作阿爾茨海默氏型癡呆症。由於這些病變中老年斑在最早期出現，而且這一現象是阿爾茨海默氏病的特徵性變化，所以也認為是阿爾茨海默氏病的最重要的變化。老年斑的主要構成成分為澱粉狀β蛋白質(Aβ)，在顯示常染色體顯性遺傳的家族性阿爾茨海默氏病中變異為作為Aβ的前體基因的澱粉狀前體蛋白質(APP)等，所以認為Aβ的產生或分解的異常與阿爾茨海默氏病的併發症及進展密切相關。Aβ是從澱粉狀前體蛋白質經由2次因屬於天冬氨酸蛋白酶的β-分泌酶與γ-分泌酶(早老素複合體)引起的切斷而產生的。阿爾茨海默氏病的診斷藉由是否滿足依據臨床症狀、神經心理學的檢查、生理學的檢查、腦功能圖像檢查的各種的診斷基準來進行診斷。
本實施方式中的“哺乳動物”係指任意的哺乳動物，包括人、家畜用動物、寵物用動物、動物園用動物或者體育用動物，例如包括狗、貓、牛、豬、馬、羊、兔等。哺乳動物優選為人。
本實施方式中的“定量檢測”意味著根據例如濃度、強度、泳動度、移動度等數值數據而進行的檢測。另外，其他的實施方式中“定量檢測”意味著根據例如藉由濃度的調節、檢測靈敏度的調節、閾值的設定等得到的數值數據的有無來進行的檢測。
本實施方式中，“糖鏈檢測單元”也可以是多個糖鏈檢測單元。多個糖鏈檢測單元可以是例如為了進行多面分析而相互不同的糖鏈檢測單元、例如出於統計學上得到可靠性的數據的目的之相同或者類似的糖鏈檢測單元、或者它們的組合。
另外，在本發明的另一個實施方式所涉及的診斷套組中，將相對於健康哺乳動物的上述糖鏈的量的、與上述哺乳動物同種的上述受驗體的上述糖鏈的量表示為阿爾茨海默氏病的症狀指標。藉由採用以健康哺乳動物的上述糖鏈的量為對照(control)，能夠可靠地診斷阿爾茨海默氏病。
例如，與上述受驗體相同種類的健康哺乳動物的上述糖鏈的量相比，可觀察到有意減少受驗體的上述補體C3蛋白質的糖鏈的量的情況下，診斷為阿爾茨海默氏病的可能性高。但並不局限於此，即便涉及有關阿爾茨海默氏病的其他症狀或狀態，也能藉由該技術領域的醫師所熟知的日常方法來測定，使用本實施方式的診斷套組能夠容易地獲得這些症狀指標。
本實施方式中的“阿爾茨海默氏病的症狀指標”係指涉及包含例如阿爾茨海默氏病或阿爾茨海默氏型癡呆症的併發症等的阿爾茨海默氏病的狀態的標記。在此，阿爾茨海默氏病的症狀標記係指包括例如，阿爾茨海默氏型癡呆症的併發症危險度的預測、阿爾茨海默氏病的早期診斷或早期予知、腦功能障礙程度的推斷、症狀把握、經過的預測、治療結果的觀察或評價、治療後的預測等標記。另外，阿爾茨海默氏病的症狀標記也可組合多個。由此，能夠得到更可靠地診斷結果。關於上述症狀及表示該症狀的參數等，能夠由該技術領域的醫師藉由所熟知的日常方法容易地進行測定。
本實施方式中的“有意”意味著p值(U檢驗，兩側檢驗)優選為<0.05，更優選為<0.01，最優選為<0.001。
本實施方式中的“健康哺乳動物的上述糖鏈的量”可以根據預先測定的數據而得到。對健康哺乳動物實施的測定方法以及條件沒有特別限定，但優選與對受驗體實施的測定方法以及條件相同。另外，只要是對得到的診斷結果沒有影響的範圍內的話，即使對健康哺乳動物實施的測定方法以及條件與對受驗體實施的測定方法以及條件不同也在本實施方式的範圍內。
另外，對於本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，上述糖鏈的量為綜合糖鏈中的甘露糖量和N-乙醯葡糖胺(N-acetyl glucosamine)量而得到的值。藉由將綜合上述糖鏈中的甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量而得到的值作為阿爾茨海默氏病的症狀指標，從而明確了作為對照的健康哺乳動物與受驗體的差值，能夠可靠地診斷阿爾茨海默氏病。優選上述綜合得到的值是藉由進行通常使用的統計處理而得到的值，且上述統計處理使得與作為對照的健康體的差變明確，但不限定於特定的統計處理。
另外，作為本發明的另一個實施方式相關的診斷套組，上述綜合得到的值為藉由乘算而得到的值。藉由將由上述乘算得到的值作為阿爾茨海默氏病的症狀指標，能夠藉由簡易之統計處理，使其與作為對照的健康體間的差值更明確，並可靠診斷阿爾茨海默氏病。
另外，對於本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，進一步具有定量檢測阿爾茨海默氏病的已知標記的檢測單元。藉由組合上述糖鏈的量與上述已知的標記量，能夠可靠地診斷阿爾茨海默氏病。
作為上述已知標記，可例示澱粉狀β蛋白質、糖鏈化乙醯膽鹼酯酶、白細胞介素(Interleukin)-6、P-物質(substanceP)、胱抑素C(cystatin C)、血清載脂蛋白(apolipoprotein)、血清同型半胱氨酸(homocysteine)、APP亞型(isoform)、白細胞介素-6、α1-抗糜蛋白酶(ACT)、氧酶-1，24S-羥基膽固醇、乙醯膽鹼、生長抑素、垂體後葉素等。另外，上述已知標記的量可以是活性量。例如，可以為乙醯膽鹼轉移酶活性、乙醯膽鹼酯酶活性等。但是，只要能夠藉由與上述糖鏈的量組合來診斷阿爾茨海默氏病的話，可以採用任一種。另外，上述已知標記不限定於阿爾茨海默氏病異常地標記。所以藉由與上述糖鏈的量組合，能夠可靠診斷阿爾茨海默氏病。
另外，上述已知標記也可採用多個已知標記，也可準備多個結合各已知標記的已知標記檢測單元。作為檢測單元，例如可舉出使用了已知標記異常抗體的酶免疫測定法、免疫印跡法、抗體陣列(Antibody Array)等，另外，也可組合多個使用。
另外，對於本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，將作為哺乳動物的受驗體中的上述糖鏈的量與上述已知標記的量的量比作為阿爾茨海默氏病的症狀指標顯示。藉由將上述糖鏈的量與上述已知標記的量的量比例作為阿爾茨海默氏病的症狀指標，能夠複合診斷阿爾茨海默氏病。
例如，該診斷套組中，在受驗體的上述糖鏈的量與上述已知標記的量之間存在正相關的情況下，根據複合檢測的結果，診斷出阿爾茨海默氏病的可能性高。但是，並不局限於此，即便涉及有關阿爾茨海默氏病的其他症狀或狀態，也能藉由該技術領域的醫師所熟知的日常方法來測定，使用本實施方式的診斷套組能夠容易地獲得這些症狀指標。
另外，對於本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，上述已知標記為澱粉狀β蛋白質。可確認作為阿爾茨海默氏病的診斷標記，澱粉狀β蛋白質在臨床上的有用性。因此，藉由將澱粉狀β蛋白質的量與以補體C3蛋白質為來源的糖鏈的量的量比作為阿爾茨海默氏病的症狀指標，能夠以高可靠性和高精確度診斷阿爾茨海默氏病。
另外，對於本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，將作為哺乳動物的受驗體中的上述糖鏈的甘露糖量與N-乙醯葡糖胺量的量比作為阿爾茨海默氏病的症狀指標顯示。藉由將上述甘露糖量與N-乙醯葡糖胺量的量比作為阿爾茨海默氏病的症狀標記，能夠簡便且迅速地診斷阿爾茨海默氏病。
例如，在該診斷套組中，觀察上述補體C3蛋白質的糖鏈中甘露糖量對N-乙醯葡糖胺量的比例，在觀察到相對於從種類相同於受驗體的哺乳動物所得到的比例，前述比例有減少的情況下，能夠診斷出阿爾茨海默氏病的可能性高。但是，並不局限於此，即便涉及有關阿爾茨海默氏病的其他症狀或狀態，也能藉由該技術領域的醫師所熟知的日常方法來測定，使用本實施方式的診斷套組能夠容易地獲得這些症狀指標。另外，上述N-乙醯葡糖胺量與甘露糖量的檢測可以先執行任一種。進而，也可藉由高通量篩選法進行連續檢測。
另外，對於本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，使用了脊髓液或血液作為體液。由於採取脊髓液或者血液的採取方法已確立，所以能夠對患者進行危險度低的診斷。另外，由於脊髓液靠近大腦，所以也能夠得到與大腦症狀相關關係更高的診斷結果。另外，由於血液是能夠更迅速且簡便地從患者中採取的體液，所以能夠對患者進行非常便利性高的診斷。
這裏，脊髓液並不局限於腦室性腦脊髓液，也可使用腰椎性脊髓液，使用腰椎性脊髓液時，對存活的受檢者能夠進行危險度更低的診斷。關於脊髓液的採取，根據狀況，可使用腦槽穿刺、腰椎穿刺、腦室穿刺、脊椎穿刺等通常進行的脊髓液採取法。
這裏，關於血液，進行適當的離心分離操作，也可使用使淋巴細胞的存在減少至可忽略的量的血清。本實施方式中，也可使檢測試劑與該血清反應。
進而，本實施方式中還包含了:將更迅速、簡便且對患者便利性高，而且使用了血液試樣的上述診斷套組的診斷作為一次篩查來進行，並且，作為二次診斷，也可進行使用了脊髓液的上述診斷套組的診斷。此時，二次診斷時，還可使用用作一次篩查的綜合了補體C3蛋白質的糖鏈的量的診斷指標。
這裏，對於試樣，可以向得到的脊髓液、血液、血清等試樣追加一個或多個任意的處理步驟。作為這樣的處理步驟，例如可舉出各種柱、依據免疫沉澱法的雜質的除去或目標物質的精製處理，依據胰蛋白酶等的蛋白質的斷片化處理，依據酶處理或化學處理的糖鏈的分離，其他酶處理，各種化學修飾等，但並不限於此。
另外，對於本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，上述受驗體為依據癡呆症重症度評價的診斷結果是極輕度或輕度的受驗體。根據癡呆症重症度評價組合阿爾茨海默氏病的診斷結果，由此能夠可靠地診斷阿爾茨海默氏病。另外，有利於阿爾茨海默氏病的發病前診斷、初期的診斷，且能夠有效地預防、治療。進而，由於即使癡呆症重症度評價的診斷結果為極輕度的也能夠進行組合，因此能夠進行阿爾茨海默氏病的早期診斷。作為癡呆症重症度測試，例如可舉出臨床的癡呆症評定量表(CDR)、老年抑鬱量表(GDS)、修正長穀川式簡單智力評定量表(HDS-R)、簡單精神狀態量表(MMSE)檢查、韋氏成人智力量表檢查(WAIS-R)、阿爾茨海默氏病評定量表(ADAS)等。
本實施方式的診斷套組中可以進一步具有癡呆症重症度評價單元。藉由具有上述評價單元，能夠將上述糖鏈的量的檢測與上述評價並行或連續實施。
另外，上述補體C3蛋白質的糖鏈的量的檢測與依據癡呆症重症度評價進行的診斷可以先執行任一種，優選先執行對受驗體的負擔少的癡呆症重症度評價。這是因為在癡呆症重症度的診斷結果階段，診斷為阿爾茨海默氏病的可能性低的情況下，能夠避免體液採取對受驗體的負擔。
另外，對於本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，上述癡呆症重症度評價為臨床的癡呆症評定量表(CDR)。CDR是國際上也廣泛使用的癡呆症的評價法，以家族資訊為重點。評價分為以下5個階段評價:將0記為正常、0.5記為極輕度、1記為輕度、2記為中度、3記為重度。藉由組合依據CDR的診斷結果，能夠可靠地診斷阿爾茨海默氏病。即便本發明的診斷套組為CDR 0.5(極輕度)或者CDR 1(輕度)，也能夠進行阿爾茨海默氏病的早期診斷。
另外，對於本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，上述糖鏈為WGA和Con A鍵合性的糖鏈，根據該診斷套組，能夠更正確地把握阿爾茨海默氏病的症狀。對於阿爾茨海默氏病的患者，能夠更可靠地觀察到以補體C3蛋白質為來源的WGA和Con A鍵合性的糖的量的變動，所以藉由使用這些，能夠更可靠地診斷。
另外，對於本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，作為上述糖鏈檢測單元，藉由進行使用了凝集素的凝集素酶免疫測定法或者使用了糖鏈的識別抗體的酶免疫測定法，從而檢測以補體C3蛋白質為來源的糖鏈。該診斷套組是已經確立的技術、並且藉由進行實際臨床上廣泛使用的酶免疫測定法或作為使用了酶免疫測定法的凝集素的改變法的凝集素酶免疫測定法，能夠簡便且可靠並廉價地進行數值化了的測定，也能夠進行大量試樣的處理。
這裏，作為本發明的實施方式中使用的凝集素，是WGA鍵合性，只要是可識別Con A鍵合性的糖鏈的凝集素，就沒有特別限定。例如作為識別甘露糖的凝集素，可例示Canavaliaensiformis agglutinin(Con A)、Lens culinarisagglutinin(LCA)、Pisum sativum agglutinin(PSA)、Bowringia milbraedii agglutinin(BMA)、Dolichoslablab agglutinin(DLA)、Galanthus nivalisagglutinin(GNA)、Gerardia savaglia lectin(GSL)、Machaerium biovulatum agglutinin(MBA)、Machariumlunatus agglutinin(MLA)、Narcissus pseudonarcissusagglutinin(NPA)、Epipactis helleborine agglutinin(EHA)、Listera ovata agglutinin(LOA)、Lablab nigeragglutinin(LNA)、Narcissus lobularis agglutinin(NLA)、Vigna racemosa agglutinin(VRA)以及Pterocarpusrhorii agglutinin(PRA)等。也可從上述凝集素與糖鏈的鍵合量測定甘露糖量，優選係由與甘露糖的鍵合親和性高的Con A的鍵合量測定甘露糖量的方法。另外，作為識別N-乙醯葡糖胺的凝集素，可例示Wheat germ agglutinin(WGA)、Datura stramoniumagglutinin(DSA)、Oryza sativa agglutinin(OSA)、Phytolacca americana agglutinin(PWM)、Urticadioica agglutinin(UDA)、Solanum tuberosum lectin(STL)、Lycipersicon esculentum agglutinin(LEA)、Daturastramonium agglutinin(DSA)、Pokeweed mitogen(PWM)以及其亞型(PL-D1以及PL-D2)以及Ym1等。也可由上述凝集素與糖鏈的鍵合量測定N-乙醯葡糖胺量，優選的係由具有與N-乙醯葡糖胺的鍵合親和性，並且易得到的WGA的鍵合量測定N-乙醯葡糖胺量的方法。
使用的凝集素並不限定於精製的天然的凝集素，例如也可以係在大腸菌等宿主內發現、精製而成的凝集素。另外，可以使用標準的分子生物學的手法改變(例如，變異、削除、插入、加成)糖識別部位以外的排列(堿基排列或者氨基酸排列)，即使是糖識別部位，也可以對其賦予將其功能最低限度保持、提高或者賦予新功能的改變。
本發明的實施方式中，為了檢測或測定抗體或者凝集素，可使用結合能夠產生信號的標識物質和抗體以及凝集素本身而得到的標識抗體以及標識凝集素。此時，除直接結合而成的以外，也可使用藉由親和素-生物素或者鏈黴親和素-生物素系或者二次抗體使抗體或者凝集素與標識物質結合而成的物質，包含在本發明的技術範圍內。作為這裏使用的二次抗體，可使用與一次抗體或凝集素鍵合的抗體。
使用酶作為標識的情況，例如可使用辣根過氧化物酶 、鹼性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、葡糖澱粉酶、碳酸脫氫酶、乙醯膽鹼酯酶、溶菌酶、丙二酸酯脫氫酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶等作為標識。作為用這些酶進行標識的方法，可舉出用高碘酸將酶的糖鏈氧化而使生成的醛基與抗體或者凝集素的氨基酸鍵合的方法、向酶導入馬來醯亞胺基或吡啶二硫基等與存在與抗體的Fab’片段或者凝集素的巰基鍵合的方法等。
使用酶作為標識的情況下，將測驗試樣與標識抗體或者凝集素孵化後，清洗除去游離的標識抗體或者凝集素，然後使上述標識酶的基質發生作用藉由發色等測定反應，由此能夠檢測標識抗體或凝集素。例如，用過氧化物酶標識的情況下，過氧化氫作為基質，組合二氨基聯苯胺或O-苯二胺作為發色試劑來生成褐色或黃色。用葡萄糖氧化酶標識的情況下，作為基質，例如可使用2,2'-聯氮-雙(3-乙基苯並噻唑啉-6-磺酸) (ABTS)等。
使用螢光色素作為標識的情況下，例如，可用FITC(異硫氰酸螢光素 )或者TRITC(四甲基羅丹明B異硫氰酸酯)等螢光色素對抗體或者凝集素進行標識。可利用尋常方法進行抗體或者凝集素與螢光色素的鍵合。
使用顯色標識物質作為標識的情況下，例如，可使用膠體金屬以及著色乳膠等作為標識。作為膠體金屬的代表例，可舉出金溶膠、銀溶膠、硒溶膠、碲溶膠或者鉑溶膠等作為各自分散粒子的金屬膠體粒子。膠體金屬的粒子的大小，通常優選為直徑3~60nm左右。另外，作為著色乳膠的代表例，可舉出用紅色和藍色等各自的著色料進行著色的聚苯乙烯乳膠等的合成乳膠。作為乳膠，可以使用天然橡膠乳膠這樣的天然乳膠。著色乳膠的大小可從直徑數十nm~數百nm左右中進行選擇。這些顯色標識物質可直接使用市售品，還可對其進行加工或者利用本身公知的方法來製造。
可藉由現有方法進行抗體或者凝集素與顯色標識物質的鍵合。例如，顯色標識物質為金溶膠的分散粒子的金膠體粒子的情況下，通常將抗體與金溶膠在室溫下混合，從而能夠使兩者物理鍵合。
應予說明，作為標識，除上述以外，也可使用放射性同位元體標識(例如，125I、131I、3H、14C等)等，並包含在本發明的範圍內。
作為糖鏈的識別抗體，例如，可以使用識別作為糖蛋白質的HIV-1 envgp120上的末端α1、2甘露糖的2G12抗體。另外，也可以使用加成了適當的化合物的對糖鏈的抗體。例如也可使用以2-氨基吡啶標識了的對乙醯葡糖胺的抗體(參照生化學 Vol.75 No.8 (2003))。還可製成糖鏈的識別抗體而使用。例如，也可藉由以下方法製成。
製成糖鏈識別多克隆抗體時，例如，將糖鏈或其一部分、或者加成有糖鏈的補體C3蛋白質或者部分肽、或它們與其他載體分子、載體蛋白質的複合體在恒溫動物上進行免疫，從該免疫動物中採取含多克隆抗體的血液來進行抗體的分離精製，由此而製成。
將製成方法的一個例子在以下示出。只要能夠與載體交聯而高效地產生對免疫的抗原的抗體，則載體蛋白質的種類以及載體與抗原的混合比可以是任意條件，例如，可使用相對於以重量比計1個抗原，以約0.1~20的比例，優選為約1~5的比例使牛血清白蛋白或牛甲狀腺球蛋白、血藍蛋白等鍵合的方法。另外，對於抗原與載體的偶聯，可使用各種縮合劑，例如，可使用含有戊二醛、碳二亞胺、馬來醯亞胺活性酯、巰基、二硫代吡啶基等的活性酯試劑。使用小分子作為抗原的情況下，特別優選利用載體蛋白質。
對於恒溫動物，將抗原或者抗原―載體複合體本身或將其與適當的載體、緩衝液、稀釋劑一起投與到能夠產生抗體的部位。為了投與時提高抗體產生能力，可以投與例如完全弗氏佐劑、不完全弗氏佐劑、RAS〔MPL (Monophosphoryl Lipid A) + TDM(Synthetic Trehalose Dicorynomycolate) + CWS (Cell Wall Skeleton)佐劑系統〕、氫氧化鋁等通常可使用的佐劑（adjuvant）。這些佐劑與抗原可以以使用了稀釋劑的懸濁液或乳化液的形式投與。這裏，佐劑係指與抗原一起投與時，並非特別增強對該抗原的免疫反應的物質。
作為進行免疫的恒溫動物，例如可用兔子、小鼠、倉鼠、豚鼠、雞、大鼠、狗、山羊、綿羊、牛等哺乳動物。例如，作為免疫敏化的方法，可使用本領域技術人員公知的通常的免疫敏化的方法，例如，藉由投與1次以上的抗原來進行。具體而言，抗原投與通常以約1~6周為單位計為1次，進行計約2~10次左右。每一次投與量，例如，抗原以約0.05~2mg左右為基準。投與路徑沒有特別限定，例如可以適當地選擇皮下投、皮內投、腹膜腔內投、靜脈內投、肌肉內投與等，但優選藉由向靜脈內、腹膜腔內或皮下注射來進行投與。將免疫敏化後的哺乳動物培育0.5~4個月之後，可以從耳靜脈等少量試樣採取該哺乳動物的血清，測定抗體水平（antibodylevels）。如果抗體水平上升，則根據狀況實施適當次數的抗原投與。例如可以使用10μg~1000μg的抗原進行追加免疫。抗體水平的測定，例如藉由使標識化蛋白質與抗血清反應後，測定與抗體鍵合的標識劑的活性來進行。
藉由通常的方法從距最後的投與1~2個月後免疫敏化了的哺乳動物中採取血液或腹水，在56℃進行30分鐘處理使補體系非活性化後，利用親和層析進行特異抗體的分離、精製，得到多克隆抗體。作為親和載體，例如，可使用使抗原肽在Affigel等中固相化而形成的物質。或者，可以將得到的血液藉由例如離心分離、使用了硫酸銨或聚乙二醇的沉澱、凝膠過濾色譜法、離子交換色譜法等通常的方法來分離、精製。
製成糖鏈識別單克隆抗體時，例如將糖鏈或其一部分、或者加成有糖鏈的補體C3蛋白質或者部分肽、或它們與其他載體分子、載體蛋白質的複合體在恒溫動物上進行免疫，從該免疫動物中採取脾細胞、淋巴節細胞、B淋巴細胞等，藉由將得到的細胞與骨髓瘤細胞株細胞融合，從而得到產生單克隆抗體的雜交瘤細胞，從該雜交瘤細胞分離單克隆抗體，由此而製成。
將製成方法的一個例子在以下示出。直至恒溫動物的免疫步驟，可採用與上述多克隆抗體的製成同樣的方法進行。作為進行免疫的恒溫動物，例如可舉措猴子、兔子、狗、豚鼠、小鼠、大鼠、綿羊、山羊、雞，但可優選使用小鼠或大鼠。作為免疫敏化的方法，可使用本領域技術人員公知的通常的免疫敏化的方法，例如，藉由投與1次以上的抗原來進行。具體而言，抗原投與通常以約1~6周為單位計為1次，進行計約2~10次左右。每一次投與量，例如，抗原以約0.05~2mg左右為基準。投與路徑沒有特別限定，例如可以適當地選擇皮下投、皮內投、腹膜腔內投、靜脈內投、肌肉內投與等，但優選藉由向靜脈內、腹膜腔內或皮下注射來進行投與。
從將抗原免疫後的恒溫動物中選擇能看到抗體水平的個體在最終免疫的2~5日後採取脾臟或淋巴節，得到包含在它們中的脾細胞、淋巴節細胞、B淋巴細胞等的抗體產生細胞。抗血清中的抗體水平的測定，例如藉由使標識化蛋白質與抗血清反應後，測定與抗體鍵合的標識劑的活性來進行。
接著，進行這些抗體產生細胞與骨髓瘤(骨髓瘤細胞)的融合，但融合操作可根據已知的方法，例如，Kohler和Milstein方法(G. Kohler et al.，Nature， 1975， 495， 256)來實施。作為融合促進劑，例如可舉出聚乙二醇(PEG)、仙台病毒等，但優選使用PEG。作為骨髓瘤，例如可舉出NS-1、P3U1、SP2/0、AP-1等，但對於小鼠，特別優選使用P3U1、SP2/0、P3X63Ag8。使用的抗體產生細胞數與骨髓瘤數的優選比率為1:1~20:1左右，PEG(優選為PEG1000~PEG6000)以10~80%左右的濃度添加，藉由在20~40℃、優選在30~37℃下培養1~10分鐘，從而能夠高效地實施細胞融合。
兼顧雜交瘤細胞的篩查的選擇性的培養，通常可以以添加了HAT(次黃嘌呤，氨喋呤、胸苷)的動物細胞用培養基來進行。另外，作為育種用培養基，只要能生育出雜交瘤細胞，可以使用任一種培養基。例如，可使用含1~20%、優選含10~20%的牛胎兒血清的RPMI-1640培養基，含1~10%的牛胎兒血清的GIT培養基(和光純藥工業(株))或雜交瘤細胞培養用無血清培養基(SFM-101，日水製藥(株))等。培養溫度通常為20~40℃，優選為約37℃。培養時間通常為5日~3周，優選為1周~2周。培養通常可以在5%碳酸氣體下進行。另外，藉由細胞融合得到的雜交瘤細胞可藉由極限稀釋法等進行克隆。
產生各雜交瘤細胞的單克隆抗體的篩查中可使用各種方法，作為一個例子，可使用如下方法:向直接或與載體一起吸附抗原而成的固相(微孔板等)中添加雜交瘤細胞培養上清，接著加入以放射性物質或酶等標識了的抗免疫球蛋白抗體(與和細胞融合中使用的抗體產生細胞同種的免疫球蛋白反應的抗體)、蛋白質A或者蛋白質G，檢測與固相鍵合的單克隆抗體的方法;向吸附了免疫球蛋白抗體、蛋白質A或者蛋白質G的固相添加雜交瘤細胞培養上清（culture supernatant），加入以放射性物質火酶等標識了抗原，檢測與固相鍵合的單克隆抗體的方法等。
為了由這樣選出的雜交瘤細胞製造目的單克隆抗體，藉由通常的細胞培養法、腹水形成法培養雜交瘤細胞，由培養上清或腹水精製單克隆抗體即可。由培養上清或腹水對單克隆抗體的精製可藉由尋常方法來進行。例如，可根據依據免疫球蛋白的分離精製法〔鹽析法、硫酸銨分級分離、乙醇沉澱法、等電點沉澱法、電泳法、離子交換體(DEAE等)的吸附脫附法･色譜法、超離心法、凝膠過濾法、親和層析、藉由抗原鍵合固相或者蛋白質A或蛋白質G等活性吸附劑僅採取抗體，使鍵合解離而得到抗體的特殊精製法等〕來進行。
另外，作為對糖鏈的單克隆抗體，大多得到IgM抗體，可以直接使用得到的IgM抗體，也可以用本領域技術人員熟知的基因工學的方法改變為IgG抗體而使用。
以上為例示，只要是本領域技術人員，則可按照通常的抗體製作法，為了得到目的糖鏈識別抗體，容易地進行各種的設計變更或改變、以及各條件的調節。
另外，本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，作為上述糖鏈檢測單元，進行使用含有凝集素的凝膠的凝集素親和電泳，從而檢測來源於補體C3蛋白質的糖鏈。含有凝集素的凝膠的電泳中，具有與目的凝集素鍵合的糖鏈的蛋白質，其凝集素親和性(鍵合力)越強，從實施的點的移動度越低，因此，能夠明確分離糖鏈少的(凝集素鍵合力的弱)補體C3蛋白質和糖鏈多的親和性高的補體C3蛋白質。
另外，本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，作為上述糖鏈檢測單元，進行使用了凝集素的凝集素印跡分析或使用了糖鏈的識別抗體的免疫印跡分析，從而檢測來源於補體C3蛋白質的糖鏈。藉由以與糖鏈異常鍵合的凝集素或者抗體進行印跡，從而能夠藉由糖鏈的狀態來識別來源於補體C3蛋白質的糖鏈。
另外，本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，作為上述糖鏈檢測單元，進行使用了凝集素或糖鏈的識別抗體的薄層色譜，從而檢測來源於補體C3蛋白質的糖鏈。藉由使用能夠以短時間展開目的樣品的薄層色譜，能夠將補體C3蛋白質從其他污染蛋白質中分離，並能夠簡便且迅速地進行利用凝集素或糖鏈的識別抗體的糖鏈的檢測。另外，使用對補體C3蛋白質的抗體或與其抗體鍵合的載體使補體C3蛋白質的移動度變更的情況也包含在本實施方式中。
另外，本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，作為上述糖鏈檢測單元，進行凝集素陣列或者抗體陣列，藉以檢測來源於補體C3蛋白質的糖鏈，其中該凝集素陣列使用了具備有凝集素的凝集素陣列用晶片，該抗體陣列使用了具備有糖鏈的識別抗體的抗體陣列用晶片。藉由使用凝集素陣列或抗體陣列，能夠進行包含其他蛋白質等多個因數的多面的同時分析、簡便分析。特別是藉由組合識別其他因數的抗體與凝集素或糖鏈的識別抗體，能夠一次檢測多個因數的糖鏈的加成狀態，並能夠進行更詳細的症狀或病因的分析。
另外，本發明的另一個實施方式的上述診斷套組，使用WGA和/或Con A作為上述凝集素來檢測來源於補體C3蛋白質的糖鏈。藉由使用WGA和/或Con A作為凝集素，能夠可靠地檢測補體C3蛋白質的糖鏈的狀態。
另外，本發明的另一個實施方式的診斷套組，藉由進行液體色譜作為檢測單元，從而檢測被補體C3蛋白質切斷的糖鏈。藉由將被切斷的糖鏈用例如2-氨基吡啶等進行螢光標識，從而即使是皮摩爾的糖鏈量也能夠利用螢光檢測器進行檢測。因此，即使是少量的體液也能夠檢測出補體C3蛋白質的糖鏈的狀態。另外，精製補體C3蛋白質並且切斷其糖鏈也包含在本實施方式中。從補體C3蛋白質中切斷糖鏈的方法沒有特別限定。但優選為蛋白質分解而糖鏈未分解的使用了無水肼(hydrazineanhydrous)的肼分解法。
<診斷標記> 另外，本發明的另一個實施方式的診斷標記，係用於診斷阿爾茨海默氏病的診斷標記，診斷標記含有一糖鏈的量，該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質，該診斷標記能夠發揮以下作用，即，進行阿爾茨海默氏病的早期診斷、阿爾茨海默氏病與呈現類似症狀的其他癡呆症的鑑別診斷。
如在後述實施例中所證實，對於患有阿爾茨海默氏病的患者而言，來源於體液中的補體C3蛋白質的糖鏈的量發生變化。因此，例如，藉由將上述來源於補體C3蛋白質的糖鏈的量用作診斷標記，從而能夠起到作為根據其糖鏈的量的變化顯示阿爾茨海默氏病的可能性高的標記的作用，能夠依據該糖鏈的量的變化來診斷阿爾茨海默氏病。但並不局限於此，即便涉及有關阿爾茨海默氏病涉及的其他症狀或狀態，也能藉由該技術領域的醫師所熟知的日常方法來測定，並使用本實施方式的診斷標記容易地對它們進行診斷。
另外，本發明的另一個實施方式的上述診斷標記，上述糖鏈的量為相對於健康哺乳動物的上述糖鏈的量的與上述哺乳類相同種類的上述受驗體的上述糖鏈的量。藉由採用健康哺乳動物的上述糖鏈的量作為對照，能夠得到用於可靠地診斷阿爾茨海默氏病的診斷標記。
另外，本發明的另一個實施方式的上述診斷標記，還含有已知的阿爾茨海默氏病診斷標記的量。藉由組合上述糖鏈的量和上述已知標記的量，能夠得到用於更可靠地診斷阿爾茨海默氏病的診斷標記。
另外，本發明的另一個實施方式上述診斷標記，含有上述糖鏈的量與上述已知標記的量的量比。藉由將上述糖鏈的量與上述已知標記的量的量比作為阿爾茨海默氏病的症狀指標，能夠得到用於多方面且精確度高地診斷阿爾茨海默氏病的診斷標記。
例如，根據該診斷標記，在受驗體的上述糖鏈的量與上述標記的量之間是正相關的情況下，能夠發揮作為顯示阿爾茨海默氏病的可能性高的標記的作用，依據該相關關係能夠可靠地診斷阿爾茨海默氏病。但是，並不局限於此，即便涉及有關阿爾茨海默氏病的其他症狀或狀態，也能藉由該技術領域的醫師所熟知的日常方法來測定，使用本實施方式的診斷標記容易地對它們進行診斷。
另外，本發明的另一個實施方式的上述診斷標記，上述糖鏈的量為其糖鏈的甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量的量比。藉由將上述甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量的量比作為阿爾茨海默氏病的症狀標記，從而能夠得到簡便且迅速用於阿爾茨海默氏病的診斷的診斷指標。
例如，根據該診斷標記，觀察上述糖鏈中甘露糖量對N-乙醯葡糖胺量的比例，在觀察到相對於從種類相同於受驗體的哺乳動物所得到的比例，前述比例有減少的情況下，能夠發揮作為顯示阿爾茨海默氏病的可能性高的標記的作用，依據該比的減少，能夠可靠地診斷阿爾茨海默氏病。但是，並不局限於此，即便涉及有關阿爾茨海默氏病的其他症狀或狀態，也能藉由該技術領域的醫師所熟知的日常方法來測定，使用本實施方式的診斷標記容易地對它們進行診斷。
<檢測方法> 另外，本發明的另一個實施方式的檢測方法，是阿爾茨海默氏病的症狀指標的檢測方法，包含定量檢測一糖鏈的量的步驟，該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質，因此能夠進行阿爾茨海默氏病的早期檢測，或者，區別檢測阿爾茨海默氏病與呈現類似的症狀的其他癡呆症。
如在後述實施例中所證實，對於患有阿爾茨海默氏病的患者而言，來源於體液中的補體C3蛋白質的糖鏈的量發生變化。因此，例如，藉由定量檢測上述糖鏈的量，從而能夠檢測其量的變化。根據該結果，能夠得到可判斷阿爾茨海默氏病的可能性高的材料。但是，並不局限於此，即便涉及有關阿爾茨海默氏病的其他症狀或狀態，也能藉由該技術領域的醫師所熟知的日常方法來測定，使用本實施方式的檢測方法容易地對它們進行判斷。
另外，本發明的另一個實施方式的上述檢測方法，還包括:判斷相對於健康哺乳動物的上述糖鏈的量，是否有意減少與上述哺乳動物相同種類的上述受驗體的上述糖鏈的量的步驟。例如，相對於作為對照而採用的健康哺乳動物的上述糖鏈的量，有意減少上述受驗體的糖鏈的量的情況下，成為可判斷為阿爾茨海默氏病的可能性高的材料。因此，藉由使用該檢測方法，能夠可靠地診斷阿爾茨海默氏病。
另外，本發明的另一個實施方式的上述檢測方法，還包括定量檢測已知的阿爾茨海默氏病診斷標記的量。藉由組合上述糖鏈的量和上述已知標記的量，能夠得到更可靠地判斷阿爾茨海默氏病的可能性高的材料。
另外，本發明的另一個實施方式的上述檢測方法，還包括計算上述糖鏈的量和上述已知標記的量的量比的步驟。藉由將上述糖鏈的量和上述已知標記的量的量比作為阿爾茨海默氏病的症狀指標，從而能夠得到可作為綜合結果判斷阿爾茨海默氏病的可能性高的材料。
例如，根據該檢測方法，在受驗體的上述糖鏈的量與上述已知標記的量之間是正相關的情況下，能夠得到作為綜合檢測結果可判斷為阿爾茨海默氏病的可能性高的材料。但是，並不局限於此，即便涉及有關阿爾茨海默氏病的其他症狀或狀態，也能藉由該技術領域的醫師所熟知的日常方法來測定，使用本實施方式的檢測方法容易地對它們進行判斷。
另外，本發明的另一個實施方式的上述檢測方法，定量檢測上述糖鏈的量的步驟為定量檢測甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量的步驟。藉由分別檢測上述甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量，能夠更詳細且可靠地檢測阿爾茨海默氏病。
另外，本發明的另一個實施方式的上述檢測方法，還包括計算上述甘露糖量與上述N-乙醯葡糖胺量的量比的步驟。藉由將上述甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量的量比作為阿爾茨海默氏病的症狀指標，能夠得到簡便且迅速地判斷為阿爾茨海默氏病的可能性高的材料。
例如，根據該檢測方法，觀察上述補體C3蛋白質的糖鏈中甘露糖量對N-乙醯葡糖胺量的比例，在觀察到相對於從種類相同於受驗體的哺乳動物所得到的比例，前述比例有減少的情況下，可以作為判斷成阿爾茨海默氏病的可能性高的依據。但是，並不局限於此，即便涉及有關阿爾茨海默氏病的其他症狀或狀態，也能藉由該技術領域的醫師所熟知的日常方法來測定，使用本實施方式的檢測方法容易地對它們進行判斷。
應予說明，藉由上述實施方式說明的診斷套組、診斷標記以及檢測方法並不限定於本發明，以例示的內容為意圖進行公開。本發明的技術的範圍由申請專利範圍的範圍的記載規定，本領域技術人員可在申請專利範圍的範圍所記載的發明技術範圍內進行各種設計變更。例如，可以藉由各種免疫化學方法、狹縫或斑點印跡法，或者二維電泳法等各種改變電泳法來實現來源於補體C3蛋白質的糖鏈的檢測，這種方式的診斷套組、診斷標記以及檢測方法當然也包含在本發明的技術範圍內。
作為上述各種免疫化學的方法，例如，可舉出使試樣液中的抗原與標識抗原相對於抗體發生競爭反應後，將未反應的標識抗原(F)和與抗體鍵合了的標識抗原(B)分離(B/F分離)，均測定B或F的標識量，對試樣液中的抗原量進行定量的方法(競爭法)。作為B/F分離的方法，可舉出使用可溶性抗體作為抗體，使用高分子液相(聚乙二醇等)和對可溶性抗體的2次抗體等進行B/F分離的液相法、以及使用作為1次抗體的固相化抗體或與可溶性的1次抗體固相化而成的2次抗體的固相化法。另外，作為其他免疫化學的方法，還可舉出對將試樣液中的抗原和固相化抗原相對於一定量的標識化抗體發生競爭反應後的固相和液相進行分離，或者，使試樣液中的抗原與過度量的標識化抗體反應，接著加入固相化抗原使未反應的標識化抗體與固相鍵合後，分離固相和液相，測定任一相的標識量對試樣液中的抗原量進行定量的方法(免疫測定法)。另外，還舉出測定凝膠內或溶液中發生抗原抗體反應的結果產生的不溶性的沉澱物的量的方法(散射比濁法（nephelometry）)。試驗液中的抗原量少且僅得到少量的沉澱物的情況下，也可使用利用雷射的散射的雷射散射比濁等。
此外，本發明的實施方式為包含本發明的診斷套組的製造品。該製造品包含容器和容器所具備的標籤或者包裝插圖。容器例如可包含瓶、西林瓶、注射器等，從玻璃或塑膠等適當的材料中選擇。標籤或包裝插圖表示本發明的診斷套組用於阿爾茨海默氏的病診斷。標籤或包裝插圖還包括診斷中使用時的備註說明。製造品還可以具備含有對照試樣、各種緩衝液、稀釋液、過濾器、針、注射器以及注射用的抑菌水(BWFI)等的附加容器。
上述製造品所含的診斷套組中，根據其實施方式，抗體或者凝集素可以預先固相化，或預先標識。在本發明的實施方式的診斷套組中可使用的固相沒有特別限定，例如可舉出聚苯乙烯等的聚合物、玻璃珠、磁性粒子、微孔板、免疫層析用濾紙、玻璃過濾器等不溶性載體。上述製造品中還可含有其他任意成分。作為其他任意成分，例如可舉出用於標識的酶、其基質、放射性同位元元素、發光物質、螢光物質、著色物質、緩衝液、板等，但並不限定於這些。
並且，上述診斷套組、診斷標記以及檢測方法只不過是本發明的實施方式之一，根據本發明，還提供使用這些的阿爾茨海默氏病的診斷方法，並能夠藉由該診斷方法進行與阿爾茨海默氏的症狀相關性高的診斷。
應予說明，使用由上述實施方式說明的診斷套組、診斷標記、檢測方法以及診斷方法等，對人或哺乳動物，進行阿爾茨海默氏病的治療藥、惡性化物質篩查的方法、分析症狀的方法等也包含在本發明的技術的範圍。【实施例】
以下，藉由實施例具體說明本發明，這只是一個例子，本發明並不限定於這些實施例。應予說明，實施例所提及的市售試劑只要沒有特別說明，根據製造者的使用說明來使用。
實施例1<受檢者和樣品> 對作為受檢者的患者及其家族充分說明研究的主旨，在獲得知情同意書的基礎上實施。另外，該研究獲得鳥取大學的倫理審查的審批，全部的受檢者由專業醫生診斷。該診斷中實施有病歷、家族病歷的聽取、內科學的診察、神經學的診察，臨床檢查、神經心理學檢查、圖像檢查(CT 和/或 MRI以及SPECT)。
AD患者為根據DSM-IV和NINCDS-ADRDA的診斷基準診斷的58名患者(男性16名、女性42名、平均年齡76.1±3.6歲)。作為非癡呆症的對照，采用沒有認知功能障礙、自身免疫疾病的其他疾病的患者(運動神經元疾病･脊髄小腦變性症･高血脂症･帕金森氏病･腦血管疾病等)。對照組為採取了CSF的患者為32名患者(男性16名，女性16名，平均年齡76.2±7.5歲)，採取了血液的患者為31名患者(男性9名，女性22名，平均年齡75.2±3.0歲)。
藉由腰椎穿刺從93名的患者中採取CSF，從89名的患者中採取血液，立即在-80℃下保存。分別研究對照組為CSF與血液的數據分別為不同的患者的，AD群的CSF與血液的數據為同一患者的試驗。另外，2組間的年齡沒有顯著性差異。
實施例2<使用了ELISA法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)的CSF、血液中補體C3濃度的測定> CSF中的補體C3蛋白質與血清中的補體C3蛋白質的濃度使用Assay Max Human Complement C3 ELISA Kit(Assaypro，USA)進行測定。向將抗人補體C3蛋白質抗體(polyclonal antibody against human complement C3)固相化而成的板上各加入25μl的用Mix Diluent稀釋了的25μl的檢體或者標準品(Human Complement C3 Standard， 30μg/ml)與Biotinylated補體 C3蛋白質并進行混合，在25℃孵化2小時。反應後，用200μl 的Wash Solution清洗各容池(well)5次，各加入50μl的Streptavidin-PeroxidaseConjugate在25℃孵化2小時。反應後，用200μl 的Wash Solution各容池清洗5次，加入各50μl的ChromogenSubstrate。在25℃發色8分鐘後，加入各50μl的Stop Solition(0.5N hydroxychloric acid)停止反應。用酶標儀測定450nm處的吸光度，以補體C3蛋白質標準的吸光度製備標準曲線。根據其標準曲線計算檢體的補體C3蛋白質濃度。
圖1表示脊髓液和血液中的補體C3蛋白質的濃度。脊髓液中，AD患者一方與對照方相比，顯示更高的補體C3蛋白質的濃度(p < 0.001)。另一方面，血液中，沒有看到在對照和AD患者之間有顯著性差異。
由以上結果可知，AD患者中，脊髓液中的補體C3蛋白質的濃度高於對照。另一方面，無論是對照或AD患者，血液中的補體C3蛋白質均存在一固定濃度。
實施例3<採用了凝集素酶免疫測定法的CSF和血液中的補體C3蛋白質的糖鏈量測定> 對於CSF中的補體C3蛋白質與血清中的補體C3蛋白質的糖鏈量，藉由改變部分Assay Max Human Complement C3 ELISA Kit(Assaypro，USA)來進行測定。向將抗補體C3蛋白質抗體(polyclonal antibody against human complement C3)固相化而成的板上各加入50μl以Mix Diluent稀釋了的檢體或標準品(Human Complement C3 Standard， 30μg/ml)，在25℃孵化2小時。反應後，用WashSolution 200μl清洗各容池5次，各加入50μl生物素標識WGA或者生物素標識Con A(J-Oil Mills， Japan)，在25℃孵化1小時。反應後，以200μl 的Wash Solution清洗各容池5次，加入各50μl的Streptavidin-HRP(GEHealthcare，USA)，在25℃孵化1小時。反應後，以200μl 的WashSolution清洗各容池5次，各加入50μl的TMB Solution(Wako， Japan)。在25℃發色5分鐘後，各加入50μl的2M H2SO4停止反應。用酶標儀測定450nm處的吸光度，以補體C3蛋白質標準的吸光度製備標準曲線。根據該標準曲線計算檢體中的補體C3蛋白質的WGA鍵合糖鏈量與補體C3蛋白質的ConA鍵合糖鏈量。各糖鏈量以每1mg補體C3蛋白質的螢光強度表示。
圖2是表示脊髓液中含有的補體C3蛋白質的WGA鍵合量與Con A鍵合量的圖。如果比較對照和AD患者的WGA鍵合量，則AD患者的WGA鍵合量相比於對照的WGA鍵合量，明顯減少(p < 0.001)。對於對照組和AD群的識別，可知如果將邊界值設定為9.59，則靈敏度為88.2%、特異度（specificity）為75.0%。
另外，使用Con A進行相同的實驗，結果AD患者的ConA鍵合量相比於對照的Con A鍵合量，明顯減少(p <0.001)。對於對照組與AD群的識別，可知如果將邊界值設定為1.70，則靈敏度為82.0%，特異度為83.3%。
由以上結果可知，AD患者中，對於脊髓液中的補體C3蛋白質的糖鏈，WGA鍵合性的糖鏈和Con A鍵合性的糖鏈均減少。
圖3是表示血液中含有的補體C3蛋白質的WGA鍵合量與Con A鍵合量的圖。如果比較對照與AD患者的WGA鍵合量，則AD患者的WGA鍵合量相比於對照的WGA鍵合量，明顯減少(p < 0.001)。對於對照組與AD群的識別，可知如果將邊界值設定為3.51，則靈敏度為86.0%，特異度為75.0%。另外，使用Con A進行相同的實驗，結果AD患者的ConA鍵合量相比於對照的Con A鍵合量，明顯減少(p <0.05)。
由以上結果可知，AD患者中，對於血液中的補體C3蛋白質的糖鏈，WGA鍵合性和Con A鍵合性的糖鏈均減少。因此，可知即使在血液中，也能夠檢測出補體C3蛋白質的糖鏈量的減少。
實施例4<CSF和血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量×Con A鍵合量的結果> 圖4是依據CSF中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量乘以Con A鍵合量得到的值(WGA鍵合量×Con A鍵合量)進行比較得到的圖。如果比較對照與AD患者的WGA鍵合量×Con A鍵合量，則，AD患者的WGA鍵合量×Con A鍵合量相比於對照的WGA鍵合量×Con A鍵合量明顯減少(p< 0.001)。對於對照組與AD患者群的識別，可知如果將邊界值設定為18.07，則靈敏度為89.8%，特異度為83.3%。
由以上結果可知，藉由將CSF中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量與Con A鍵合量相乘，從而與各自單獨的鍵合量的情況相比，靈敏度與特異度二者均顯示為高比例。
圖5是依據血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量×Con A鍵合量進行比較得到的圖。如果比較對照和AD患者的WGA鍵合量×Con A鍵合量，則AD患者的WGA鍵合量×Con A鍵合量相比於對照的WGA鍵合量×Con A鍵合量明顯減少(p< 0.001)。對於對照組與AD患者群的識別，可知如果將邊界值設定為9.2，則靈敏度為83.3%，特異度為78.6%。
由以上結果可知，藉由將血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量與Con A鍵合量相乘，從而能夠顯示靈敏度與特異度二者為高比例。
實施例5< CSF及血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量或者Con A鍵合量和臨床的癡呆症評定量表> 對成為受檢者的患者和其家族充分說明研究的主旨，在獲得知情同意書的基礎上，根據尋常方法對受驗體實施用於評價癡呆症的重症度的臨床的癡呆症評定量表(CDR)。將受檢者按評價分類為(極輕度:CDR 0.5，輕度: CDR 1，中等度: CDR 2，重症度: CDR 3)，相對於各自的評價將WGA鍵合量或者Con A鍵合量與與對照進行比較。
圖6是表示按CDR分析的CSF中和血液中含有的補體C3蛋白質的WGA鍵合量的圖。對照的WGA鍵合量與AD患者群的WGA鍵合量有明顯差異如上所述。表1是對於脊髓液中的對照組與AD患者群的識別，將邊界值、靈敏度以及特異度匯總於以CDR的評價為單位(CDR 3除外)的表。對於極輕度的CDR 0.5的患者而言，可知如果將邊界值設定為11.93，則靈敏度為93.3%，特異度為62.9%。另外，輕度(CDR 1)時，可知如果將邊界值設定為8.80，則靈敏度為92.9%，特異度為75.3%。
【表1】
表2是對於血液中的對照組與AD患者群的識別，將邊界值、靈敏度以及特異度匯總於CDR的每個評價(CDR 3除外)的表。對於極輕度的CDR 0.5的患者，可知如果將邊界值設定為3.72，則靈敏度為82.4%，特異度為71.4%。另外，輕度(CDR 1)時，可知如果將邊界值設定為3.55，則靈敏度為88.2%，特異度為71.4%。
【表2】
由以上結果可知，即使為極輕度(CDR 0.5)或輕度(CDR 1)的癡呆症，CSF中以及血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合性糖鏈也減少。
圖7是表示按CDR分析的CSF中以及血液中含有的補體C3蛋白質的Con A鍵合量的圖。對照的ConA鍵合量與AD的患者群的Con A鍵合量有明顯差異如上所述。表3是表示對於CSF中的對照組與AD患者群的識別，將邊界值、靈敏度以及特異度匯總於以CDR的評價為單位(CDR 3除外)的表。對於極輕度的CDR 0.5的患者，可知如果將邊界值設定為2.38，則靈敏度為93.8%，特異度為56.2%。另外，輕度(CDR 1)時，可知如果將邊界值設定為1.50，則靈敏度為92.9%，特異度為87.5%。
【表3】
另一方面，圖7下圖是涉及血液中含有的補體C3蛋白質的ConA鍵合量的以CDR的評價為單位的進行匯總的圖。如圖3的結果所述，由於血液中的對照組的Con A鍵合量與AD患者群的Con A鍵合量有明顯差異，因此，即使在以CDR的評價為單位進行分類的情況下，也可以認為有明顯差異。這裏，對於CDR 1，可知如果將邊界值設定為2.45，則靈敏度為84.6%，特異度為67.9%。
由以上結果可知，即使為極輕度(CDR 0.5)、輕度(CDR 1)的癡呆症，CSF中的補體C3蛋白質的Con A鍵合性糖鏈也減少。另外，可知在至少輕度(CDR 1)的階段，血液中的補體C3蛋白質的Con A鍵合性糖鏈也減少。
實施例6<CSF和血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量×Con A鍵合量與臨床的癡呆症評定量表> 圖8是表示按CDR分析的CSF中含有的補體C3蛋白質的WGA鍵合量×Con A鍵合量的圖。對照的WGA鍵合量×Con A鍵合量與AD患者的WGA鍵合量×Con A鍵合量有明顯差異，如上所述。表4是對於脊髓液的對照組與AD患者群的識別，將邊界值、靈敏度以及特異度匯總於以CDR的評價為單位(CDR 3除外)的表。對於極輕度的CDR 0.5的患者，可知如果將邊界值設定為27.41，則靈敏度為94.4%，特異度為70.0%。另外，輕度(CDR 1)時，可知如果將邊界值設定為12.57，則靈敏度為100%，特異度為90.0%。
【表4】
圖9是表示按CDR分析了的血液中含有的補體C3蛋白質的WGA鍵合量×Con A鍵合量的圖。對照的WGA鍵合量×Con A鍵合量與AD患者的WGA鍵合量 x Con A鍵合量有明顯差異如上所述。表5是對於血液中的對照組與AD患者群，將邊界值、靈敏度以及特異度匯總於以CDR的評價為單位(CDR 3除外)的表。對於極輕度的CDR 0.5的患者，可知如果將邊界值設為13.25，則靈敏度為90.9%，特異度為46.7%。另外，輕度(CDR 1)時，可知如果將邊界值設定為6.88，則靈敏度為88.9%，特異度為90.0%。
【表5】
由以上結果可知，即使是極輕度(CDR 0.5)、輕度(CDR 1)的癡呆症，藉由將CSF中和血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量與Con A鍵合量相乘，也能夠顯示靈敏度與特異度二者為高比例。
實施例7<利用了ELISA法的CSF的澱粉狀β蛋白質42的測定> CSF中和血液中的澱粉狀β蛋白質42(Aβ42)使用Aβ42夾層ELISA盒(Human Amyloid β(1-42)Assay kit(ImmuneBiological，Japan))來測定。向使抗Aβ42抗體(polyclonal antibody against human Aβ42)固相化而成的板加入各100μl以稀釋用緩衝液稀釋了的檢體或者標準(Human Aβ42 Standard， 1，600pg/ml)，在4℃孵化一晩。反應後，用清洗液 300μl清洗各容池7次，加入各100μl以標識抗體用溶解液稀釋了的HRP標識抗Aβ42抗體(monoclonalantibody against human Aβ42)，在4℃孵化1小時。反應後，以300μl 的清洗液清洗各容池9次，加入各100μl的TMB 基質液。在25℃發色30分鐘後，加入各100μl反應停止液(1N H2SO4)後停止反應。用酶標儀測定450nm處的吸光度，以Aβ42標準的吸光度製備標準曲線。依據該標準曲線計算檢體中的Aβ42量。
<Aβ42與WGA鍵合性糖鏈或者Con A鍵合性糖鏈的相關> 圖10是表示CSF中的Aβ42的量與補體C3蛋白質的WGA鍵合性糖鏈或者ConA鍵合性糖鏈的量的相關的圖。其結果顯示WGA鍵合性糖鏈、ConA鍵合性糖鏈均與Aβ42正相關，分別為p < 0.01的明顯相關。
已報告AD患者的CSF中，Aβ42減少，但相反該減少並不引起阿爾茨海默氏病異常。但是，AD患者中的Aβ42的減少與補體C3蛋白質的糖鏈量(WGA和Con A鍵合性糖鏈的兩者的量)的減少顯示正相關由圖10的結果可知。由此，測定脊髓液中的澱粉狀β蛋白質與補體C3蛋白質的糖鏈量(WGA和Con A鍵合性糖鏈的兩者的量)，由其量比能夠檢測阿爾茨海默氏病。
圖11是表示CSF中的Aβ42的量與血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合性糖鏈的量相關的圖。其結果顯示WGA鍵合性糖鏈的量與澱粉狀β蛋白質42的量正相關，是p < 0.05的明顯相關。
按圖11的結果可知，將AD患者的CSF中的Aβ42減少到顯示與血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合性糖鏈的量正相關(P < 0.05為明顯相關)的程度。這是因為由血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合性糖鏈量的減少能夠導出CSF中的Aβ42量的減少。由此，可知測定血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合性糖鏈量，由該量的減少能夠檢測出阿爾茨海默氏病。
實施例8<Con A鍵合量與WGA鍵合量的量比> 圖12是表示CSF中的補體C3蛋白質的Con A鍵合量與WGA鍵合量的相關的圖。可知對照為相對於弱相關(相關係數r = 0.29)，AD患者顯示適度相關(r = 0.66)。
由以上結果可知，存在於AD患者的CSF中的補體C3蛋白質的糖鏈與對照相比較，相對於WGA鍵合性糖鏈，Con A鍵合性糖鏈減少。
實施例9<CSF中的WGA鍵合量與血液中的WGA鍵合量的量比> 圖13是表示AD患者的CSF中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量與血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量相關的圖。其結果顯示CSF中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量與血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量正相關，顯示為p < 0.05的明顯相關。
由以上結果可知，對於AD患者，如果血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量減少，則CSF中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量也減少。如果相對於健康患者血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量，AD患者血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量減少，則AD患者的CSF中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量也減少。可以說與該情況相反的情況也相同。由此，如果考慮圖2與圖3的結果，則僅能觀察到CSF或者血液中任一個中的WGA的鍵合量相對於補體C3蛋白質而減少，就能夠進行阿爾茨海默氏病的檢測。
在各實施例中使用的統計分析為Mann-Whitney U檢驗(兩側檢驗)。各變數間的相關使用皮爾遜的積差相關係數進行評價。receiver operatingcharacteristic(ROC)分析用於計算靈敏度、特異度、邊界值而實施。
<考察>如本實施例的結果，藉由定量檢測體液中的來源於補體C3蛋白質的糖鏈的量，從而能夠進行阿爾茨海默氏病的診斷。另外，藉由定量檢測體液中的補體C3蛋白質的糖鏈的量，從而與以往的標記不同，能夠進行阿爾茨海默氏病的早期診斷、進行阿爾茨海默氏病與呈現類似症狀的其他癡呆症的鑑別診斷，在極輕度或輕度的階段開始阿爾茨海默氏病的治療。
另外，藉由使用WGA鍵合量與Con A鍵合量的相乘值，能夠進行使其與對照的差更明確的阿爾茨海默氏病的診斷。並且，由上述糖鏈中的甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量的量比，能夠更簡便且迅速地進行阿爾茨海默氏病的診斷。另外，藉由進行組合了Aβ42、CDR的評價結果的複合的診斷，從而能夠可靠地進行阿爾茨海默氏病診斷。
以上，依據實施例說明本發明。該實施例只是例示，能夠進行各種變形例，並且這類變形例也在本發明的範圍，這是本領域技術人員所能夠理解的。
圖1是表示對在CSF中和血液中的對照組以及阿爾茨海默氏病患者(AD)群的補體C3蛋白質濃度進行測定的結果的圖。圖2是表示對在CSF中的以對照組和AD患者群的補體C3蛋白質為來源的糖鏈的量進行測定的結果的圖。圖3是表示對血液中的以對照組和AD患者群的補體C3蛋白質為來源的糖鏈的量進行測定的結果的圖。圖4是表示測定CSF中的對照組和AD患者群的補體C3蛋白質的糖鏈的WGA鍵合量和Con A鍵合量，將各自組中的WGA鍵合量和Con A鍵合量相乘的結果的圖。圖5是表示測定血液中的對照組和AD患者群的補體C3蛋白質的糖鏈的WGA鍵合量和Con A鍵合量，將各自組中的WGA鍵合量和Con A鍵合量相乘的結果的圖。圖6是表示按臨床的癡呆症評定量表(CDR)分析的在CSF中和血液中的對照組和AD患者群的補體C3蛋白質的糖鏈的WGA鍵合量的結果的圖。圖7是表示按CDR分析的CSF中和血液中的對照組和AD患者群的補體C3蛋白質的糖鏈的Con A鍵合量的結果的圖。圖8是表示測定按CDR分析的CSF中的對照組和AD患者群的補體C3蛋白質的糖鏈的WGA鍵合量與Con A鍵合量，將各自組中的WGA鍵合量和Con A鍵合量相乘的結果的圖。圖9是表示測定按CDR分析的血液中的對照組和AD患者群的補體C3蛋白質的糖鏈的WGA鍵合量與Con A鍵合量，將各自組中的WGA鍵合量和Con A鍵合量相乘的結果的圖。圖10是CSF中的AD患者群的澱粉狀β蛋白質42的量與補體C3蛋白質的WGA鍵合量或者Con A鍵合量的相關圖。圖11是AD患者群的CSF中的澱粉狀β蛋白質42的量與血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量的相關圖。圖12是CSF中的對照組以及AD患者群的補體C3蛋白質的WGA鍵合量與Con A鍵合量的相關圖。圖13是AD患者的CSF中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量與血液中的補體C3蛋白質的WGA鍵合量的相關圖。

权利要求:
Claims (30)
[1] 一種診斷套組，用於診斷阿爾茨海默氏病，其特徵在於：該診斷套組具有一糖鏈檢測單元，該糖鏈檢測單元用於定量檢測一糖鏈的量，其中該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質。
[2] 如申請專利範圍第1項所述的診斷套組，其中，將相對於健康哺乳動物中的所述糖鏈的量的、與所述健康哺乳動物同種的所述受驗體的所述糖鏈的量表示為阿爾茨海默氏病的症狀指標。
[3] 如申請專利範圍第1項或第2項所述的診斷套組，其中，所述糖鏈的量為綜合糖鏈中的甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量得到的值。
[4] 如申請專利範圍第3項所述的診斷套組，其中，所述綜合得到的值為藉由乘算得到的值。
[5] 如申請專利範圍第1至4項中任一項所述的診斷套組，更包含一已知標記檢測單元，該已知標記檢測單元定量檢測已知的阿爾茨海默氏病診斷標記的量。
[6] 如申請專利範圍第5項所述的診斷套組，其中，將作為哺乳動物的受驗體中的所述糖鏈的量與所述已知標記的量的量比表示為阿爾茨海默氏病的症狀指標。
[7] 如申請專利範圍第5項或者第6項所述的診斷套組，其中，所述已知標記為澱粉狀β蛋白質。
[8] 如申請專利範圍第1至7項中任一項所述的診斷套組，其中，將作為哺乳動物的受驗體中的所述糖鏈的甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量的量比表示為阿爾茨海默氏病的症狀指標。
[9] 如申請專利範圍第1至8項中任一項所述的診斷套組，其中，所述體液為脊髓液或血液。
[10] 如申請專利範圍第1至9項中任一項所述的診斷套組，其中，所述受驗體為依據癡呆症重症度評價得到的診斷結果為極輕度或者輕度的受驗體。
[11] 如申請專利範圍第10項記載的診斷套組，其中，所述癡呆症重症度評價為臨床的癡呆症評定量表。
[12] 如申請專利範圍第1至11項中任一項所述的診斷套組，其中，所述糖鏈為WGA與Con A鍵合性的糖鏈。
[13] 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述的診斷套組，其中，所述糖鏈檢測單元包含用於凝集素酶免疫測定法的凝集素或者用於酶免疫測定法的糖鏈的識別抗體。
[14] 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述的診斷套組，其中，所述糖鏈檢測單元包含用於凝集素親和電泳的凝集素。
[15] 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述的診斷套組，其中，所述糖鏈檢測單元包含用於凝集素印跡分析的凝集素或者用於免疫印跡分析的糖鏈的識別抗體。
[16] 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述的診斷套組，其中，所述糖鏈檢測單元包含用於薄層色譜的凝集素或者糖鏈的識別抗體。
[17] 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述的診斷套組，其中，所述糖鏈檢測單元包含一凝集素陣列用晶片或一使用了糖鏈識別抗體的抗體陣列用晶片。
[18] 如申請專利範圍第13至17項中任一項所述的診斷套組，其中，所述凝集素為WGA和/或Con A。
[19] 如申請專利範圍第1至12項中任一項所述的診斷套組，其中，所述糖鏈檢測單元包含一液體色譜，用以檢測自補體C3蛋白質切斷的糖鏈。
[20] 一種診斷標記，用於診斷阿爾茨海默氏病，其特徵在於該診斷標記含有一糖鏈的量，該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質。
[21] 如申請專利範圍第20項所述的診斷標記，其中，所述糖鏈的量為相對於健康哺乳動物中的所述糖鏈的量的、與所述哺乳類同種的所述受驗體的所述糖鏈的量。
[22] 如申請專利範圍第20項或第21項所述的診斷標記，其中，還包含已知的阿爾茨海默氏病診斷標記的量。
[23] 如申請專利範圍第22項所述的診斷標記，其中，包含所述糖鏈的量與所述已知標記的量的量比。
[24] 如申請專利範圍第20至23項中任一項所述的診斷標記，其中，所述糖鏈的量為該糖鏈的甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量的量比。
[25] 一種檢測方法，用以檢測阿爾茨海默氏病的症狀指標，其特徵在於：包含定量檢測一糖鏈的量的步驟，該糖鏈源自於作為受驗體的哺乳動物體液試樣中的補體C3蛋白質。
[26] 如申請專利範圍第25項所述的檢測方法，更包括：判斷相對於健康哺乳動物的所述糖鏈的量，與所述哺乳動物同種的所述受驗體的所述糖鏈的量是否明顯變化的步驟。
[27] 如申請專利範圍第25項或第26項所述的檢測方法，更包括定量檢測已知的阿爾茨海默氏病診斷標記的量的步驟。
[28] 如申請專利範圍第27項所述的方法，更包括計算所述糖鏈的量與所述已知標記的量的量比的步驟。
[29] 如申請專利範圍第25至28項中任一項所述的檢測方法，其中，所述定量檢測所述糖鏈的量的步驟為定量檢測甘露糖量和N-乙醯葡糖胺量的步驟。
[30] 如申請專利範圍第29項所述的檢測方法，更包括計算所述甘露糖量和所述N-乙醯葡糖胺量的量比的步驟。

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WO2009051599A1|2009-04-23|Use of biomarkers of alzheimer's disease for diagnostic tests and drug screening

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同族专利:

公开号 | 公开日

JPWO2013021962A1|2015-03-05|

JP5892169B2|2016-03-23|

TWI542877B|2016-07-21|

WO2013021962A1|2013-02-14|

引用文献:

公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题

WO2008029886A1|2006-09-06|2008-03-13|National University Corporation Tottori University|Trousse pour le diagnostic de la maladie d'Alzheimer, marqueur de diagnostic et procédé de détection de l'indicateur pour l'état pathologique|WO2021045065A1|2019-09-02|2021-03-11|富士レビオ株式会社|レクチン結合性物質測定方法及びレクチン結合性物質測定キット、並びに、これらに用いる捕捉担体|

WO2021045061A1|2019-09-02|2021-03-11|富士レビオ株式会社|レクチン結合性物質測定方法及びレクチン結合性物質測定キット、並びに、これらに用いるブロック化標識レクチン|

CN113311056A|2021-05-10|2021-08-27|中国医学科学院北京协和医院|用于遗传性血管水肿的标志物及其应用|

法律状态:

优先权:

申请号 | 申请日 | 专利标题

JP2011173946||2011-08-09||

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