 抗人類ｘｃｒ１抗體
专利摘要:
本發明的目的係提供一結合人類XCR1的單克隆抗體，其中該抗體結合包括選自下組的至少三個胺基酸的線性表位或非連續表位，該組由以下各項組成：SEQ ID NO：91的胺基酸序列中的第8、第11、第12、第13、第14、第16、第17、第22、第23、第176、和第177個胺基酸。 公开号:TW201311725A 申请号:TW101131633 申请日:2012-08-30 公开日:2013-03-16 发明作者:Yoshimasa Sakamoto；Miyuki Nishimura；Tetsu Kawano；Yukihisa Sawa；Toshio Imai 申请人:Eisai R&D Man Co Ltd； IPC主号:C07K16-00
专利说明:
抗人類XCR1抗體 本發明涉及一結合人類XCR1的抗體。 趨化因子係一對白細胞趨化性和白細胞啟動具有作用的鹼性肝素結合蛋白的集合名詞。基於不同的趨化因子的一級結構的比較，根據保守半胱胺酸殘基的位置，將趨化因子分類為CXC、CC、C、和CX3C亞家族。XCL1(也稱為淋巴細胞趨化因子(Ltn)或淋巴細胞趨化因子α(Ltn-α))和XCL2(也稱為淋巴細胞趨化因子β(Ltn-β))係被分類為上述亞家族C的趨化因子。XCR1(也稱為GPR5、SCM-1α、或ATAC)係G蛋白偶聯趨化因子受體，它特異性結合XCL1和XCL2。 已經在mRNA水平檢驗了XCR1在不同的人類組織中的表達。據報導，XCR1在胎盤中高表達，但是在脾臟和胸腺中低表達(Yoshida(吉田)T、Imai(今井)T、Kakizaki(柿崎)M、Nishimura(西村)M、Takagi(高木)S、Yoshie(吉家)O.「Identification of Single C motif-1/lymphotactin receptor XCR1(單C基序-1/淋巴細胞趨化因子受體XCR1的鑒定)」，J.Biol.Chem.(生物化學雜誌)，273：16551-16554(1998))。另外，XCR1主要在樹突細胞中表達。在小鼠中，XCR1高表達，特別是在CD8α+樹突細胞中(Crozat(克羅紮)K、Guiton(吉頓)R、Contreras(孔特雷拉斯)V、Feuillet(富耶)V、Dutertre(迪泰特)CA、Ventre(文特雷)E、Vu Manh(烏曼)TP、Baranek(巴拉內克)T、Storset(斯托賽特)AK、Marvel(馬維爾)J、Boudinot(布迪諾特)P、Hosmalin(奧斯馬蘭)A、Schwartz(施瓦茲)-Cornil(科爾尼)I、Dalod(戴洛德)M「The XC chemokine receptor 1 is a conserved selective marker of mammalian cells homologous to mouse CD8α+ dendritic cells(XC趨化因子受體1係與小鼠CD8α+樹突細胞同源的哺乳動物細胞的保守的選擇性標記)」，J Exp Med(實驗醫學雜誌)，207：1283-1292(2010)；以及Dorner(多爾納)BG、Dorner(多爾納)MB、Zhou(周)X、Opitz(奧皮茨)C、Mora(莫拉)A、Güttler(居特勒)S、Hutloff(哈特洛夫)A、Mages(馬格斯)HW、Ranke(蘭克)K、Schaefer(舍費爾)M、Jack(傑克)RS、Henn(亨恩)V、Kroczek(克羅切克)RA「Selective expression of the chemokine receptor XCR1 on cross-presenting dendritic cells determines cooperation with CD8+ T-cells(在交叉呈遞的樹突細胞上的趨化因子受體XCR1的選擇性表達決定了與CD8+T細胞的合作)，」Immunity(免疫)，31：823-833(2009))。CD8α+樹突細胞通常存在於次級淋巴組織(例如脾臟和淋巴結)中，並且被已知為進行「交叉呈遞」，它在針對感染的反應和對腫瘤細胞的免疫應答中起重要作用。也已知XCR1在被認為是小鼠CD8α+樹突細胞的同系物的人類CD141+樹突細胞中高表達(Bachem(巴赫姆)A、Güttler(居特勒)S、Hartung(哈通)E、Ebstein(埃布斯坦)F、Schaefer(含費爾)M、Tannert(坦納特)A、Salama(薩拉馬)A、Movassaghi(莫瓦薩吉)K、Opitz(奧皮茨)C、Mages(馬格斯)HW、Henn(亨恩)V、Kloetzel(克勒策爾)PM、Gurka(古爾卡)S、Kroczek(克羅切克)RA，「Superior antigen cross-presentation and XCR1 expression define human CD11c+CD141+ cells as homologues of mouse CD8+ dendritic cells(超抗原交叉呈遞和XCR1將人類CD11c+CD141+細胞定義為小鼠CD8+樹突細胞的同系物)」，J Exp Med(實驗醫學雜誌)，207：1273-1281(2010))。 從細胞外被攝取到抗原呈遞細胞內的抗原通常被降解為肽，並且被呈遞到II類主要組織相容性抗原上(II類MHC)，並且被CD4+ T細胞識別。相反，存在一情況，其中從細胞外攝取的抗原經由不同於上述通路的一條通路而呈遞到I類主要組織相容性抗原上(I類MHC)。該抗原呈遞過程被稱為「交叉呈遞」。在該過程中，CD8+ T細胞識別呈遞到I類MHC上的抗原，並且然後分化為在宿主中防禦和消除腫瘤細胞中起作用的細胞毒性T細胞(CTL)(Kurts(庫爾茨)C、Robinson(魯賓遜)BW、Knolle(克諾勒)PA，「Cross-priming in health and disease(在健康和疾病中的交叉啟動)」，Nat Rev Immunol(自然評論：免疫學)，10：403-414(2010))。 在炎症反應期間發生不同的免疫相關細胞的遷移。特別是發生樹狀細胞到局部炎症部位的遷移，用於抗原的吞噬作用。在引起樹突細胞的這種遷移中，趨化因子和趨化因子受體起重要作用。在遷移至局部炎症部位以後，該等樹突細胞將抗原呈遞至T細胞，並且啟動T細胞。隨後，資訊從T細胞傳遞至很多免疫更相關細胞，擴大該免疫反應(Cravens(克雷文斯)PD、Lipsky(利普斯基)PE，「Dendritic cells,chemokine receptors and autoimmune inflammatory diseases(樹突細胞、趨化因子受體和自身免疫炎性疾病)」，Immunol Cell Biol(免疫學和細胞生物學)，80：497-505(2002))。 在抗原呈遞細胞中，樹突細胞具有特別優良的抗原呈遞能力，並且在T細胞的啟動中起非常重要的作用。已經表明，因為T細胞涉及在不同的免疫疾病(包括自身免疫疾病)的發展和惡化，控制樹突細胞就是控制T細胞的啟動，這可以導致不同免疫疾病的緩解(Cravens(克雷文斯)PD、Lipsky(利普斯基)PE，「Dendritic cells,chemokine receptors and autoimmune inflammatory diseases(樹突細胞、趨化因子受體和自身免疫炎性疾病)」，Immunol Cell Biol(免疫學和細胞生物學)，80：497-505(2002)；以及Waldner(瓦爾德內爾)H，「The role of innate immune responses in autoimmune disease development(固有免疫應答在自身免疫疾病發展中的作用」，Autoimmun(自身免疫)，Rev 8：400-404(2009))。 另外，已經顯示，兔衍生的針對人類XCR1的多克隆抗體具有抑制XCL誘導的正常口腔角質化細胞和口腔癌細胞的遷移的作用(Khurram(胡拉姆)SA、Whawell(惠威爾)SA、Bingle(賓格爾)L、Murdoch(默多克)C、McCabe(麥凱布)BM、Farthing(法辛)PM，「Functional expression of the chemokine receptor XCR1 on oral epithelial cells(趨化因子受體在口腔上皮細胞上的功能表達)」，J Pathol(病理學雜誌)，221：153-63(2010))。 使用疾病動物模型，迄今已經積累了樹突細胞所涉及的免疫疾病的發展、惡化等等知識。然而，目前對於許多免疫疾病既沒有開發出有效的治療方法也沒有開發出有效的預防方法。此外，雖然已知抗人類XCR1抗體具有抑制細胞遷移的作用(Khurram(胡拉姆)SA、Whawell(惠威爾)SA、Bingle(賓格爾)L、Murdoch(默多克)C、McCabe(麥凱布)BM、Farthing(法辛)PM，「Functional expression of the chemokine receptor XCR1 on oral epithelial cells(趨化因子受體在口腔上皮細胞上的功能表達)」，J Pathol(病理學雜誌)，221：153-63(2010))，但是因為這樣的抗體係一兔衍生的多克隆抗體，所以它不太可能作為一藥物產品而立即在臨床上可應用。另外，以上文獻並未表明這樣一抗體抑制樹突細胞的細胞遷移，並且甚至不可能預測這樣一抗體將有效治療或預防免疫疾病。 本發明的一目標係提供一選擇性結合人類XCR1的單克隆抗體；較佳的是，一選擇性結合人類XCR1並且抑制細胞遷移的單克隆抗體；進一步較佳的是，一基於上述作用的有效治療或預防免疫疾病(特別是皮膚免疫疾病)的抗體。 本發明的諸位發明人進行了在嘗試解決以上問題方面的集中研究。作為結果，他們開發了結合人類XCR1的抗體，並且發現這樣的抗體具有抑制細胞遷移的作用以及治療或預防與樹突細胞的遷移有關的免疫疾病(例如皮膚免疫疾病)的顯著作用。 在以下的本說明書中，上述抗體有時簡單地稱為「抗體」、「本發明的抗體」、或「抗人類XCR1抗體」。 本發明的抗體結合人類XCR1。本發明的抗體包括抑制人類XCR1與人類XCL1之間的結合的抗體。這樣一抗體具有作為添加至人類XCR1-人類XCL1結合抑制劑的一活性成分的潛力。 本發明的抗體還包括抑制細胞遷移，特別是樹突細胞的遷移的抗體。這樣一抗體具有作為添加至細胞遷移抑制劑，特別是樹突細胞遷移抑制劑的一活性成分的潛力。此外，本發明的抗體還包括特異性識別BDCA3(也稱為CD141)陽性細胞的抗體。因此，一包括本發明的抗體的藥用組合物具有作為用於治療與細胞遷移(特別是樹突細胞遷移)相關的免疫疾病的治療劑的潛力。特別是，該藥用組合物具有作為用於治療皮膚免疫疾病的治療劑的潛力，該等疾病例如遲髮型超敏反應、牛皮癬、類牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性水皰性疾病(例如天皰瘡、類天皰瘡、或後天性大皰性表皮鬆解症)、膿皰病、系統性硬皮病、妊娠皰疹、線狀IgA大皰皮病、斑禿、白癜風、與膠原病相關的皮膚病(例如系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合症、或混合性結締組織病)，與阿狄森病相關的皮膚病、與移植物抗宿主病相關的皮膚病(GVHD)、濕疹、以及蕁麻疹。 除了該等皮膚免疫疾病之外，本發明的抗體還具有作為用於治療免疫疾病的治療劑的潛力，該等疾病例如1型糖尿病、腎小球腎炎、自身免疫性肝炎、多發性硬化、強直性脊柱炎、甲狀腺炎、移植排斥、克羅恩病、類風濕性關節炎、炎症性腸病、前葡萄膜炎、韋格納肉芽腫病、或白塞病。實施方式的說明 對於本領域技術人員而言，基於已知文獻和類似文章，很容易並可靠地啟動用於實踐本發明的不同技術，除了來源係在此清楚鑒定的那些技術之外。例如，關於基因工程和分子生物學技術，可以參考以下文獻，例如Sambrook(薩姆布魯克)和Russell(羅素)，「Molecular Cloning：A Laboratory Manual(分子克隆實驗指南)」，Cold Spring Harbor Laboratory Press(冷泉港實驗室出版社)，紐約，(2001)；以及Ausubel(奧薩貝)，F M等人，「Current Protocols in Molecular Biology(最新分子生物學實驗方法彙編)」，John Wiley & Sons(約翰威立父子出版公司)，紐約，NY。 另外，關於抗體工程技術，可以參考以下文獻，例如Kabat(卡巴特)等人，「Sequences of Proteins of Immunological Interest(免疫感興趣的蛋白質序列)」，U.S.Department of Health and Human Services(美國衛生和公眾服務部)，1983；以及Konterman(孔特曼)和Dübel(杜貝)，「Antibody Engineering(抗體工程)」，Springer(施普林格)。 術語解釋 術語「核酸」包含例如核糖核苷酸、去氧核糖核苷酸、以及它們的修飾形式。核酸可以是單鏈的或雙鏈的，並且可以是多核苷酸或寡核苷酸。 術語「蛋白質」係指一種其中兩個或更多個胺基酸通過肽鍵連接的化合物。 術語「單克隆抗體」係指從一群基本上同質的抗體獲得的一抗體。換言之，包括在該群中的單獨的抗體係相同的，除了可以存在少量天然發生的突變以外。單克隆抗體係高度特異性的，並且導向單一抗原位點。此外，與包含導向不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體製劑相反，每一單克隆抗體導向抗原上的單一決定簇。除了它們的特異性之外，由於它們可以被合成而不被其他抗體污染，單克隆抗體也是有利的。修飾語「單克隆」係指從一群基本上同質的抗體獲得的抗體的特徵，並且不應當被解釋為表示抗體必須藉由任何具體的方法而生產。 例如，可以藉由首先由Köhler(科勒)G和Milstein(米爾斯坦)C在「Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity(融合細胞的連續培養物分泌具有預定義特異性的抗體)」，Nature(自然)，256：495-7(1975)中說明的雜交瘤方法，或者藉由一重組DNA方法(參見美國專利號4816567)製備將根據本發明而使用的單克隆抗體。 另外，藉由使用例如由Clackson(克拉克森)T、Hoogenboom(霍根布姆)HR、Griffiths(格里菲斯)AD、和Winter(溫特)G，「Making antibody fragments using phage display libraries(使用噬菌體展示文庫製造抗體片段)」，Nature(自然)，352：624-8(1991)；或Marks(馬克斯)JD、Hoogenboom(霍根布姆)HR、和Bonnert(邦內特)TP、McCafferty(麥考夫迪)J、Griffiths(格里菲斯)AD、Winter(溫特)G，「By-passing immunization：Human antibodies from V-gene libraries displayed on phage(旁路免疫：來自噬菌體上展示的V-基因文庫的人類抗體」，J Mol Biol(分子生物學雜誌)，222：581-97(1991)說明的一技術，可以從噬菌體抗體庫分離「單克隆抗體」。 胺基酸序列或核苷酸序列之間的「一致性」係指兩個或更多個可比較的胺基酸序列或核苷酸序列之間的一致的胺基酸序列或核苷酸序列的程度。因此，當兩個胺基酸序列或核苷酸序列之間的一致性高的時候，該等序列的一致性或相似性高。例如使用基於默認參數的一序列分析工具FASTA確定胺基酸序列或核苷酸序列之間的一致性水平。 可替代地，可以使用Karlin(卡爾林)和Altschul(阿特休爾)的演算法BLAST來確定(Karlin(卡爾林)S,Altschul(阿特休爾)SF，「Methods for assessing the statistical significance of molecular sequence features by using general scoring schemes(藉由使用總評分方案用於評估分子序列特徵的統計顯著性的方法」，Proc Natl Acad Sci USA(美國國家科學院院刊)，87：2264-2268(1990)；以及Karlin(卡爾林)S,Altschul(阿特休爾)SF，「Applications and statistics for multiple high-scoring segments in molecular sequences(用於分子序列中多個高分片段的應用和統計學)」，Proc Natl Acad Sci USA(美國國家科學院院刊)，90：5873-7(1993))。已經開發了基於上述BLAST演算法的程式，例如BLASTN和BLASTX(Altschul(阿特休爾)SF、Gish(吉什)W、Miller(米勒)W、Myers(梅耶斯)EW、Lipman(利普曼)DJ，「Basic local alignment search tool(基本局部比對搜索工具)」，J Mol Biol(分子生物學雜誌)，215：403-10(1990))。例如，在分析核苷酸序列時可以使用BLASTN，例如藉由設定分數為100並且字長為12作為參數。 另外，當分析胺基酸序列時可以使用BLASTX，例如藉由設定分數為50並且字長為3作為參數。 當使用BLAST和空位BLAST程式時，可以使用每一程式的預設參數。該等分析的具體技術係已知的。可以參考美國國家生物技術資訊中心(NCBI)的網站(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)。 抗人類XCR1抗體 本發明的抗體係分離的抗體。 本發明的抗體結合人類XCR1。人類XCR1的胺基酸序列係由NCBI參考序列：NP_001019815.1或NP_005274.1顯示的一胺基酸序列。關於該等胺基酸序列，可以參考NCBI網站(分別是http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/NP_001019815.1和http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/NP_005274.1)。 本發明的第一實施方式的一特異性抗體係一包括重鏈可變區的抗體，該可變區包括：在以下(A)或(a)中說明的一重鏈CDR 1，在以下(B)或(b)中說明的一重鏈CDR 2，以及在以下(C)或(c)中說明的一重鏈CDR 3；以及一輕鏈可變區，該輕鏈可變區包括：在以下(D)或(d)中說明的一輕鏈CDR 1，在以下(E)或(e)中說明的一輕鏈CDR 2，以及在以下(F)或(f)中說明的一輕鏈CDR 3。 (A)一由SEQ ID NO：53的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(B)一由SEQ ID NO：54的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(C)一由SEQ ID NO：55的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(D)一由SEQ ID NO：56的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(E)一由SEQ ID NO：57的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(F)一由SEQ ID NO：58的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3。 (a)一由SEQ ID NO：41的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(b)一由SEQ ID NO：42的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(c)一由SEQ ID NO：43的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(d)一由SEQ ID NO：44的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(e)一由SEQ ID NO：45的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(f)一由SEQ ID NO：46的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3。 有關本發明的抗體而定義的術語「CDR」係互補決定區(Complementarity Determining Region)的縮寫，並且還稱為互補決定區(complementarity determining region)。在免疫球蛋白的可變區中存在多個CDR，並且深深地涉及抗體與抗原的特異性結合。此外，「輕鏈CDR」係指存在於免疫球蛋白的輕鏈的可變區中的CDR，並且「重鏈CDR」係指存在於免疫球蛋白的重鏈的可變區中的CDR。 另外，「可變區」係指包括上述CDR 1至CDR 3的一區，(以下簡單地稱為「CDR 1至3」)。雖然CDR 1至3的排列順序並不特別受限制，但是較佳的是，以一種從N端到C端的順序方式的順序或相反的順序，或者經由稱為框架區(FR)的其他胺基酸序列而排列CDR 1、CDR 2、和CDR 3。此外，「重鏈可變區」係上述重鏈CDR 1至3所定位的一個區，並且「輕鏈可變區」係上述輕鏈CDR 1至3所定位的一個區。 如上所述，在每一可變區中，除了上述CDR 1至3以外的區被稱為框架區(FR)。特別是，在每一可變區中，在N端與CDR 1之間的區被定義為FR 1，在CDR 1與CDR 2之間的區被定義為FR 2，在CDR 2與CDR 3之間的區被定義為FR 3，並且在每一可變區中，在CDR 3與C端之間的區被定義為FR 4。 該等FR還具有作為用於連接CDR 1至3的連接序列的功能，CDR 1至3作為抗原識別序列是特別重要的。該等FR係有助於形成整個可變區的三維結構的區。 根據本發明的第一實施方式的一較佳的抗體係包括以下各項的一抗體：一重鏈可變區，該重鏈可變區包括：一以下(g)、以下(m)、或以上(a)的重鏈CDR 1，一以下(h)、以下(n)、或以上(b)的重鏈CDR 2，以及一以下(i)、以下(o)、或以上(c)的重鏈CDR 3；以及一輕鏈可變區，該輕鏈可變區包括：一以下(j)、以下(p)、或以上(d)的輕鏈CDR 1，一以下(k)、以下(q)、或以上(e)的輕鏈CDR 2，以及一以下(l)、以下(r)、或以上(f)的輕鏈CDR 3。 (g)一由SEQ ID NO：17的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(h)一由SEQ ID NO：18的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(i)一由SEQ ID NO：19的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(j)一由SEQ ID NO：20的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(k)一由SEQ ID NO：21的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，(l)一由SEQ ID NO：22的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3；(m)一由SEQ ID NO：29的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(n)一由SEQ ID NO：30的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(o)一由SEQ ID NO：31的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(p)一由SEQ ID NO：32的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(q)一由SEQ ID NO：33的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(r)一由SEQ ID NO：34的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3。 在(i)中說明的重鏈CDR 3和在(o)中說明的重鏈CDR 3包括一致的胺基酸序列。 本發明的第二實施方式的一抗體係包括以下各項的一抗體：包括在以上(A)-(C)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區，或包括在以上(a)-(c)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區；以及包括在以上(D)-(F)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區，或包括在以上(d)-(f)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區。 第二實施方式的一更佳的抗體係包括以下項中任何一項的一抗體：包括在以上(g)-(i)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區，包括在以上(m)-(o)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區，以及包括在以上(a)-(c)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區；以及以下各項中的任何之一：包括在以上(j)-(l)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區，包括在以上(p)-(r)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區，以及包括在以上(d)-(f)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區。 本發明的第三實施方式的一抗體係包括以下各項的一抗體：包括在以上(A)-(C)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區，以及包括在以上(D)-(F)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區，或一包括以下各項的抗體：包括在以上(a)-(c)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區，以及包括在以上(d)-(f)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區。 第三實施方式的一更佳的抗體係一包括以下各項的抗體：包括在以上(g)-(i)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區，以及包括在以上(j)-(l)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區；一包括以下各項的抗體：包括在以上(m)-(o)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區，以及包括在以上(p)-(r)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區；或一包括以下各項的抗體：包括在以上(a)-(c)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區，以及包括在以上(d)-(f)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區。 本發明的抗體的分子結構並不局限於免疫球蛋白的分子結構，只要該等抗體具有上述重和輕鏈可變區即可。具體結構的實例包括以下各項的分子結構：不包含Fc區的F(ab')2；藉由木瓜蛋白酶消化免疫球蛋白形成並且由CH1和CL域連同重和輕鏈可變區組成的Fab；不包括免疫球蛋白恒定區的Fv；以及scFv，它係一單鏈Fv抗體。 本發明的抗體還可以是多價的，其中結合了以上分子結構。藉由積累scFv構建體的技術形成這樣的多價抗體，如在藉由結合Fc區和上述scFv構建體而形成的scFv-Fc構建體中；以及一稱為微抗體(minibody)的構建體，藉由結合恒定區的CH3域和上述scFv構建體而形成。術語「多價的」係指存在多個抗原結合位點。關於本發明的抗體，當存在結合人類XCR1的的多個位點時，以相同的含義使用該術語。 除了上述重和輕鏈可變區以外，本發明的抗體還可以具有人類恒定區。 在免疫球蛋白中，該等重鏈的「恒定區」包括稱為CH1、CH2、和CH3的域；並且該等輕鏈的「恒定區」包括稱為CL的域。 如上所述，當本發明的抗體具有恒定區時，較佳的是重鏈可變區被連接至CH1、CH2、和CH3域中的至少一個，並且較佳的是輕鏈可變區被連接至CL。此外，重鏈可變區較佳的是直接連接至CH1。 本發明的抗體的恒定區係衍生自人類免疫球蛋白的恒定區，較佳的是衍生自免疫球蛋白IgG的恒定區。人類免疫球蛋白的亞型不特別受限制，並且可以被適當地選擇，例如根據是否要將ADCC活性、CDC活性、以及下述類似活性賦予該等抗體。 術語「ADCC活性」係對抗體依賴性細胞毒性(Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity)活性的縮寫。它係這樣一種活性，其中表達對抗體FC區特異的受體的細胞(例如NK細胞)結合該等抗體，並且破壞存在於該等抗體附近的細胞。另外地，術語「CDC活性」係對補體依賴性細胞毒性(Complement-Dependent Cytotoxicity)活性的縮寫。在人類的情況下，具有高ADCC和/或CDC活性的IgG亞型係IgG1，並且具有低ADCC和/或CDC活性的IgG亞型係IgG2或IgG4。 在本發明的抗體的Fc區中的胺基酸殘基可以被突變，以便誘導在ADCC和/或CDC活性方面的變化。有待引入的突變並不特別受限制，並且可以引入已知的突變。例如為了增加ADCC活性，可以將以下突變引入IgG1的恒定區：S239D、I332E、S239D/I332E、S239D/I332E/A330L等等(Lazar(拉紮爾)GA、Dang(黨)W、Karki(卡爾基)S、Vafa(瓦法)O、Peng(彭)JS、Hyun(玄)L、Chan(陳)C、Chung(鐘)HS、Eivazi(艾瓦茲)A、Yoder(約德)SC、Vielmetter(菲爾梅特)J、Carmichael(卡邁克爾)DF、Hayes(海耶斯)RJ、Dahiyat(達希亞特)BI，「Engineered antibody Fc variants with enhanced effector function(具有增強的效應子功能的工程抗體Fc變體)」，Proc Natl Acad Sci USA(美國國家科學院院刊)，103：4005-10(2006))；以及S298A、K334A、S298A/K334A、S298A/E333A/K334A等等(Shields(希爾茲)RL、Namenuk(納門諾克)AK、Hong(洪)K、Meng(孟)YG、Rae(瑞伊)J、Briggs(布裡格斯)J、Xie(謝)D、Lai(萊)J、Stadlen(斯塔德倫)A、Li(李)B、Fox(福克斯)JA、Presta(普裡斯坦)LG，「High resolution mapping of the binding site on human IgG1 for Fc gamma RI,Fc gamma RII,Fc gamma RIII,and FcRn and design of IgG1 variants with improved binding to the Fc gamma R(人類IgG1上Fc γ RI、Fc γ RII、Fc γ RIII、和FcRn的結合位點的高解析度作圖以及對Fc γ R具有改進的結合的IgG1變體的設計」，J Biol Chem(生物化學雜誌)，276：6591-604(2001))。 增加CDC活性的突變的實例包括S267E、H268F、S324T、S267E/H268F、S267E/S324T、H268F/S324T、S267E/H268F/S324T，(Moore(莫耳)GL、Chen(陳)H、Karki(卡爾基)S、Lazar(拉紮爾)GA，「Engineered Fc variant antibodies with enhanced ability to recruit complement and mediate effector functions(具有增強的用來恢復補體並且介導效應子功能的能力的工程化Fc變體抗體)」，MAbs(單克隆抗體)，2：181-9(2010))。 另外地，為了降低ADCC活性，可以引入已知突變；例如V234A/G237A，(Cole(科爾)MS、Anasetti(阿納塞蒂)C、Tso(槽)JY，「Human IgG2 variants of chimeric anti-CD3 are nonmitogenic to T cells(嵌合抗CD3的人類IgG2變體對T細胞係非促有絲分裂的)」，J Immunol(免疫學雜誌)，159：3613-21(1997))，H268Q/V309L/A330S/P331S，(An(安)Z、Forrest(福里斯特)G、Moore(莫耳)R、Cukan(庫康)M、Haytko(黑特庫)P、Huang(黃)L、Vitelli(維特利)S、Zhao(趙)JZ、Lu(盧)P、Hua(花)J、Gibson(吉布森)CR、Harvey(哈威)BR、Montgomery(蒙哥馬利)D、Zaller(紮勒)D、Wang(王)F、Strohl(斯佐霍)W，「IgG2m4,an engineered antibody isotype with reduced Fc function(IgG2m4，具有降低的Fc功能的工程抗體同種型)」，MAbs(單克隆抗體)，1：572-9(2009))，以及類似突變。 上述有待突變的胺基酸的編號遵循Eu編號(Eu numbering)(參見Sequences of proteins of immunological interest(免疫學感興趣的蛋白質序列)，NIH公開號91-3242)。 嵌合抗體 在本發明的抗體中，其中重和輕鏈可變區包括衍生自非人種類的胺基酸序列並且恒定區包括衍生自人類的胺基酸序列的一抗體被定義為「嵌合抗體」。 本發明的嵌合抗體的第一實施方式係包括一由SEQ ID NO：13的胺基酸序列組成的重鏈和一具有SEQ ID NO：14的輕鏈的嵌合抗體。 如在表5中所示，在重鏈可變區中的上述重鏈CDR 1至3中，SEQ ID NO：13的胺基酸序列包括SEQ ID NO：17至19的重鏈CDR 1至3。此外，如在表5中所示，在輕鏈可變區中的上述輕鏈CDR 1至3中，SEQ ID NO：14的胺基酸序列包括SEQ ID NO：20至22的輕鏈CDR 1至3。 本發明的嵌合抗體包括由重鏈和/或輕鏈中的突變引起的變體，該重鏈由SEQ ID NO：13的胺基酸序列組成，該輕鏈由SEQ ID NO：14的胺基酸序列組成，只要這樣的突變並不完全消除嵌合抗體與人類XCR1的結合能力即可。 較佳的是藉由將突變引入到可變區的FR 1至FR 4(以下簡單地稱為「FR 1至4」)的至少之一中，或引入到SEQ ID NO：13和14的對應胺基酸序列的恒定區中的至少一個位點，而獲得這樣的重鏈和輕鏈中的變體。 引入到重鏈和輕鏈中的突變的具體數目不受特別限制。通常引入突變以獲得與突變前的胺基酸序列相比具有85%或更高的一致性、較佳的是90%或更高的一致性、更佳的是95%或更高的一致性、並且最佳的是99%或更高的一致性的變體。 在此使用的術語「突變」包括置換、缺失、插入等等。可以採用沒有具體限制的已知方法作為用於引入突變的具體方法。例如，在置換的情況下，可以採用保守置換。術語「保守置換」係指用具有類似側鏈的另一胺基酸殘基取代一胺基酸殘基。 例如，在具有鹼性側鏈的胺基酸殘基(例如賴胺酸、精胺酸以及組胺酸)之間的置換相應於保守置換。另外，在胺基酸殘基之間的以下置換也相應於保守置換：在具有酸性側鏈的胺基酸殘基(例如天冬胺酸和穀胺酸)之間的置換；在具有不帶電的極性側鏈的胺基酸殘基(例如甘胺酸、天冬醯胺、穀胺醯胺、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、和半胱胺酸)之間的置換；在具有非極性側鏈的胺基酸殘基(例如丙胺酸、纈胺酸、亮胺酸、異亮胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、蛋胺酸、和色胺酸)之間的置換；在具有β支化側鏈的胺基酸殘基(例如蘇胺酸、纈胺酸、和異亮胺酸)之間的置換；以及在具有芳香族側鏈的胺基酸殘基(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、和組胺酸)之間的置換。 人源化抗體 在本發明的抗體中，包括在重鏈和輕鏈可變區中的上述CDR 1至3的在其中FR 1-4包括人類衍生的胺基酸序列或其變體的抗體被定義為「人源化抗體」。 這樣的包括人類衍生的胺基酸序列的FR不受特別限制，並且可以基於已知技術而確定。 這樣的FR的實例包括完全的人類框架區或亞區，其中衍生自人類種系序列的FR係較佳的。可以適當參考例如NCBI網站，其中顯示了目前已知的FR的序列的清單，作為完全的人類框架區或亞區的實例。 人類重鏈可變區的序列的非限制性實例包括VH1-18、VH1-22、VH1-24、VH1-3、VH1-45、VH1-46、VH1-58、VH1-69、VH1-8、VH2-26、VH2-5、VH2-70、VH3-11、VH3-13、VH3-15、VH3-16、VH3-20、VH3-21、VH3-23、VH3-30、VH3-33、VH3-35、VH3-38、VH3-43、VH3-48、VH3-49、VH3-53、VH3-64、VH3-66、VH3-7、VH3-72、VH3-73、VH3-74、VH3-9、VH4-28、VH4-31、VH4-34、VH4-39、VH4-4、VH4-59、VH4-61、VH5-51、VH6-1、和VH7-81。 人類輕鏈可變區的序列的非限制性實例包括VL1-11、VL1-13、VL1-16、VL1-17、VL1-18、VL1-19、VL1-2、VL1-20、VL1-22、VL1-3、VL-4、VL1-5、VL1-7、VL1-9、VL2-1、VL2-11、VL2-13、VL2-14、VL2-15、VL2-17、VL2-19、VL2-6、VL2-7、VL-8、VL3-2、VL3-3、VL3-4、VL4-1、VL4-2、VL4-3、VL4-4、VL4-6、VL5-1、VL5-2、VL5-4、和VL5-6。 完全的人類FR選自該等功能性種系基因。由於有限數目的胺基酸的修飾，通常該等FR各自是不同的。可以結合在本說明書中說明的該等CDR來使用該等FR。將與上述CDR結合使用的人類FR的非限制性附加實例包括KOL、NEWM、REI、EU、TUR、TEI、LAY、和POM。關於該等人類FR的實例，可以參考以下文獻：Kabat(卡巴特)等人，「Sequences of Proteins of Immunological Interest(免疫學感興趣的蛋白質的序列)」，US Department of Health and Human Services(美國衛生和公眾服務部)，NIH(美國國立衛生研究院)(1991)美國；Wu(吳)TT、Kabat(卡巴特)EA，「An analysis of the sequences of the variable regions of Bence Jones proteins and myeloma light chains and their implications for antibody complementarity(本周蛋白和骨髓瘤輕鏈的可變區的序列的分析以及它們對抗體互補性的的含意)」，J Exp Med(實驗醫學雜誌)，132：211-50(1970)；等等。 本發明的人源化抗體的第一實施方式係包括包含SEQ ID NO：60或SEQ ID NO：64的胺基酸序列的一重鏈可變區和具有SEQ ID NO：68或SEQ ID NO：72的一輕鏈可變區的人源化抗體。 一更佳的實施方式係包括包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列的一輕鏈可變區的人源化抗體，或包括包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列的一輕鏈可變區的人源化抗體。 如分別在表11-1和12-1中所示，在重鏈可變區中的上述重鏈CDR 1至3中，SEQ ID NO：60和SEQ ID NO：64的胺基酸序列包括SEQ ID NO：17至19的重鏈CDR 1至3。如分別在表13-1和14-1中所示，在輕鏈可變區中的上述輕鏈CDR 1至3中，SEQ ID NO：68和SEQ ID NO：72的胺基酸序列包括SEQ ID NO：20-22的輕鏈CDR 1至3。 本發明的人源化抗體包括由重鏈可變區和/或輕鏈可變區中的突變引起的變體，該重鏈可變區包括SEQ ID NO：60或64的胺基酸序列，該輕鏈可變區包括SEQ ID NO：68或72的胺基酸序列，只要這樣的突變不完全消除與人類XCR1的結合能力即可。較佳的是藉由將突變引入對應的FR1至4而獲得重鏈和輕鏈可變區中的這樣的變體。 進入到重鏈和輕鏈可變區中的突變的具體數目並不特別受限制。通常引入突變以獲得具有與突變前的胺基酸序列相比85%或更高一致性、較佳的是90%或更高一致性、更佳的是95%或更高一致性、並且最佳的是99%或更高一致性的變體。 在此使用的術語「突變」包括置換、缺失、插入等等。如在使用上述嵌合抗體的情況下，可以採用保守置換和類似方法作為用於引入突變的具體方法。 本發明的人源化抗體的第二實施方式包括一包含人類恒定區的抗體。它的實例包括包含一重鏈(包含SEQ ID號：59或63的胺基酸序列)和一輕鏈(包含SEQ ID NO：67或71的胺基酸序列)的一人源化抗體。 一更佳的實施方式係包括包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的一重鏈和包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列的一輕鏈的一人源化抗體，或包括包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列的一重鏈和包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列的一輕鏈的一人源化抗體。 如在表11-1中所示，在上述重鏈CDR 1至3中，SEQ ID NO：59的胺基酸序列包括相應於SEQ ID NO：60的重鏈可變區的胺基酸序列，並且因此包括SEQ ID NO：17-19的重鏈CDR 1至3。此外，如在表13-1中所示，在上述輕鏈CDR 1至3中，SEQ ID NO：67的胺基酸序列包括相應於SEQ ID NO：68的輕鏈可變區的胺基酸序列，並且因此包括SEQ ID NO：20-22的輕鏈CDR 1至3。 上述重和/或輕鏈包括由突變引起的變體，只要這樣的突變不完全消除與人類XCR1的結合能力即可。較佳的是藉由將突變引入FR 1至4或恒定區來獲得在重鏈和輕鏈中的這樣的變體。 進入到重鏈和輕鏈中的突變的具體數目不受特別限制。通常引入突變以獲得具有與突變前的胺基酸序列相比85%或更高一致性、較佳的是90%或更高一致性、更佳的是95%或更高一致性、並且最佳的是99%或更高一致性的變體。 在此使用的術語「突變」包括置換、缺失、插入等等。如在使用上述嵌合抗體的情況下，可以採用保守置換和類似方法作為用於引入突變的具體方法。 抗體的功能 本發明的抗體結合人類XCR1。在此使用的術語「結合」的含義至少包含如在蛋白質之間的相互作用的情況下可見的藉由疏水鍵的結合。換言之，至少藉由疏水結合而結合人類XCR1的抗體就足以作為本發明的抗體。此外，在結合之後，本發明的抗體和人類XCR1可以或可以不被解離。 較佳的是，本發明的抗體特異性結合人類XCR1。如在此使用的術語「特異性結合」係指特異性結合人類XCR1，表示當人類XCR1與除了人類XCR1以外的分子特別是與人類XCR1的結構具有相似結構的分子(例如人類XCR1的同系物或人類XCR1的直系同源物)共存時，該等抗體優先結合人類XCR1。 那麼，本發明的抗體特異性結合人類XCR1並不表示結合人類XCR1的上述同系物或直系同源物的能力被排除。 可以藉由反應速率常數(例如Kd、Koff、或Kon值)評價本發明的抗體與人類XCR1的結合程度。藉由Koff值除以Kon值獲得Kd值。 本發明的抗體與人類XCR1之間的反應速率常數不受特別限制。 本發明的抗體結合人類XCR1的胞外域。具體地，該等抗體結合胺基酸區1至31、90至103、168至190、和251至267中的一或多個，它們對應於上述NCBI參考序列：NP_001019815.1或NP_005274.1的胺基酸序列(SEQ ID NO：91；圖10)的胞外域區。 更佳的是，在SEQ ID NO：91的胺基酸序列中，該等抗體結合選自下組的至少三個胺基酸，該組由以下各項組成：第8、第11、第12、第13、第14、第16、第17、第22、第23、第176、和第177個胺基酸。 所述「至少三個胺基酸」包括例如三個或更多個胺基酸、四個或更多個胺基酸、五個或更多個胺基酸、六個或更多個胺基酸、七個或更多個胺基酸、八個或更多個胺基酸、九個或更多個胺基酸、十個或更多個胺基酸、或十一個胺基酸。 注意的是，本發明中的「表位」還被稱為「抗原決定簇」，並且包括「線性表位」和「非連續表位」。「線性表位」係抗體藉由胺基酸序列的一級結構而不是藉由它的構象結構而識別的表位。「非連續表位」係基於更高級結構的被抗體藉由胺基酸序列的構象結構而識別的表位。 注意的是，本領域的技術人員可以藉由適當地修改本發明的實例中說明的方法來確定本發明的抗體的表位。例如，可以藉由使用已知方法合成由落在人類XCR1的胺基酸序列的胞外域內的所希望的胺基酸序列組成的蛋白質或肽，並且藉由已知方法證實所獲得的蛋白質或肽與抗體之間的結合來確定表位。可替代地，可以藉由已知方法，將適當的突變引入人類XCR1的胺基酸序列中的所希望的胺基酸來製備突變體，並且證實在所製備的突變體與抗體之間的結合是否減少而確認表位。 如上所述，因為本發明的抗體結合人類XCR1，本發明的抗體還包括抑制人類XCR1與人類XCL1之間的結合的抗體。人類XCL1還被稱為人類淋巴細胞趨化因子(Ltn)或人類淋巴細胞趨化因子α(Ltn-α)。這樣的抑制活性有時被稱為由本發明的抗體誘導的「中和活性」。因為人類XCR1作為體內受體蛋白而存在於細胞表面上，較佳的是在細胞表面上進行由本發明的抗體對人類XCR1與XCL1之間的結合的抑制。本發明的抗體是否具有針對人類XCR1與XCL2之間的結合的抑制活性並不重要，只要該等抗體具有至少抑制人類XCR1與XCL1之間的結合的活性即可。因此，本發明的抗體還包括不但抑制人類XCR1與XCL1之間的結合，而且還抑制XCR1與XCL2之間的結合的抗體。 較佳的細胞的實例包括與藉由人類XCR1與人類XCL1之間的結合而啟動的免疫系統有關的細胞，其中樹突細胞係特別佳的。特別是，如稍後說明的實例所示，因為本發明的抗體特異性識別BDCA3+樹突細胞(表達顯著量的人類XCR1蛋白的樹突細胞)，較佳的是該等抗體具有抑制BDCA3+樹突細胞上的人類XCR1與人類XCL1之間的結合的作用。 人類XCR1與人類XCL1之間的結合被本發明的該等抗體所抑制。這樣的抑制的形式的非限制性實例包括： (1)本發明的抗體在人類XCL1原來應當結合的位點結合XCR1，引起對結合人類XCL1的立體阻礙，並且導致人類XCR1與人類XCL1之間的結合的抑制。 (2)本發明的抗體結合人類XCR1，引起人類XCR1的三維結構方面的變化，這因此引起人類XCL1將要結合的人類XCR1的結構方面的變化，由此導致人類XCR1與人類XCL1之間的結合的抑制。 (3)本發明的抗體結合XCR1，引起該受體的內化，導致人類XCR1與人類XCL1之間的結合的抑制。 基於IC50或IC90值評定本發明的抗體針對人類XCR1與人類XCL1之間的結合的抑制活性。可以例如藉由在本發明的抗體存在下使用那些表達人類XCR1蛋白的細胞來進行人類XCL1對人類XCR1的結合的競爭抑制實驗等等獲得該等值。可以採用一已知方法作為這樣的競爭抑制實驗的具體方法。 本發明的抗體包括具有抑制細胞遷移的作用的抗體。術語「細胞遷移」係指其中作為給予該等細胞的外部刺激和細胞內信號轉導機制的刺激誘導啟動的結果的細胞主動遷移的現象。藉由主動細胞遷移產生的作用取決於該等細胞的功能而變化。例如，在樹突細胞的細胞遷移的情況下，這樣的細胞遷移係作為免疫系統中的機制之一的現象。在本發明中，針對細胞遷移的抑制活性有時被稱為「中和活性」。 如上所述，因為本發明的抗體適當地抑制樹突細胞(特別是BDCA3+樹突細胞)中的人類XCR1與人類XCL1之間的結合，該等抗體特別佳的是抑制樹突細胞(特別是BDCA3+樹突細胞)的遷移。 人類XCR1係一種七次跨膜的G蛋白偶聯受體。當人類XCL1結合人類XCR1時，人類XCR1的三維結構發生改變；並且作為結果，偶聯到人類XCR1的胞內域的G蛋白被釋放，並且信號被轉導進入該等細胞。 藉由抑制根據上述形式(1)、(2)等的人類XCR1與XCL1之間的結合，本發明的該等抗體阻止了G蛋白釋放。作為結果，沒有信號被轉導，從而抑制了細胞遷移的現象。 可替代地，作為一機制的結果，細胞遷移的現象可以被抑制，在該機制中本發明的抗體與人類XCR1的結合加強了人類XCR1與偶聯到人類XCR1的胞內域的G蛋白之間的結合，因此沒有發生G蛋白的釋放，從而抑制了細胞內信號轉導。 基於IC50或IC90值評定了本發明的抗體針對人類細胞的細胞遷移的抑制活性。具體的值不受特別限制。例如，IC50值通常為約0.36 nM或更小，較佳是約0.27 nM或更小，並且更佳是約0.16 nM或更小。例如，IC90值通常為約2.38 nM或更小，較佳的是約1.52 nM或更小，並且更佳的是約0.86 nM或更小。 作為一實施方式，本發明的抗體包括具有降低細胞毒性T淋巴細胞(CTL)活性的作用的抗體。降低CTL活性的機制係，例如本發明的抗體抑制了樹突細胞中的人類XCR1與人類XCL1之間的相互作用。在樹突細胞中，上述BDCA3+樹突細胞係較佳的。 製備本發明的抗體的方法 可以藉由包括以下三個步驟的方法來製備本發明的抗體，雖然它並不局限於此。 (i)步驟1：將一載體引入宿主來轉化宿主，該載體包括一核酸，該核酸包括編碼本發明的抗體的核苷酸序列；(ii)步驟2：培養在步驟1中獲得的轉化的宿主，並且收集含結合人類XCR1的抗體的部分；並且(iii)步驟3：分離或純化來自步驟2中獲得的部分的以上抗體。 步驟1 在步驟1中使用的核酸係編碼本發明的抗體的核酸。可以使用基於本發明的抗體的胺基酸序列資訊的電腦(in silico)技術來確定以上核酸的核苷酸序列。此時，較佳的是參考在步驟2中採用的宿主中的密碼子頻率來確定核苷酸序列。核苷酸序列的具體實例包括具有以下SEQ ID NO的核苷酸序列：3、4、7、8、11、12、15、16、61、62、65、66、69、70、73、或74；或其變體。 較佳的是藉由將突變(缺失、置換、插入等等)引入該等抗體的FR或恒定區來產生以上變體。 引入到變體中的突變的具體數目不受特別限制。通常引入突變以獲得與突變前的胺基酸序列相比具有85%或更高一致性、較佳的是90%或更高一致性、更佳的是95%或更高一致性、並且最佳的是99%或更高一致性的變體。 此外，以上核酸可以包括在5'端編碼分泌信號肽的核苷酸序列。編碼分泌信號肽的具體核苷酸序列較佳的是在步驟2中採用的宿主細胞中作為分泌信號肽有效起作用的核苷酸序列。術語「分泌信號肽」係指包括充當用於引入蛋白質的識別序列的胺基酸序列的一種肽，或者是指進入到用於蛋白質或肽分泌到宿主外的通路中的在宿主中產生的肽。 編碼分泌信號肽的核苷酸序列的實例包括：ATGGGATTCAGCAGGATCTTTCTCTTCCTCCTGTCAGTAACTACAGGTGTCCACTCC(SEQ ID NO：75)，ATGAAGTTGCCTGTTAGGCTGTTGGTGCTGCTGTTCTGGTTTCCTGCTTCCAACACT(SEQ ID NO：76)，ATGGAATGGTCATGGGTCTTTCTGTTCTTTCTGAGTGTCACAACCGGGGTGCATAGC(SEQ ID NO：77)，ATGGAATGGTCTTGGGTCTTTCTGTTCTTTCTGTCCGTCACTACCGGGGTCCACTCT(SEQ ID NO：78)，ATGTCCGTGCCTACTCAGGTGCTGGGGCTGCTGCTGCTGTGGCTGACCGATGCTCGTTGC(SEQ ID NO：79)，以及ATGTCCGTGCCTACTCAGGTGCTGGGGCTGCTGCTGCTGTGGCTGACCGATGCTCGTTGT(SEQ ID NO：80)。 在步驟1中使用的載體包括以上核酸中的至少之一。 這樣一載體可以是以下載體之一：(I)一包含核酸的載體，該核酸包含編碼選自下組的至少一個成員的核苷酸序列，該組由以下各項組成：本發明的抗體的重鏈、重鏈可變區、和重鏈CDR 1至3；(II)一包含核酸的載體，該核酸包括編碼選自下組的至少一個成員的核苷酸序列，該組由以下各項組成：本發明的抗體的輕鏈、輕鏈可變區、和輕鏈CDR 1至3；或(III)一包含第一核酸和第二核酸的載體，該第一核酸包括編碼選自下組的至少一個成員的核苷酸序列，該組由以下各項組成：本發明的抗體的重鏈、重鏈可變區、和重鏈CDR 1至3，該第二核酸包括編碼選自下組的至少一個成員的核苷酸序列，該組由以下各項組成：本發明的抗體的輕鏈、輕鏈可變區、和輕鏈CDR 1至3。 以上載體可以是一基因表達載體。「基因表達載體」係具有引起以上核酸的核苷酸序列的表達的功能的載體。基因表達載體可以含有控制核苷酸序列的表達的啟動子序列、增強子序列、阻抑序列、絕緣子序列等等。該等序列不受特別限制，只要它們在上述宿主中起作用即可。 在步驟1中使用的宿主不受特別限制，只要表達以上基因即可。其實例包括昆蟲細胞、真核細胞、和哺乳動物細胞。在該等細胞中，在更有效地表達編碼抗體的核苷酸序列方面，哺乳動物細胞中的HEK細胞、CHO細胞、NS0細胞或SP2/O細胞係特別佳的。 用於將以上載體導入步驟1中的宿主的技術不受特別限制。可以使用一種已知技術。可以單個地或以兩個或更多個的組合將以上(I)至(III)中示出的載體引入宿主。 可以藉由這樣的一技術產生具有以上載體的宿主。該載體可以照原樣或以在載體中包括編碼抗體的核苷酸序列的核酸結合到宿主的基因組中的這樣一方式而被保持在宿主中。可以使用一已知技術保持所製備的宿主，並且如果必要，可以長期儲存。 步驟2 步驟2係這樣一步驟：培養在步驟1中獲得的上述宿主，並且收集含有結合人類XCR1的本發明的抗體的部分。培養保持上述載體的宿主允許宿主基於載體中的核酸表達編碼本發明的抗體的核苷酸序列，導致本發明的抗體的產生。產生的抗體儲存在宿主中或在用於培養宿主的培養基中。 在步驟2中，可以採用已知方法作為用於收集含有本發明的抗體的部分的一技術。例如，為了收集來自宿主的含有本發明的抗體的部分，可以藉由物理或化學手段破壞宿主，並且使經過破壞而獲得的溶液經受固液分離處理，從而獲得液體部分。獲得的液體部分可以被用作含有本發明的抗體的部分。 另一方面，為了從用於培養宿主的培養基中收集含有本發明的抗體的部分，使培養基(即在步驟1中獲得的宿主的培養液)經受固液分離處理，從而獲得液體部分。獲得的液體部分可以被用作含有本發明的抗體的部分。 考慮到在隨後的步驟3中的分離或純化步驟的簡化，較佳的是從宿主的培養液中收集含有本發明的抗體的部分。 用於步驟2中的培養的培養基不受特別限制，只要該培養基允許宿主表達編碼本發明的抗體的核苷酸序列即可，從而產生本發明的抗體。然而，當從如上所述的宿主的培養液中收集含有本發明的抗體的部分時，考慮到在隨後的步驟3中盡可能簡化分離或純化步驟，較佳的是採用無血清培養基。 關於在培養宿主期間採用的不同條件，例如容器、溫度、時間、培養基中的宿主濃度、和培養條件，可以採用在產生抗體的已知方法中使用的條件。 步驟3 步驟3係這樣一步驟：從步驟2中獲得的部分中，分離或純化結合人類XCR1的本發明的抗體。用於分離或純化本發明的抗體的方法不受特別限制。通常使用的用於分離或純化蛋白質的方法係可廣泛應用的。 本發明的抗體的醫學用途 (1)用作免疫疾病的治療劑 如上所述，本發明的抗體具有抑制與免疫系統有關的樹突細胞的細胞遷移現象的作用。基於該作用，本發明的抗體，特別是人源化抗體，具有作為臨床上可應用於人類的藥用組合物的活性成分的潛力。 以下將解釋對其可應用本發明的抗體的疾病。 可應用的疾病(免疫疾病) 在人類的情況下，XCR1在CD141+樹突細胞中高表達，而在小鼠的情況下是在CD8α+樹突細胞中高表達。使用被稱為交叉呈遞的上述抗原呈遞方法，該等樹突細胞啟動T細胞(Bachem(巴赫姆)A、Güttler(居特勒)S、Hartung(哈通)E、Ebstein(埃布斯坦)F、Schaefer(含費爾)M、Tannert(坦納特)A、Salama(薩拉馬)A、Movassaghi(莫瓦薩吉)K、Opitz(奧皮茨)C、Mages(馬格斯)HW、Henn(亨恩)V、Kloetzel(克勒策爾)PM、Gurka(古爾卡)S、Kroczek(克羅切克)RA，「Superior antigen cross-presentation and XCR1 expression define human CD11c+CD141+ cells as homologues of mouse CD8+ dendritic cells(超抗原交叉呈遞和XCR1將人類CD11c+CD141+細胞定義為小鼠CD8+樹突細胞的同系物)」，J Exp Med(實驗醫學雜誌)，207：1273-1281(2010))。 此外，因為產生XCL1(它係對於人類XCR1的配位基)的來源包括T細胞，特別是CD8+T細胞，其中涉及XCL1-XCR1的趨化因子系統控制了樹突細胞誘導的CD8+T細胞的啟動(Crozat(克羅紮)K、Guiton(吉頓)R、Contreras(孔特雷拉斯)V、Feuillet(富耶)V、Dutertre(迪泰特)CA、Ventre(文特雷)E、Vu Manh(烏曼)TP、Baranek(巴拉內克)T、Storset(斯托賽特)AK、Marvel(馬維爾)J、Boudinot(布迪諾特)P、Hosmalin(奧斯馬蘭)A、Schwartz(施瓦茲)-Cornil(科爾尼)I、Dalod(戴洛德)M，「The XC chemokine receptor 1 is a conserved selective marker of mammalian cells homologous to mouse CD8α+ dendritic cells(XC趨化因子受體1係與小鼠CD8α+樹突細胞同源的哺乳動物細胞的保守的選擇性標記)」，J Exp Med(實驗醫學雜誌)，207：1283-1292(2010)；以及Dorner(多爾納)BG、Dorner(多爾納)MB、Zhou(周)X、Opitz(奧皮茨)C、Mora(莫拉)A、Güttler(居特勒)S、Hutloff(哈特洛夫)A、Mages(馬格斯)HW、Ranke(蘭克)K、Schaefer(舍費爾)M,Jack(傑克)RS、Henn(亨恩)V、Kroczek(克羅切克)RA，「Selective expression of the chemokine receptor XCR1 on cross-presenting dendritic cells determines cooperation with CD8+ T-cells(在交叉呈遞的樹突細胞上的趨化因子受體XCR1的選擇性表達決定了與CD8+ T細胞的合作)，」Immunity(免疫)，31：823-833(2009))。 如上所述，作為一實施方式，本發明的抗體包括表現出抑制樹突細胞(特別是BDCA3+樹突細胞)中的人類XCL1與人類XCR1之間的結合的作用的抗體。因此，本發明的抗體具有作為用於治療其中涉及藉由樹突細胞遷移而啟動T細胞的免疫疾病的治療劑的潛力。特別是，該等抗體具有作為用於治療與控制CD8+ T細胞的啟動有關的疾病的治療劑的潛力。 如上所述，作為一實施方式，本發明的抗體包括表現出降低CTL活性的作用的抗體。CTL具有藉由攻擊細胞或組織而啟動免疫系統的機制。已知不同的免疫性疾病具有加速的CTL活性；因此，本發明的抗體具有作為用於藉由降低CTL活性而治療免疫性疾病的治療劑的潛力。 這樣的疾病的非限制性實例包括1型糖尿病、牛皮癬、腎小球腎炎、自身免疫性肝炎、多發性硬化、強直性脊柱炎、甲狀腺炎、移植排斥、遲髮型超敏反應、克羅恩病、皮肌炎、多發性肌炎、包涵體肌炎、類風濕性關節炎、炎症性腸病、前葡萄膜炎、韋格納肉芽腫病、移植物抗宿主病、和白塞病(Kurts(庫爾茨)C、Robinson(魯賓遜)BW、Knolle(克諾勒)PA，「Cross-priming in health and disease(在健康和疾病中的交叉啟動)」，Nat Rev Immunol(自然評論：免疫學)，10：403-414(2010)；Kehren(科恩)J、Desvignes(德維涅)C、Krasteva(克拉絲蒂娃)M、Ducluzeau(都加索)MT、Assossou(阿索索)O、Horand(霍蘭德)F、Hahne(哈內)M、Kägi(卡吉)D、Kaiserlian(凱瑟裡安)D、Nicolas(尼古拉斯)JF，「Cytotoxicity is mandatory for CD8(+)T cell-mediated contact hypersensitivity(細胞毒性對CD8(+)T細胞介導的接觸性超敏反應係強制性的)」，J Exp.Med.(實驗醫學雜誌)189：779-786(1999)；Middel(米德爾)P、Thelen(西倫)P、Blaschke(布拉什克)S、Polzien(波岑)F、Reich(賴希)K、Blaschke(布拉什克)V、Wrede(威列得)A、Hummel(胡梅爾)KM、Gunawan(古納萬)B、Radzun(列德尊)HJ，「Expression of the T-cell chemoattractant chemokine lymphotactin in Crohn's disease(克羅恩病中T細胞化學引誘物趨化因子淋巴細胞趨化因子的表達)」，Am J Pathol(美國病理學雜誌)，159：1751-1761(2001)；Sugihara(杉原)T、Sekine(關根)C、Nakae(中江)T、Kohyama(香山)K、Harigai(針貝)M、Iwakura(岩倉)Y、Matsumoto(松本)Y、Miyasaka(宮阪繪)N、Kohsaka(香阪)H，「A new murine model to define the critical pathologic and therapeutic mediators of polymyositis(用於定義多發性肌炎的關鍵病理性和治療性介質的一新鼠類模型)」，Arthritis Rheum(關節炎和風濕病)，56：1304-1314(2007)；Wang(王)CR、Liu(劉)MF、Huang(黃)YH、Chen(陳)HC，「Up-regulation of XCR1 expression in rheumatoid joints(在風濕症關節中XCR1表達的上調」，Rheumatology(風濕病學)(牛津)43：569-573(2004)；Muroi(室井)E、Ogawa(小川)F、Shimizu(清水)K、Komura(高村)K、Hasegawa(長穀川)M、Fujimoto(藤本)M、Sato(佐藤)S，「Elevation of serum lymphotactin levels in patients with systemic sclerosis(患有系統性硬化症的患者中的血清淋巴細胞趨化因子水平的升高)」，J Rheumatol(風濕病學雜誌)，35：834-838(2008)；Torrence(托倫斯)AE、Brabb(布拉布)T、Viney(維尼)JL、Bielefeldt(貝裡特斯)-Ohmann(奧曼)H、Treuting(特雷汀)P、Seamons(西蒙斯)A、Drivdahl(德夫達爾)R、Zeng(曾)W、Maggio(馬喬)-Price(普萊斯)L、「Serum biomarkers in a mouse model of bacterial-induced inflammatory bowel disease(細菌誘導的炎症性腸病的小鼠模型中的血清生物標記)」，Inflamm Bowel Dis(炎症性腸病)，14：480-490(2008)；Yeh(葉)PT、Lin(林)FA、Lin(林)CP、Yang(楊)CM、Chen(陳)MS、Yang(楊)CH，「Expressions of lymphotactin and its receptor,XCR,in Lewis rats with experimental autoimmune anterior uveitis(淋巴細胞趨化因子及其受體XCR在患有實驗性自身免疫性前葡萄膜炎的Lewis(路易士)大鼠中的表達，Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol(格拉芙臨床與實驗眼科學文獻)，248：1737-1747(2010)；Blaschke(布拉什克)S、Brandt(勃蘭特)P、Wessels(維塞爾斯)JT、Müller(穆勒)GA，「Expression and function of the C-class chemokine lymphotactin(XCL1)in Wegener's granulomatosis(C類趨化因子淋巴細胞趨化因子(XCL1)在韋格納肉芽腫病中的表達和功能)」，J Rheumatol(風濕病學雜誌)，36：2491-2500(2009)；Asuoka(明日香)H、Okazaki(岡崎)Y、Kawakami(川上)Y、Hirakata(枚方)M、Inoko(豬子)H、Ikeda(池田)Y、Kuwana(桑名)M、「Autoreactive CD8+ cytotoxic T lymphocytes to major histocompatibility complex class I chain-related gene A in patients with Behçet's disease(針對在患有白塞病的患者中主要組織相容性複合物I類鏈相關基因A的自體反應性CD8+細胞毒性T淋巴細胞)」，Arthritis Rheum(關節炎和風濕病)，50：3658-3662(2004)；Serody(塞洛迪)JS、Burkett(伯克特)SE、Panoskaltsis(帕諾斯卡特西斯)-Mortari(莫塔里)A、Ng(恩)-Cashin(卡欣)J、McMahon(麥克馬洪)E、Matsushima(松島)GK、Lira(里拉)SA、Cook(庫克)DN、Blazar(布拉紮)BR，「T-lymphocyte production of macrophage inflammatory protein-lalpha is critical to the recruitment of CD8(+)T cells to the liver,lung,and spleen during graft-versus-host disease(在移植物抗宿主病期間T淋巴細胞產生巨噬細胞炎症蛋白1α對於CD8(+)T細胞募集到肝、肺、和脾是關鍵的)」，Blood(血液)，96：2973-2980(2000)；Sugihara(杉原)T、Sekine(關根)C、Nakae(中江)T、Kohyama(香山)K、Harigai(針貝)M、Iwakura(岩倉)Y、Matsumoto(松本)Y、Miyasaka(宮阪繪)N、Kohsaka(香阪)H，「A new murine model to define the critical pathologic and therapeutic mediators of polymyositis(用於定義多發性肌炎的關鍵病理性和治療性介質的一新鼠類模型)」，Arthritis & Rheumatism(關節炎和風濕病)，56：1304-1314(2007))；以及Dalakas(達拉卡斯)MC，「Review：An update on inflammatory and autoimmune myopathies(綜述：關於炎性和自身免疫性肌病的更新)」，Neuropathol Appl Neurobiol(神經病理學與應用神經生物學)，37：226-242(2011)。 還揭示的是，本發明的抗體(抗人類XCR1小鼠單克隆抗體(5G7))顯著地抑制了使用遲髮型超敏反應(下文有時稱為「DTH」)的小鼠模型的稍後說明的實驗中的DTH反應。如上所述，遲髮型超敏反應係一種已知為免疫疾病之一的疾病，其中涉及藉由樹突細胞的遷移啟動的CD8+ T細胞。本發明的抗體在治療遲髮型超敏反應中有效的事實為本發明的抗體具有抑制細胞遷移特別是樹突細胞的遷移的活性提供了證據，因為本發明的抗體影響CD8+ T細胞。 此外，除了遲髮型超敏反應之外，特應性皮炎和接觸性皮炎也已知為皮膚免疫疾病，其中涉及DTH反應(Fabrizi(法布裡齊)G、Romano(羅馬諾)A、Vultaggio(武爾塔焦)P、Bellegrandi(貝萊格蘭迪)S、Paganelli(帕加內利)R、Venuti(韋努蒂)A，「Heterogeneity of atopic dermatitis defined by the immune response to inhalant and food allergy(藉由對吸入物和食物過敏的免疫反應而定義的特應性皮炎的異質性)」，Eur J Dermatol(歐洲皮膚病學雜誌)，9：380-384(1999)；以及Fonacier(佛那茨爾)LS、Dreskin(德雷斯金)SC、Leung(萊翁)DYM，「Allergic skin diseases(過敏性皮膚病)」，J Allergy Clin Immunol(過敏症與臨床免疫學雜誌)，125：S138-149(2010))。 基於以上內容，本發明的抗體具有作為用於治療皮膚免疫疾病(例如特應性皮炎或接觸性皮炎)的治療劑的潛力。 已經指出，在DTH反應中還可以涉及CD8+ T細胞的啟動(Mody(莫迪)CH、Pain(佩恩)III R、Jackson(傑克遜)C、Chen(陳)G-H、Toews(塗維斯)GB，「CD8 Cells play a critical role in delayed-type hypersensitivity to intact Cryptococcus neoformans(CD8細胞在對完整的新型隱球菌的遲髮型超敏反應中起關鍵作用」，J Immunol(免疫學雜誌)，152：3970-3979(1994)，等。 在牛皮癬(這係一種影響大量患者的自身免疫性皮膚病)中觀察到CD8+ T細胞侵入表皮，特別是在牛皮癬皮損中。該等細胞被認為是引起牛皮癬皮損的主要效應細胞(Gudjonsson(古迪約森)JE、Johnston(約翰斯頓)A、Sigmundsdottir(西格門德斯杜蒂爾)H、Valdimarsson(瓦爾迪馬森)H、「Immunopathogenic mechanisms in psoriasis(牛皮癬中的免疫原性機制)」，Clin Exp Immunol(臨床和實驗免疫學)，135：1-8(2004))。 基於以上內容，本發明的抗體具有作為用於治療其中涉及CD8+ T細胞的啟動的皮膚免疫疾病的治療劑的潛力。 除了遲髮型超敏反應、特應性皮炎、和接觸性皮炎之外，其中涉及CD8+ T細胞的皮膚免疫疾病的非限制性實例還包括皮肌炎、多發性肌炎，包涵體肌炎、牛皮癬、類牛皮癬、自身免疫性水皰性疾病(例如天皰瘡、類天皰瘡、和後天性大皰性表皮鬆解症)、膿皰病、妊娠皰疹、線狀IgA大皰皮病、斑禿、白癜風、與膠原病有關的皮膚病(例如系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合症、和混合性結締組織病)、與阿狄森病有關的皮膚病、與移植物抗宿主病(GVHD)有關的皮膚病、濕疹、以及蕁麻疹。 以下將說明在本發明的抗體與不同的免疫性疾病(多發性硬化、人類1型糖尿病、腎小球腎炎、自身免疫性肝炎、甲狀腺炎、移植物抗宿主病、皮肌炎、多發性肌炎、和包涵體肌炎)之間的關係。本發明的抗體對其有效的疾病並不局限於以下具體的疾病。 多發性硬化 最近已經報導，除了CD4+ T細胞之外，CD8+ T細胞侵入人體中多發性硬化中的中樞性損害。此外，已經報導的是，在使用小鼠的實驗中，由衍生自中樞神經中的髓鞘的抗原啟動的CD8+ T細胞的植入誘導了實驗性自身免疫性腦腦膜炎，這係一種人類多發性硬化的模型。與常規模型相比，上述模型更接近地類比了人類多發性硬化的病理學(反復惡化和緩解、顯著的脫髓鞘、在脫髓鞘損害中許多CD8+ T細胞和巨噬細胞/小膠質細胞的侵入)。如上所述，已經表明CD8+ T細胞在人類多發性硬化及其小鼠模型中起重要作用(Friese(佛瑞瑟)MA、Fugger(富格爾)L，「Autoreactive CD8+cells in multiple sclerosis：a new target for therapy(多發性硬化中的自體反應性CD8+細胞：一新的用於治療的靶標」Brain(腦)，128：1747-1763(2005))。 因此，控制CD8+ T細胞的啟動的本發明的抗體具有作為用於治療多發性硬化的治療劑的潛力。 人類1型糖尿病 代表人類1型糖尿病模型的非肥胖型糖尿病小鼠已經顯示，CD8+ T細胞的耗竭導致糖尿病發作的抑制(Wang(王)B、Gonzales(岡薩雷斯)A、Benoist(貝努瓦)C、Mathis(馬西斯)D，「The role CD8+ T-cells in the initiation of insulin-dependent diabetes mellitus(CD8+ T細胞在胰島素依賴型糖尿病的發病中的作用)」，Eur J Immunol(歐洲免疫學雜誌)，26：1762-1769(1996))。這提示CD8+ T細胞也涉及1型糖尿病的病理學發展。 因此，控制CD8+ T細胞的啟動的本發明的抗體具有作為用於治療人類1型糖尿病的治療劑的潛力。 腎小球腎炎 在一腎小球腎炎的小鼠模型中，已經顯示，CD8+ T細胞涉及腎臟病變的形成過程(Heymann(黑曼)F、Meyer(邁耶)-Schwesinger(史威辛格)C、Hamilton(哈密頓)-Williams(威廉姆斯)EE、Hammerich(哈默里克)L、Panzer(潘策爾)W、Kaden(卡登)S、Quaggin(奎金)SE、Floege(芙洛格)J、Gröne(戈隆)H-J、Kurts(庫爾特)C，「Kidney dendritic cell activation is required for progression of renal disease on a mouse model of glomerular injury(腎臟樹突細胞啟動對於腎小球損傷的小鼠模型上的腎臟疾病的進展是需要的)」，J Clin Invest(臨床研究期刊)，119：1286-1297(2009))。在患有嚴重的自身免疫性狼瘡腎炎的患者中觀察到許多CD8+ T細胞侵入腎臟。已經報導了表明腎臟功能的惡化的該等CD8+ T細胞的數目以及腎臟活性分數和血清肌酸酐水平的增加之間的關聯(Couzi(丘茨)L、Merville(默維爾)P、Deminière(德敏涅拉)C、Moreau(莫洛)J-F、Combe(庫姆)C、Pellegrin(佩里金)J-L、Viallard(維爾拉德)J-F、Blanco(布蘭科)P、「Predominance of CD8+ T lymphocytes among periglomerular infiltrating cells and link to the prognosis of class III and class IV lupus nephritis(CD8+ T淋巴細胞在球旁浸潤細胞中的優勢以及與III型和IV型狼瘡腎炎的預後的聯繫)」，Arthritis Rheum(關節炎和風濕病)，56：2362-2370(2007))。如上所述，在人類和小鼠模型中，CD8+ T細胞被認為涉及自身免疫性腎小球腎炎的發作及其病理學進展。 因此，控制CD8+ T細胞的啟動的本發明的抗體具有作為用於治療腎小球腎炎的治療劑的潛力。 自身免疫性肝炎 已經表明，在自身免疫性肝炎的發展過程中涉及丙型肝炎病毒(HCV)的感染。還已經表明，藉由消除HCV並且破壞感染的肝細胞，針對HCV誘導的多種CD8+ CTL涉及自身免疫性肝炎的發展(Kammer(卡梅)AR、van der Burg(范德伯格)SH、Grabscheid(格拉斯西德)B、Hunziker(亨澤爾)IP、Kwappenberg(瓦潘伯格)KMC、Reichen(雷辰)J、Melief(梅裡夫)CJM、Cerny(切尼)A，「Molecular mimicity of human cytochrome P450 by hepatitis C virus at the level of cytotoxic T cell recognition(在細胞毒性T細胞識別水平藉由丙型肝炎病毒的人類細胞色素P450的分子模擬)」，J Exp Med(實驗醫學雜誌)，190：169-175(1999))。 因此，控制CD8+ T細胞的啟動的本發明的抗體具有作為用於治療自身免疫性肝炎的治療劑的潛力。 甲狀腺炎 已知CD8+ CTL涉及實驗性自身免疫性甲狀腺炎(EAT)的發展，這係一種人類甲狀腺炎(例如橋本氏病)的小鼠模型。已經報導，該模型中的小鼠顯示出類似於人類甲狀腺炎的損傷(在外周血中發現了抗甲狀腺球蛋白抗體，並且觀察到CD8+ T細胞和CD4+T細胞侵入甲狀腺)。如上所述，已經表明，CD8+ T細胞涉及人類和小鼠模型中的甲狀腺炎的發展(Brazillet(布拉切特)M-P、Batteux(巴托)F、Abehsira(阿貝謝拉)-Amar(艾瑪爾)O、Nicoletti(尼科萊蒂)F、Charreire(查爾雷拉)J，「Induction of experimental autoimmune thyroiditis by heat-denatured porcine thyroglobulin：a Tc1-mediated disease(藉由熱變性的豬甲狀腺球蛋白誘導實驗性自身免疫性甲狀腺炎：一Tc1介導的疾病)」，Eur J Immunol(歐洲免疫學雜誌)，29：1342-1352(1999))。 因此，控制CD8+ T細胞的啟動的本發明的抗體具有作為用於治療人類甲狀腺炎的治療劑的潛力。 類風濕性關節炎 如在以下實例中所述，5G7，這係一本發明的抗體，在治療由乳酪分支桿菌誘導的DTH的實驗中的類風濕性關節炎中表現出顯著效果。因此，本發明的抗體具有作為用於治療類風濕性關節炎的治療劑的潛力。 移植排斥 CD8+ T細胞在人類器官移植後的移植排斥中起重要作用。藉由宿主中的CD8+ T細胞(識別在移植物中的細胞中表達的I類MHC)而排斥移植物。此外，已經報導在經歷排斥的腎臟移植患者中許多CD8+ T細胞侵入腎臟。如上所述，已經表明，CD8+ T細胞在人類器官移植後的移植排斥中也起著核心作用(Bueno(布埃諾)V、Pestana(潘斯塔納)JOM,「The role of CD8+ T-cells during allograft rejection(CD8+ T細胞在同種異體移植排斥過程中的作用」，Braz J Med Biol Res(巴西醫學與生物研究雜誌)，35：1247-1258(2002))。 因此，控制CD8+ T細胞的啟動的本發明的抗體具有作為用於治療移植物抗宿主病的治療劑的潛力。 皮肌炎、多發性肌炎、和包涵體肌炎 當侵入患有皮肌炎和多發性肌炎的患者的病變部位的淋巴細胞被建立為細胞系時，CD8+ T細胞系顯示出針對它們自身的培養肌細胞的細胞毒性。這表明在患有上述肌炎的患者中的肌細胞損傷係由具有抗原特異性細胞毒性的CD8+ T細胞引起的((Hohlfeld(霍菲爾德)R、Engel(恩格爾)AG，「Coculture with autologous myotubes of cytotoxic T cells isolated from muscle in inflammatory myopathies(與從炎性肌病中的肌肉分離的細胞毒性T細胞的自體肌管共培養」，Ann Neurol(神經病學年鑒)，29：498-507(1991))。此外，在患有包涵體肌炎的患者中已經觀察到CD8+ T細胞侵入病變部位(Dalakas(達拉卡斯)MC，「Review：An update on inflammatory and autoimmune myopathies(綜述：關於炎性和自身免疫性肌病的更新)」，Neuropathol Appl Neurobiol(神經病理學與應用神經生物學)，37：226-242(2011)。因此，控制CD8+ T細胞的啟動的本發明的抗體具有作為用於治療皮肌炎、多發性肌炎、或包涵體肌炎的治療劑的潛力。 如上所述，因為本發明的抗體具有作為用於治療免疫疾病，特別是皮膚免疫疾病的治療劑的潛力，本發明提供了包括本發明的抗體的藥用組合物。 這樣一藥用組合物具有作為用於治療免疫疾病的治療劑的潛力，目的係治療免疫疾病，特別是皮膚免疫疾病。 在此使用的術語「治療」表示達到所希望的藥理和/或生理作用。該等作用包括部分或完全治癒疾病和/或由疾病引起的不良反應(病變和症狀)的作用。以上作用還包括抑制或延遲疾病的進展和/或由疾病引起的不良反應(病變和症狀)的作用；減輕病變和症狀(即改善疾病或症狀，或引起症狀進展的逆轉)的作用；以及預防疾病復發的作用。以上作用還包括部分或完全預防個體中疾病的發作和/或由疾病引起的不良反應(病變和症狀)，該等個體可以具有感染疾病和/或由疾病引起的不良反應(病變和症狀)的傾向，但是還未被診斷為具有該傾向。因此，術語「治療」還表示「減輕」、「預防復發」、以及「預防疾病」。 在本發明中，一包括本發明的抗體的藥用組合物可以被適當地用於治療人類免疫疾病，特別是皮膚免疫疾病。應當理解的是，以上藥用組合物能夠提供例如部分或完全治癒免疫疾病的不同症狀的作用；部分或完全抑制免疫疾病的不同症狀(即抑制或延遲進展)的作用；減輕免疫疾病的不同症狀(即改善疾病或症狀，或引起症狀進展的逆轉)的作用；或預防免疫疾病的不同症狀復發的作用。 目標疾病的具體實例如上所述，其中皮膚免疫疾病係較佳的。 在以上藥用組合物中本發明的抗體的含量不受特別限制，只要該藥用組合物包括有效量的本發明的抗體即可。例如可以按這樣一方式適當地確定該含量，其中藉由考慮目標免疫疾病的類型、劑型、給藥方法等等，相對於100 wt%的該組合物，包含在該藥用組合物中的本發明的抗體的量為0.001 wt%至99.99 wt%。 在此使用的術語「有效量」係指允許本發明的抗體證明抑制樹突細胞的細胞遷移的作用的量，或允許該等抗體證明上述所希望的藥理和/或生理作用(對免疫疾病的治療作用)的量。 可以結合本發明的抗體，將藥學上可接受的載體或添加劑添加到該藥用組合物。在此使用的術語「藥學上可接受的載體或添加劑」係指任選的載體、稀釋劑、賦形劑、助懸劑、潤滑劑、佐劑、媒介物、遞送系統、乳化劑、崩解劑、吸收劑、防腐劑、表面活性劑、著色劑、香料、或增甜劑。可以使用已知載體或添加劑。 該藥用組合物的劑型的非限制性實例包括片劑、糖漿、搽劑、注射劑、和輸注劑(infusion)，其中注射劑或輸注劑係較佳的。這樣的注射劑和輸注劑也可以是水性的、非水性的、或懸浮液的形式。另外地，該藥用組合物可以具有剛好在給藥前製備的劑型。 本發明的藥用組合物(具體地，一用於免疫疾病的治療劑)在治療免疫疾病的方法中具有潛力，該方法包括向患有免疫疾病特別是皮膚免疫疾病的人類受試者施用該組合物的步驟。如上所述，該藥用組合物還在預防免疫疾病的方法中具有潛力，該方法包括向尚未發生免疫疾病特別是皮膚免疫疾病的病變或症狀，但是可能具有免疫疾病的傾向的人類受試者施用該組合物。 根據免疫疾病的類型、人類受試者的性別、種族、年齡、和一般情況、疾病嚴重性等等，可以將該藥用組合物(用於免疫疾病的治療劑)的劑量和給藥方法適當地確定在0.001至100 mg/kg/天的範圍內。 可以按上述劑量每天一次，或以分開的劑量每天若干次，給予本發明的抗體。此外，在該等抗體對上述疾病具有治療作用的範圍內，給藥間隔可以是每天、每隔一天、每週、每隔一周、每2至3周、每月、或每2至3個月。給藥方法的非限制性實例包括口服、肌內、靜脈內、動脈內、鞘內、真皮內、腹膜內、鼻內、肺內、眼內、陰道內、宮頸內、直腸內、以及皮下給藥。 (2)作為免疫毒素的應用 已經可以將本發明的抗體結合到細胞毒性分子上。因為該等抗體結合以顯著的量表達在與免疫系統有關的樹突細胞中的人類XCR1蛋白，該等抗體可以被用作靶向樹突細胞的免疫毒素。 在此使用的術語「細胞毒性分子」係指證明了例如引起細胞死亡的凋亡和/或壞死等作用的分子。 這樣的分子的實例包括皂草素、蓖麻毒素、假單胞菌外毒素、白喉毒素、和化療劑。可以藉由用於製備常規免疫毒素的方法來進行抗體與毒性物質之間的結合。 (3)本發明的抗體的其他應用 作為一實施方式，因為本發明的抗體還包括結合以顯著量表達在樹突細胞中的XCR1的抗體，本發明的抗體在用於檢測樹突細胞的方法中具有潛力。在這種情況下，較佳的是標記本發明的抗體用於該用途。在此使用的術語「標記」係指使該等抗體結合到標記分子，例如螢光分子、發光分子、顯色分子和放射性同位素分子。 結合模式不受限制，只要該結合在檢測步驟中並不被解離即可。可以採用已知方法作為具體的檢測方法。例如，可以採用流式細胞儀技術。 此外，本發明的抗體還可以適當地應用於在檢測樹突細胞之後的分離和/或去除樹突細胞的方法中。還可以採用已知方法用於該等方法。例如，可以結合流式細胞儀技術，適當地使用已知細胞分選裝置。 本發明涉及以上解釋的抗體，並且廣泛包含以下說明的本發明的實施方式。項目1 一種結合人類XCR1的抗體，其中該抗體結合包括選自下組的至少三個胺基酸的線性表位或非連續表位，該組由以下各項組成：SEQ ID NO：91的胺基酸序列中的第8、第11、第12、第13、第14、第16、第17、第22、第23、第176、和第177個胺基酸。項目2 根據以上專案1所述的抗體，其中該抗體係：包括包含在以下(g)至(i)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(j)至(l)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體；包括包含在以下(m)至(o)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(p)至(r)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體；或包括包含在以下(a)至(c)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(d)至(f)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體：(a)一由SEQ ID NO：41的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(b)一由SEQ ID NO：42的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(c)一由SEQ ID NO：43的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(d)一由SEQ ID NO：44的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(e)一由SEQ ID NO：45的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(f)一由SEQ ID NO：46的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3；(g)一由SEQ ID NO：17的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(h)一由SEQ ID NO：18的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(i)一由SEQ ID NO：19的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3，(j)一由SEQ ID NO：20的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(k)一由SEQ ID NO：21的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，(l)一由SEQ ID NO：22的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3；(m)一由SEQ ID NO：29的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(n)一由SEQ ID NO：30的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(o)一由SEQ ID NO：31的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(p)一由SEQ ID NO：32的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(q)一由SEQ ID NO：33的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(r)一由SEQ ID NO：34的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3。項目3 根據以上專案1或2所述的抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO：60或64的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：68或72的胺基酸序列的一輕鏈可變區。項目4 根據以上專案1至3的任一項所述的抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列的一輕鏈可變區。項目5 根據以上專案1至3的任一項所述的抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列的一輕鏈可變區。項目6 根據以上專案1至5的任一項所述的抗體，其中該抗體包括一人類恒定區。項目7 根據以上專案1至6的任一項所述的抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的一重鏈和包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列的一輕鏈。項目8 根據以上專案1至6的任一項所述的抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列的一重鏈和包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列的一輕鏈。項目9 根據以上專案1至8的任一項所述的抗體，包括一Fc區，其中該Fc區被突變以誘導在ADCC活性方面的變化。項目10 根據以上專案9所述的抗體，其中該Fc區被突變以降低ADCC活性。項目11 根據以上專案1至10的任一項所述的抗體，其中該抗體被結合到細胞毒性分子上。項目12 根據以上專案1至11的任一項所述的抗體，其中該抗體抑制人類XCR1與人類XCL1之間的相互作用。項目13 根據以上專案1至12的任一項所述的抗體，其中該抗體抑制樹突細胞的細胞遷移。項目14 根據以上專案1至13的任一項所述的抗體，其中該抗體抑制細胞毒性T淋巴細胞的活性。項目15 一種藥用組合物，包括根據以上專案1至14的任一項所述的抗體和一藥學上可接受的載體或添加劑。項目16 根據以上專案15所述的藥用組合物，其中該藥用組合物係一用於免疫疾病的治療劑。項目17 根據以上專案16所述的藥用組合物，其中該免疫疾病係一皮膚免疫疾病。項目18 根據以上專案17所述的藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、類牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性水皰性疾病(例如天皰瘡、類天皰瘡、或後天性大皰性表皮鬆解症)、膿皰病、妊娠皰疹、線狀IgA大皰皮病、斑禿、白癜風、與膠原病有關的皮膚病(系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合症、或混合性結締組織病)、與阿狄森病有關的皮膚病、與移植物抗宿主病(GVHD)有關的皮膚病、濕疹、或蕁麻疹。項目19 根據以上專案17所述的藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、或包涵體肌炎。項目20 根據以上專案17所述的藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係特應性皮炎或接觸性皮炎。項目21 根據以上專案16所述的藥用組合物，其中該免疫疾病係甲狀腺炎、類風濕性關節炎、1型糖尿病、或多發性硬化。項目22 一種核酸，包括編碼根據以上專案1至14的任一項所述的抗體的核苷酸序列。項目23 一種治療免疫疾病的方法，包括向受累於免疫疾病的人類施用有效量的根據以上專案1至14的任一項所述的抗體或根據以上專案15所述的藥用組合物。項目24 根據以上專案23所述的方法，其中該免疫疾病係一皮膚免疫疾病。項目25 根據以上專案24所述的方法，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、類牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性水皰性疾病(例如天皰瘡、類天皰瘡、或後天性大皰性表皮鬆解症)、膿皰病、妊娠皰疹、線狀IgA大皰皮病、斑禿、白癜風、與膠原病有關的皮膚病(系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合症、或混合性結締組織病)、與阿狄森病有關的皮膚病、與移植物抗宿主病(GVHD)有關的皮膚病、濕疹、或蕁麻疹。項目26 根據以上專案24所述的方法，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、或包涵體肌炎。項目27 根據以上專案23所述的方法，其中該免疫疾病係甲狀腺炎、類風濕性關節炎、1型糖尿病、或多發性硬化。 本發明還包含以下說明的實施方式：項目1-A 一種包括包含在以下(g)至(i)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(j)至(l)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體；一種包括包含在以下(m)至(o)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(p)至(r)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體；或一種包括包含在以下(a)至(c)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(d)至(f)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體：(a)一由SEQ ID NO：41的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(b)一由SEQ ID NO：42的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(c)一由SEQ ID NO：43的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(d)一由SEQ ID NO：44的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(e)一由SEQ ID NO：45的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(f)一由SEQ ID NO：46的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3；(g)一由SEQ ID NO：17的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(h)一由SEQ ID NO：18的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(i)一由SEQ ID NO：19的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(j)一由SEQ ID NO：20的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(k)一由SEQ ID NO：21的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，(l)一由SEQ ID NO：22的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3；(m)一由SEQ ID NO：29的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(n)一由SEQ ID NO：30的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(o)一由SEQ ID NO：31的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(p)一由SEQ ID NO：32的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(q)一由SEQ ID NO：33的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(r)一由SEQ ID NO：34的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3。項目2-A 根據以上專案1-A所述的抗體，包括包含SEQ ID NO：60或64的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：68或72的胺基酸序列的一輕鏈可變區。項目3-A 根據以上專案1-A或2-A所述的抗體，包括包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列的一輕鏈可變區。項目4-A 根據以上專案1-A或2-A所述的抗體，包括包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列的一輕鏈可變區。項目5-A 根據以上專案1-A至4-A的任一項所述的抗體，包括一人類恒定區。項目6-A 根據以上專案1-A至5-A的任一項所述的抗體，包括包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的一重鏈和包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列的一輕鏈。項目7-A 根據以上專案1-A至5-A的任一項所述的抗體，包括包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列的一重鏈和包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列的一輕鏈。項目8-A 根據以上專案1-A至7-A的任一項所述的抗體，包括一Fc區，其中該Fc區被突變以在誘導ADCC活性方面的變化。項目9-A 根據以上專案8-A所述的抗體，其中該Fc區被突變以降低ADCC活性。項目10-A 根據以上專案1-A至9-A的任一項所述的抗體，其中該抗體抑制人類XCR1與人類XCL1之間的相互作用。項目11-A 根據以上專案1-A至10-A的任一項所述的抗體，其中該抗體抑制樹突細胞的細胞遷移。項目12-A 一種藥用組合物，包括根據以上專案1-A至11-A的任一項所述的抗體和一藥學上可接受的載體或添加劑。項目13-A 一種根據以上專案12-A所述的藥用組合物，其中該藥用組合物係一用於免疫疾病的治療劑。項目14-A 根據以上專案13-A所述的藥用組合物，其中該免疫疾病係一皮膚免疫疾病。項目15-A 根據以上專案14-A所述的藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、類牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性水皰性疾病(例如天皰瘡、類天皰瘡、或後天性大皰性表皮鬆解症)、膿皰病、妊娠皰疹、線狀IgA大皰皮病、斑禿、白癜風、與膠原病有關的皮膚病(系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合症、或混合性結締組織病)、與阿狄森病有關的皮膚、與移植物抗宿主病(GVHD)有關的皮膚病、濕疹、或蕁麻疹。項目16-A 根據以上專案14-A所述的藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、或包涵體肌炎。項目17-A 根據以上專案14-A所述的藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係特應性皮炎或接觸性皮炎。項目18-A 一種核酸，包括編碼根據以上專案1-A至11-A的任一項所述的抗體的核苷酸序列。項目19-A 一種免疫疾病治療方法，包括向受累於免疫疾病的人類施用有效量的根據以上專案1-A至11-A的任一項所述的抗體的一步驟。 本發明進一步包含以下說明的實施方式。項目1-B 一種包括包含在以下(g)至(i)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(j)至(l)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體；一種包括包含在以下(m)至(o)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(p)至(r)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體；或一種包括包含在以下(a)至(c)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(d)至(f)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體：(a)一由SEQ ID NO：41的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(b)一由SEQ ID NO：42的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(c)一由SEQ ID NO：43的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(d)一由SEQ ID NO：44的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(e)一由SEQ ID NO：45的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(f)一由SEQ ID NO：46的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3；(g)一由SEQ ID NO：17的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(h)一由SEQ ID NO：18的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(i)一由SEQ ID NO：19的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(j)一由SEQ ID NO：20的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(k)一由SEQ ID NO：21的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，(l)一由SEQ ID NO：22的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3；(m)一由SEQ ID NO：29的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(n)一由SEQ ID NO：30的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(o)一由SEQ ID NO：31的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(p)一由SEQ ID NO：32的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(q)一由SEQ ID NO：33的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(r)一由SEQ ID NO：34的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3。項目2-B 根據以上專案1-B所述的抗體，包括包含SEQ ID NO：60或64的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：68或72的胺基酸序列的一輕鏈可變區。項目3-B 根據以上專案1-B或2-B所述的抗體，包括包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列的一輕鏈可變區。項目4-B 根據以上專案1-B或2-B所述的抗體，包括包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列的一輕鏈可變區。項目5-B 根據以上專案1-B至4-B的任一項所述的抗體，包括一人類恒定區。項目6-B 根據以上專案1-B至5-B的任一項所述的抗體，包括包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的一重鏈和包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列的一輕鏈。項目7-B 根據以上專案1-B至5-B的任一項所述的抗體，包括包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列的一重鏈和包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列的一輕鏈。項目8-B 根據以上專案1-B至7-B的任一項所述的抗體，包括一Fc區，其中該Fc區被突變以誘導在ADCC活性方面的變化。項目9-B 根據以上專案8-B所述的抗體，其中該Fc區被突變以降低ADCC活性。項目10-B 根據以上專案1-B至9-B的任一項所述的抗體，其中該抗體被結合到細胞毒性分子上。項目11-B 根據以上專案1-B至10-B的任一項所述的抗體，其中該抗體抑制人類XCR1與人類XCL1之間的相互作用。項目12-B 根據以上專案1-B至11-B的任一項所述的抗體，其中該抗體抑制樹突細胞的細胞遷移。項目13-B 一種藥用組合物，包括根據以上專案1-B至12-B的任一項所述的抗體和一藥學上可接受的載體或添加劑。項目14-B 一種根據以上專案13-B所述的藥用組合物，其中該藥用組合物係一用於免疫疾病的治療劑。項目15-B 根據以上專案14-B所述的藥用組合物，其中該免疫疾病係一皮膚免疫疾病。項目16-B 根據以上專案15-B所述的藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、類牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性水皰性疾病(例如天皰瘡、類天皰瘡、或後天性大皰性表皮鬆解)症、膿皰病、妊娠皰疹、線狀IgA大皰皮病、斑禿、白癜風、與膠原病有關的皮膚病(系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合症、或混合性結締組織病)、與阿狄森病有關的皮膚病、與移植物抗宿主病(GVHD)有關的皮膚病、濕疹、或蕁麻疹。項目17-B 根據以上專案15-B所述的藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、或包涵體肌炎。項目18-B 根據以上專案15-B所述的藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係特應性皮炎或接觸性皮炎。項目19-B 一種核酸，包括編碼根據以上專案1-B至12-B的任一項所述的抗體的核苷酸序列。項目20-B 一種治療免疫疾病的方法，包括向受累於免疫疾病的人類施用有效量的根據以上專案1-B至12-B的任一項所述的抗體或根據以上專案13-B所述的藥用組合物。項目21-B 根據以上專案20-B所述的方法，其中該免疫疾病係皮膚免疫疾病。項目22-B 根據以上專案21-B所述的方法，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、類牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌、包涵體肌炎、自身免疫性水皰性疾病(例如天皰瘡、類天皰瘡、或後天性大皰性表皮鬆解症)、膿皰病、妊娠皰疹、線狀IgA大皰皮病、斑禿、白癜風、與膠原病有關的皮膚病(系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合症、或混合性結締組織病)、與阿狄森病有關的皮膚病、與移植物抗宿主病(GVHD)有關的皮膚病、濕疹、或蕁麻疹。項目23-B 根據以上專案21-B所述的方法，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、或包涵體肌炎。項目24-B 根據以上專案21-B所述的方法，其中該皮膚免疫疾病係特應性皮炎或接觸性皮炎。實例 在下文將基於實例更詳細地說明本發明。不必說，本發明並不侷限於該等實例。 實例1(1)小鼠抗人類XCR1單克隆抗體的製備 為了獲得針對人類XCR1的單克隆抗體，用表達人類XCR1的B300.19細胞的膜部分免疫XCR1敲除小鼠。如以下步驟製備膜部分：首先，將表達人類XCR1的B300.19細胞懸浮在Ho緩衝液(0.25 M蔗糖、10 mM Hepes(pH 7.4)、1 mM EGTA、0.5 mM MgCl2、1x Complete mini EDTA-free(羅氏應用科學))中，用氮氣細胞破碎儀(帕爾儀器公司)進行破碎(800 psi、冰上30分鐘)，並且然後離心(2,000 g、10分鐘)。收集上清液並且重新離心(100,000 g、30分鐘)。將片狀沉澱物懸浮在50 mM Hepes(pH 7.4)緩衝液中，並且指定為膜部分。 將160 μg或260 μg的該膜部分與等體積的GERBU佐劑(GERBU Biotechnik GmbH)混合，並且然後皮下注射到XCR1敲除小鼠(Deltagen)的足墊中。然後給予五或六次另外的注射，每隔一週一次。在最後免疫三或四天以後，處死小鼠，並且在GenomeONE-CF(石原產業株式會社)存在下，以2：1或5：1比率使外周淋巴結細胞與P3U1骨髓瘤細胞融合。然後在96孔塑膠板中培養該等融合細胞。 進行FACS分析用於初步篩選。按1：1比率混合親本CHO細胞和表達人類XCR1-EGFP的CHO細胞，並且懸浮在FACS緩衝液(1 mM EDTA、含1% FBS的PBS-(Sigma))中。將細胞與來自每一雜交瘤的培養上清液在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後與PE標記的抗小鼠IgG多克隆抗體(Jackson，#715-116-151，在FACS緩衝液中按1：100稀釋)在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。使用一台FACSCanto II細胞分析儀(BD Bioscience)測量螢光強度。作為結果，從對表達人類XCR1-EGFP的CHO細胞的顯示出高反應性的三個孔收集上清液。 使用標準有限稀釋法獲得來自這三個陽性孔(2H6、5G7、和11H2)的克隆。藉由上述FACS分析證實每一克隆的反應性。 隨後進行體外趨化性實驗來評定這三個克隆對表達人類XCR1的BaF3細胞或B300.19細胞的人類淋巴細胞趨化因子誘導的遷移的中和活性。在24孔嵌套培養架(transwell culture support)(孔3 μm，Costar，#3399)或96孔嵌套培養板(transwell culture plate)(多層篩，孔5 μm，Millipore，#MAMIC 5S10)中進行該趨化性實驗。 在使用24孔嵌套培養架的情況下，將表達人類XCR1的BaF3細胞(1×106個細胞)懸浮在50 μL的趨化性緩衝液(含0.5% BSA、0.5% FBS和20 mM HEPES(pH 7.4)的RPMI 1640培養基(Invitrogen))和50 μL的每一培養上清液的混合物中，並且室溫下孵育30分鐘。隨後將以1 μg/mL的濃度溶於趨化性緩衝液中的重組人類淋巴細胞趨化因子(Genzyme，#2695)按600 μL/孔添加至下部孔中，並且將孵育的細胞添加至上部孔中。在一個5% CO2培養箱中在37℃孵育4小時以後，以1,350 rpm離心該等嵌套培養支架5分鐘，並且將遷移的細胞被收集到下部孔中。用多聚甲醛(終濃度：1%)固定收集的細胞，並且將30 μL的每一樣品施用至FACSCanto II細胞分析儀對細胞進行計數。 在使用96孔嵌套培養板的情況下，將表達人類XCR1的B300.19細胞(2×105個細胞)懸浮在25 μL的趨化性緩衝液(含0.5% BSA、0.5% FBS、和20 mM HEPES(pH 7.4)、以及50 μM 2-巰基乙醇的RPMI 1640(Invitrogen))和50 μL的每一培養上清液的混合物中，並且室溫下孵育30分鐘。隨後將以1 μg/mL的濃度溶於趨化性緩衝液中的重組人類淋巴細胞趨化因子(Genzyme，#2695)以150 μL/孔添加至下部孔中，並且將孵育的細胞添加至上部孔中。在一個5% CO2培養箱中在37℃孵育4小時之後，以1,350 rpm離心該等嵌套培養板5分鐘，並且遷移的細胞被收集到下部孔中。將30 μL的每一樣品施用至FACSCanto II細胞分析儀對細胞進行計數。 由三個雜交瘤克隆(2H6、5G7、和11H2)產生的培養上清液證明了針對表達人類XCR1的BaF3細胞和B300.19細胞的人類淋巴細胞趨化因子誘導的遷移的中和活性。 (2)小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)對表達人類XCR1的細胞的反應性 為了評定來自這三個克隆的純化抗體的反應性與中和活性，用來自每一克隆的培養上清液的重組蛋白A(GE Healthcare，#17-5080-01)純化該等抗體。使用單克隆抗體分型試劑盒(Serotec，#MMT1)確定每一克隆的同型。2H6和5G7為IgG2b，κ和11H2為IgG2a、κ。 藉由FACS分析評定純化抗體對人類XCR1的反應性。以1：1比率混合親本B300.19細胞和表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞，並且懸浮在FACS緩衝液(含1% FBS的PBS-(Sigma))中。用含100 μg/mL的人類免疫球蛋白的FACS緩衝液在冰上封閉細胞10分鐘。然後將細胞與從0至10 μg/mL不同濃度的純化抗體(2H6、5G7、和11H2)，或與10 μg/mL濃度的小鼠同型對照抗體IgG2a(eBioscience，#14-4724-82)或IgG2b(eBioscience，#14-4732-82)在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後與PE標記的抗小鼠IgG多克隆抗體(Jackson，#715-116-151、以1：50稀釋在FACS緩衝液中)在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。用一台FACSCanto II細胞分析儀測量螢光強度。 這三種純化抗體(2H6、5G7、和11H2)顯示出對表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞，而不是對親本B300.19細胞的反應性(圖1)。相反，小鼠同型對照抗體不與表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞或與親本細胞反應(數據未顯示)。 (3)小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)針對表達人類XCR1的細胞的人類淋巴細胞趨化因子誘導的遷移的中和活性 藉由體外趨化性實驗評定來自這三個克隆的純化抗體的中和活性。使用96孔嵌套培養板(多層篩，孔5 μm，Millipore，#MAMIC 5S10)進行該趨化性實驗。將表達人類XCR1的B300.19細胞(2×105個細胞)懸浮在含有從0至10 μg/mL的不同濃度的每一純化抗體(2H6、5G7、和11H2)的75 μL趨化性緩衝液(含0.5% BSA、0.5% FBS、20 mM HEPES(pH 7.4)、以及50 μM 2-巰基乙醇的RPMI 1640培養基(Invitrogen))中；並且室溫下孵育30分鐘。此外，以1 μg/mL的終濃度將重組人類淋巴細胞趨化因子(R&D，#695-LT/CF)溶解在趨化性緩衝液中，其中溶解了從0至10 μg/mL的不同濃度的純化抗體。將淋巴細胞趨化因子和純化抗體的混合物以150 μL/孔添加至下部孔，並且室溫下孵育30分鐘。30分鐘後，將孵育的細胞添加至上部孔，並且在5% CO2培養箱中在37℃孵育4小時。隨後將30 μL的每一樣品施用至FACSCanto II細胞分析儀對細胞進行計數。2H6、5G7、和11H2 mAb在大約3 μg/mL的濃度完全抑制了細胞遷移。圖2顯示了濃度依賴性抑制的典型模式。根據三次獨立實驗計算IC50和IC90值。表1顯示了該等值為平均值±標準誤差。 (4)小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)的序列分析 用5'-RACE(cDNA末端的5'快速擴增)方法擴增包括編碼該等克隆(2H6、5G7、和11H2)的重鏈和輕鏈的基因序列的一個多核苷酸。使用TRIZOL(Invitrogen)，從這三個克隆的雜交瘤製備總RNA，並且用DNA酶(QIAGEN，RNase free DNase set)處理。使用cDNA合成試劑盒(TAKARA)，從總RNA製備雙鏈cDNA。將藉由退火ad29S ACATCACTCCGT(SEQ ID NO：81)和as29AS ACGGAGTGATGTCCGTCGACGTATCTCTGCGTTGATACTTCAGCGTAGCT(SEQ ID NO：82)而獲得的5'適配子添加至該cDNA。使用以下項將獲得的cDNA擴增：5'正向引物(5'-PCR4引物，AGCTACGCTGAAGTATCAACGCAGAG：SEQ ID NO：83)以及3'反向引物(AGGACAGGGGTTGATTGTTGA：SEQ ID NO：84，或CTCAAGTTTTTTGTCCACCGTGGTGC：SEQ ID NO：85被用來擴增IgG2b重鏈；CTCAATTTTCTTGTCCACCTTGGTGC：SEQ ID NO：86，或GCCAGTGGATAGACTGATG：SEQ ID NO：87被用來擴增IgG2a重鏈；以及CTCATTCCTGTTGAAGCTCTTGACAAT：SEQ ID NO：88，GATGGATACAGTTGGTGCAGC：SEQ ID NO：89，或CAGATCCTCAGCCTCCACTCTGCT：SEQ ID NO：90被用來擴增Igκ輕鏈)。將擴增的cDNA插入pCR2.1載體(Invitrogen)。使用ABI3130XL分析該等基因序列。表2-1至4-2顯示了由藉由該分析而鑒定的基因序列編碼的胺基酸序列。 實例2(1)嵌合抗人類XCR1抗體和人類化抗人類XCR1抗體的製備 證明了在2H6、5G7、和11H2中的最高和中和活性的5G7被用來生產嵌合抗體和人源化抗體。 藉由用重疊延伸PCR，藉由結合5G7重鏈可變區的基因序列與其中針對重鏈插入V234A/G237A突變的人類IgG2恒定區的基因序列、以及5G7輕鏈可變區的序列以及人類Igκ恒定區的基因序列，並且藉由將生成的序列插入表達載體(pEE6.4或pEE12.4)而製備嵌合抗體。表5和6分別顯示了具體的嵌合抗體的胺基酸序列和核苷酸序列。 藉由將小鼠抗體5G7的互補決定區移植到人類抗體可變區中來人源化該抗體。根據Kabat(卡巴特)編號系統和用於鑒定互補決定區的方法確定互補決定區(例如Kabat(卡巴特)等人，(1991)，Sequences of Proteins of Immunological Interest(免疫學感興趣的蛋白質序列)：US Department of Health and Human Services(美國衛生和公眾服務部)，NIH(美國國立衛生研究院)，美國)。此外，還以類似方式確定了2H6和11H2的互補決定區。表7-1至9-2顯示了這三個克隆的互補決定區的胺基酸序列和核苷酸序列。 如從表7-1和8-1中清晰可見，5G7和2H6之間的CDR的胺基酸序列的一致性係高的；特別是，重鏈CDR 3胺基酸序列完全一致。因此，關於5G7和2H6，胺基酸序列可以概括為如下表10中所示。另外，圖7顯示了這三個克隆的CDR 1至3的胺基酸序列的比較。 表中的「X」可以是以下項中的任一個：丙胺酸(Ala：A)、精胺酸(Arg：R)、天冬醯胺(Asn：N)、門冬胺酸(Asp：D)、半胱胺酸(Cys：C)、穀胺醯胺(Gln：Q)、穀胺酸(Glu：E)、甘胺酸(Gly：G)、組胺酸(His：H)、異亮胺酸(Ile：I)、亮胺酸(Leu：L)、賴胺酸(Lys：K)、蛋胺酸(Met：M)、苯丙胺酸(Phe：F)、脯胺酸(Pro：P)、絲胺酸(Ser：S)、蘇胺酸(Thr：T)、色胺酸(Trp：W)、酪胺酸(Tyr：Y)、和纈胺酸(Val：V)。 選擇具有與5G7的FR的高度一致性的人類抗體的FR作為人源化抗體的FR。隨後，使用生成的抗體的3D模型預測與5G7的CDR相互作用的FR中的胺基酸，並且將其與CDR移植。其中插入V234A/G237A突變的人類IgG2恒定區被用作恒定區。HK1和HK5被設計為人源化抗體重鏈，並且L2和L5被設計為人源化抗體輕鏈。表11-1至14-2顯示了具體的人源化抗體的胺基酸序列和核苷酸序列。 表11-1人源化抗人類XCR1抗體重鏈(HK1)的胺基酸序列 由GenScript USA公司完整地合成該等人源化抗體的基因序列，並且將其插入表達載體(從Lonza購買的pEE6.4或pEE12.4)。為了生產抗體，根據對Lipofectamine 2000(Invitrogen)的技術說明書，使用Lipofectamine 2000將該等表達載體轉染到HEK293E細胞(Invitrogen)中。收集上清液並使用蛋白A(GE Healthcare)純化。使用該等純化的人源化抗體評定中和活性。 藉由使用表達人類XCR1的B300.19細胞進行體外趨化性實驗鑒定具有針對表達人類XCR1的細胞的人類淋巴細胞趨化因子誘導的遷移的中和活性的人源化抗體。如以上所述，使用96孔嵌套培養板(多層篩、孔5 μm，Millipore，#MAMIC 5S10或Corning #3387或#3388)進行該趨化性實驗。然而在使用Corning嵌套培養板的情況下，要添加到下部孔中的重組人類淋巴細胞趨化因子和純化抗體的量為235 μL每孔。 在具有中和活性的人源化抗體中，將進一步詳細評定兩種類型的以下抗體，HK1L2和HK5L5。 (2)人源化抗人類XCR1抗體(HK1L2和HK5L5)對表達人類XCR1的細胞的反應性 使用這兩種人源化抗體(HK1L2和HK5L5)、母源抗體5G7、和嵌合抗體進行FACS分析。以1：1比率混合親本B300.19細胞和表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞，並且懸浮在FACS緩衝液(含1% FBS的PBS-(Sigma))中。將細胞與從0至10 μg/mL不同濃度的純化抗體在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後與PE標記的抗小鼠IgG多克隆抗體(Jackson，#715-116-151：用於已經用母源抗體5G7染色的細胞、以1：100稀釋在FACS緩衝液中)或與PE標記的抗人類IgG多克隆抗體(Jackson，#709-116-149：用於已經用嵌合抗體或人源化抗體(HK1L2和HK5L5)染色的細胞、以1：100稀釋在FACS緩衝液中)在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。使用一台FACSCanto II細胞分析儀(BD Bioscience)測量螢光強度。 人源化抗體(HK1L2和HK5L5)顯示出對表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞的濃度依賴性反應性。母源抗體5G7和嵌合抗體顯示了基本相同的反應性(圖3)。 使用人類外周血單核細胞，藉由FACS分析進一步檢驗人源化抗體(HK1L2和HK5L5)對人類XCR1的反應性。因為已知人類XCR1基因表達於BDCA3+樹突細胞(這係人類外周血單核細胞中的一小群體)中，首先濃縮來自人類外周血單核細胞的樹突細胞並且用於FACS分析。使用Ficoll-Paque(GE Healthcare，#17-1440-02)，從健康人類類受試者的血液中分離人類外周血單核細胞。用CD3、CD14、CD 19、CD56抗體微珠(Miltenyi，#130-050-101、#130-050-201、#130-050-301、#130-050-401)標記來自人類外周血單核細胞的CD3、CD14、CD19、和CD56陽性細胞，並且使用全自動磁性細胞分選儀(auto-MACS)(Miltenyi)將其耗盡。從而濃縮了人類樹突細胞。用含1%大鼠血清、1%小鼠血清、100 μg/mL人類免疫球蛋白的FACS緩衝液(含1% FBS的PBS-(Sigma))將濃縮樹突細胞在冰上封閉10分鐘。然後，分開地使用PE標記的5G7、HK1L2、HK5L5，以及同型對照抗體小鼠IgG2b、κ(eBioscience，#14-4732-82)或人類IgG2、κ(Sigma，#I5404)，與FITC標記的抗BDCA3抗體(Miltenyi，#130-090-513)、APC標記的抗CD123抗體(Miltenyi，#130-090-901)、APC-Cy7標記的抗HLA-DR抗體(BioLegend，#307617)、以及Alexa700標記的抗CD3、CD14、CD19、CD56抗體(BioLegend，#300324、#301822、#302225、以及#318316)在冰上將細胞染色30分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。使用一台FACSCanto II細胞分析儀測量螢光強度。 如在使用母源抗體5G7的情況下，人源化抗體(HK1L2和HK5L5)選擇性地與表達人類XCR1的BDCA3+樹突細胞反應(圖4)。 (3)人源化抗人類XCR1抗體(HK1L2和HK5L5)對表達人類XCR1的細胞的人類淋巴細胞趨化因子誘導的遷移的中和活性 如上所述，藉由體外趨化性實驗，與母源抗體5G7和一嵌合抗體同時評定該等人源化抗體的中和活性。 與母源抗體5G7相比，這兩種人源化抗體都保持了中和活性。圖5顯示了濃度依賴性抑制的典型模式。根據三次獨立實驗計算IC50和IC90值。表16顯示該等值為平均值±標準誤差。 接下來，藉由使用人類樹突細胞代替表達XCR1的B300.19細胞的跨內皮遷移實驗進一步檢驗人源化抗體(HK1L2和HK5L5)的中和活性。使用24孔嵌套培養架(孔5 μm、Costar，#3421)進行該跨內皮遷移實驗。首先，將ECV304細胞懸浮在含10% FBS培養基199厄爾培養基(Earle's medium)(Invitrogen)中，並且以2×105個細胞每孔接種到嵌套培養架的上部室，隨後在5% CO2培養箱中在37℃孵育3天。在實驗那天，用實驗緩衝液(培養基199厄爾培養基(Earle's medium)和RPMI 1640培養基以1：1比率的混合物，向其中添加了0.5% BSA和20 mM HEPES(pH 7.4))洗滌ECV304細胞。將以1 μg/mL的濃度溶於實驗緩衝液(以10 μg/mL的濃度向其中添加了嵌合抗體、HK1L2、HK5L5、或同型對照抗體人類IgG2、κ(Sigma))中的重組人類淋巴細胞趨化因子以600 μL/孔添加至下部孔。如上所述濃縮人類樹突細胞，將其懸浮在實驗緩衝液(以10 μg/mL的濃度向其中添加了人源化抗體(HK1L2和HK5L5)和同型對照抗體人類IgG2、κ(Sigma))中，並且添加至含ECV304細胞的下部孔。在一個5% CO2培養箱中在37℃孵育4小時之後，在1,350 rpm將嵌套培養架中的細胞離心5分鐘，並且收集遷移的細胞。使用細胞譜系標記：FITC標記的抗BDCA3抗體(Miltenyi，#130-090-513)、PE標記的抗BDCA1抗體(BioLegend，#331517)、APC標記的抗CD123抗體(Miltenyi，#130-090-901)、和APC標記的抗HLA-DR抗體(BioLegend，#307617)在冰上將收集的細胞染色。然後將170 μL的每一樣品施用至FACSCanto II細胞分析儀(BD Bioscience)對細胞進行計數。 正如在使用嵌合抗體的情況下那樣，兩種人源化抗體都抑制了BDCA3+樹突細胞的遷移(圖6)。 實例3小鼠抗人類XCR1抗體的藥理作用 使用遲髮型接觸性皮炎(DTH)的小鼠模型證實了在以上實例2中製備的抗人類XCR1小鼠單克隆抗體(5G7)的藥理作用。 (1)小鼠抗人類XCR1抗體對DNFB(二硝基氟苯)致敏小鼠的耳腫脹的作用實驗方法1.樣品小鼠 年齡在7周與12周之間的在C57BL/6背景上的人類XCR1敲入小鼠(XCR1基因已經被人類XCR1基因取代的小鼠)被用於該實驗。 2.製備用於致敏的DNFB和用於誘導的DNFB的方法 藉由混合DNFB至丙酮和橄欖油的4：1混合物以獲得0.5%的濃度而製備用於致敏和誘導的DNFB。此外，丙酮和橄欖油的4：1混合物被用作用於誘導的對照液。 3.給予DNFB的方法 剃除小鼠的腹毛以暴露皮膚，於其上施用50 μL的0.5% DNFB用於致敏。在第二天，再次施用50 μL的0.5% DNFB至同一部位。施用4天之後，將用於誘導的25 μL的0.5% DNFB施用至小鼠右耳前側。同時作為對照，將25 μL的藉由按4：1比率混合丙酮和橄欖油而獲得的對照液施用至小鼠左耳前側。 4.給予抗體的方法 製備在PBS中的抗人類XCR1小鼠單克隆抗體(5G7)及其對照抗體(即小鼠IgG(Jackson Laboratory))至2 mg/mL的終濃度。將進行第一次致敏的那天定義為第0天。在第-1天、第1天、和第4天，將每一種以上抗體以250 μL/小鼠(500 μg/小鼠)的量腹膜內施用至小鼠。 5.測量DNFB致敏小鼠模型的耳腫脹的方法 在第一天和第二天，藉由施用50 μL的0.5% DNFB至暴露的腹部皮膚而致敏小鼠。在致敏4天之後，使用卡尺測量耳的厚度。在測量之後，將25 μL的0.5% DNFB施用至小鼠右耳前側用於誘導。此外，作為對照，將25 μL的藉由按4：1比率混合丙酮和橄欖油而形成的對照液施用至小鼠左耳。在誘導24小時和48小時之後，測量耳的厚度。藉由以下公式轉換測量值來確定腫脹。 公式 用DNFB改變的耳厚度(腫脹：mm)=([A]-[B])-([C]-[D]) [A]：在誘導之後右耳的厚度(mm) [B]：在誘導之前右耳的厚度(mm) [C]：施用對照液之後左耳的厚度(mm) [D]：施用對照液之前左耳的厚度(mm) 實驗結果和分析 圖8清晰地顯示了相比於給予對照抗體的小鼠的在給予抗人類XCR1小鼠單克隆抗體(5G7)的小鼠中用DNFB誘導之後的耳腫脹的顯著抑制(圖8A)。在用DNFB誘導48小時之後，該作用還以類似發方式顯示出顯著抑制(圖8B)。 雖然該抗體係腹膜內全身給予的，但是在用DNFB誘導的耳中抑制了腫脹。因此，推測抗體從腹腔轉運到血液中，隨著血流到達炎症部位或淋巴結，在那裡抗體展示出抑制耳腫脹的作用。 這提示本發明的抗體以位點特異性的方式對炎症部位具有特定作用。 實例4小鼠抗人類XCR1單克隆抗體(5G7)對不同的人類趨化因子受體的反應性 藉由FACS分析評定了小鼠抗人類XCR1單克隆抗體(5G7)對不同的人類趨化因子受體的反應性。將親本B300.19細胞和表達人類趨化因子受體-EGFP的B300.19細胞(XCR1、CXCR1、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR11、或CX3CR1、以及)懸浮在FACS緩衝液(含1%胎牛血清的PBS-(Sigma))中。用封閉緩衝液(含100 μg/mL的人類免疫球蛋白的FACS緩衝液)在冰上將細胞封閉20分鐘。然後，用含有10 μg/mL濃度5G7或小鼠同型對照抗體IgG2b(eBioscience、#14-4732-82)的封閉緩衝液在冰上孵育細胞30分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後用PE標記的抗小鼠IgG多克隆抗體(Jackson，#715-116-151，以1：50稀釋在封閉緩衝液中)在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。使用一台FACSCanto II細胞分析儀測量螢光強度。 抗人類XCR1抗體5G7顯示出對表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞的高反應性。此外，抗人類XCR1抗體5G7對於表達人類CX3CR1-EGFP的B300.19細胞顯示出非常低的反應性，並且對於表達其他人類趨化因子受體-EGFP的細胞沒有反應性(圖9)。另一方面，小鼠同型對照抗體對於任何B300.19細胞未顯示出反應性。 實例5使用皂草素結合的Fab抗小鼠IgG二級抗體的抗人類XCR1抗體對表達人類XCR1的細胞的細胞毒性 為了證明抗人類XCR1抗體對表達XCR1的細胞的細胞毒活性，藉由使用皂草素結合的Fab抗小鼠IgG二級抗體來檢驗小鼠抗人類XCR1 mAb對其上外源性表達人類XCR1的細胞的細胞毒性。 將80 μL的含10%胎牛血清(Cell Culture Bioscience，#171012)、100 μg/ml的硫酸卡那黴素(Invitrogen，#15160-054)以及50 μM 2-巰基乙醇(2-ME，Invitrogen，#21985-023)的RPMI 1640(Invitrogen，#11875-093)中的2×103個細胞的B300.19親本細胞或表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞添加至96孔板的每一孔中。用含10%胎牛血清、100 μg/ml的硫酸卡那黴素和50 μM的2-ME的RPMI1640稀釋小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、或11H2)、小鼠同型對照抗體IgG2a，κ(eBioscience，#16-4724-85)或IgG2b，κ(eBioscience，#16-4732-85)，並且將10 μl的稀釋抗體以從0至0.17 μg/ml的不同濃度添加至細胞。然後在5% CO2培養箱中在37℃孵育細胞20分鐘。然後用含10%胎牛血清、100 μg/ml的硫酸卡那黴素和50 μM 2-ME的RPMI1640稀釋皂草素結合的Fab抗小鼠IgG(Advanced Targeting Systems，#IT-48)，並且將10 μl的稀釋的皂草素結合的Fab抗小鼠IgG以1 μg/ml的終濃度添加至每一孔中。然後在5% CO2培養箱中在37℃孵育細胞72小時。然後使用細胞計數試劑SF測量在每一孔中的細胞數(Nacalai tesque,07553-15或-44)將試劑添加至每一孔，並且將細胞在5% CO2培養箱中在37℃孵育2或3小時。然後用酶標儀(Arvo、PerkinElmer)測量OD450。 具有皂草素結合的二級抗體的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、以及11H2)顯示出對表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞的生長抑制(圖11)。藉由Graphpad Prism軟體計算2H6、5G7、和11H2的IC50值，分別為0.141 nM、0.017 nM、和0.155 nM。另一方面，具有皂草素結合的二級抗體的該等抗體未顯示出對親本B300.19細胞的細胞生長抑制。具有皂草素結合的二級抗體的對照抗體未抑制表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞也沒有抑制親本B300.19細胞的細胞生長(圖11)。該等發現表明，小鼠抗人類XCR1抗體，2H6、5G7、和11H2與皂草素結合的二級抗體一起內化，並且起到免疫毒素的作用。 實例6 5G7 Mab對細胞毒性T淋巴細胞體內實驗的作用 為了研究5G7 Mab對CTL功能的抑制活性，進行了CTL實驗。 在第0天，用CFA乳化的卵白蛋白(200 μg/頭)皮下免疫在其中表達人類XCR1而不是小鼠XCR1工程化的hXCR1敲入小鼠。在第-1天、第2天和第5天，以500 μg/頭的劑量腹膜內注射5G7 Mab或對照小鼠IgG((Jackson Laboratory)。六天後，將來自未經過試驗的C57BL/6小鼠的脾細胞與(或不與)10 μg/ml OVA257-264肽(SIINFEKL；MBL)在37℃孵育30分鐘。 分別用2.5和0.25 μM CFSE(Invitrogen Life Technologies)標記該等肽衝擊的靶和非靶細胞群，然後以1：1比率混合，並且靜脈內注射到免疫的小鼠中。 在注射CFSE標記的脾細胞一天之後，如下使用脾臟中的CFSE陽性群的比率來評定靶細胞殺傷活性。 用流式細胞術檢測免疫的小鼠中的脾臟中CFSE陽性細胞，並且如下用CFSE高細胞和CFSE低細胞的比率計算每一小鼠的CTL活性：CTL活性=(CFSE高的%/CFSE低的%)。 然後如下計算相對CTL活性：相對CTL活性=(每一免疫小鼠中的CTL活性)/(對照小鼠中的CTL活性)。 結果顯示，與用對照IgG處理的小鼠中的值相比，用5G7 Mab治療的小鼠中的相對CTL活性示出更低的相對CTL活性(圖12)。 數據表明，藉由用抗XCR1抗體治療抑制了體內CTL活性，並且提示用抗XCR1抗體治療對於免疫疾病(例如自身免疫性疾病中的移植排斥、GVHD和組織損傷)可能是有益的。 實例7小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)對表達嵌合的人類/小鼠XCR1的細胞的反應性 為了確定被小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)識別的人類XCR1表位，評定了該等抗體對表達嵌合的人類/小鼠XCR1細胞的反應性。 因為小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)與人類XCR1反應，而不與小鼠XCR1反應，所以製備了一組人類/小鼠XCR1嵌合受體。在該組中，人類XCR1的每一胞外域都被小鼠XCR1的同源區取代，並且反之亦然。使用重疊延伸聚合酶鏈式反應(PCR)方法構建了該組的表達載體。在TK-1細胞中表達每一嵌合受體-EGFP，並且藉由FACS分析確定mAb反應性。將親本TK-1細胞以及表達人類XCR1-EGFP-、小鼠XCR1-EGFP-、或嵌合的XCR1-EGFP-的TK-1細胞懸浮在FACS緩衝液(含1%胎牛血清的PBS-(Sigma))中。用含100 μg/mL的人類免疫球蛋白的FACS緩衝液將細胞在冰上封閉10分鐘。然後，與從0至10 μg/mL不同濃度的抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)、或10 μg/mL濃度的小鼠同型對照抗體IgG2a(eBioscience，#14-4724-82)或IgG2b(eBioscience，#14-4732-82)、或者無抗體的FACS緩衝液將細胞在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後與PE標記的抗小鼠IgG多克隆抗體(Jackson，#715-116-151，以1：50稀釋在FACS緩衝液中)或PE標記的抗人類XCR多克隆抗體(R&D，#FAB857P，以2：5稀釋在FACS緩衝液中、用於已經與無抗體的FACS緩衝液一起孵育的細胞)在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。用一台FACSCanto II細胞分析儀測量螢光強度。 小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)顯示出對表達人類XCR1-EGFP的TK-1細胞而不是對親本TK-1細胞或表達小鼠XCR1-EGFP的TK-1細胞的反應性(圖13；用四字母代碼指定的四個胞外域的起點(例如HHHH係野生型人類XCR1，Hmmm具有人類N端胞外域和小鼠第一、第二、和第三胞外環，等))。這三種抗體顯示出對於具有人類XCR1 N端的表達XCR1-EGFP的嵌合抗體的TK-1細胞的反應性。還在另一實驗中檢驗了對嵌合體受體mmHm的反應性，並且未觀察到反應性(數據未顯示)。 相反，小鼠同型對照抗體未顯示出對任何TK-1細胞的反應性(數據未顯示)。 實例8藉由肽ELISA在人類XCR1的胞外域上的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)結合位點的作圖 為了定義在人類XCR1上的抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)的接觸殘基，使用覆蓋人類XCR1的胞外域的系列12聚體肽(12-mer peptide)進行肽掃描分析。 由Sigma合成在N端具有生物素和間隔區GSGS的兩套肽。第一套的13個肽含有所有可能的來自人類XCR1 N端的12聚體，每一個偏移2個胺基酸。第二套的13個肽含有所有可能的來自人類XCR1胞外環的12聚體，每一個偏移3個胺基酸。最初在100%二甲亞碸中復原肽，並且隨後在30%二甲亞碸中稀釋，以給出50 μg/mL的終濃度用於直接ELISA。 用50 μL體積的、每孔50 μg/mL的肽包被鏈黴親和素包被的微量滴定板(Perkin Elmer)，並且在室溫孵育1小時。除去肽溶液，然後向每孔添加含4% Block-Ace的PBS-，並且在4℃孵育過夜。用ELISA洗滌緩衝液(在PBS-中的0.02%吐溫20)將每孔洗滌三次。以10 μg/mL的量向每孔添加抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、或11H2)，並且在室溫下孵育6小時。用ELISA洗滌緩衝液將每孔洗滌三次。向每孔添加以1：5,000稀釋在ELISA洗滌緩衝液中的辣根過氧物酶結合的驢抗小鼠IgG抗體(Jackson，#715-035-150)，並且在室溫下孵育1小時。將每孔用ELISA洗滌緩衝液洗滌三次。向每孔添加TMBZ(3,3',5,5'四甲基聯苯胺，Sigma)，並且在室溫下孵育。用2N H2SO4停止反應，並且用Arvo酶標儀(PerkinElmer)測量A450nm。 抗人類XCR1抗體2H6和5G7顯示出對含有7PESTTFFYYDLQ18(SEQ ID NO：96)的一肽的強結合，以及對11TFFYYDLQSQPC22(SEQ ID NO：110)的弱結合(圖14)。5G7還顯示出對含有19SQPCENQAWVFA30(SEQ ID NO：101)、172SSGCDYSELTWY183(SEQ ID NO：110)、和175CDYSELTWYLTS186(SEQ ID NO：111)的三個非連續肽的弱結合。另一方面，11H2顯示從對該等肽沒有反應性(數據未顯示)。 實例9藉由使用丙胺酸突變體在人類XCR1胞外域上的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)和人源化抗人類XCR1抗體(HK1L2和HK5L5)的結合殘基的作圖 為了確定被小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)和人源化抗人類XCR1抗體(HK1L2和HK5L5)識別的人類XCR1的關鍵殘基，進行了丙胺酸置換實驗。 製備一組人類XCR1的丙胺酸置換突變體。在該組中，人類XCR1胞外區的7PESTTFFYYDLQSQPCENQAWVFA30(SEQ ID NO：118)和175CDYSELTWYLTS186(SEQ ID NO：119)中的每一胺基酸都被丙胺酸取代。藉由使用定向誘變構建了丙胺酸置換突變體的表達載體。在B300.19細胞上表達每一突變體，並且藉由FACS分析來確定抗體反應性。以1：1比率混合親本B300.19細胞和表達人類XCR1-EGFP的或每一丙胺酸突變體人類XCR1-EGFP的B300.19細胞，並且懸浮在FACS緩衝液(含1%胎牛血清的PBS-(Sigma))中。用含10%大鼠血清的FACS緩衝液將細胞在冰上封閉10分鐘。然後將細胞與10 μg/mL的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)、人源化抗體(HK1L2或HK5L5)、小鼠同型對照抗體IgG2a(eBioscience，#14-4724-82)或IgG2b(eBioscience，#14-4732-82)、或人類同型對照抗體IgG2(Sigma，#I5404)在冰上孵育20分鐘；或與無抗體的FACS緩衝液孵育。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後與PE標記的抗小鼠IgG多克隆抗體(Jackson，#715-116-151，以1：50稀釋在FACS緩衝液中、用於已經與小鼠抗體孵育的細胞)、PE標記的抗人類IgG多克隆抗體(Jackson，#709-116-149，以1：50稀釋在FACS緩衝液中、用於已經與人源化抗體或人類對照IgG孵育的細胞)、或PE標記的抗人類XCR1多克隆抗體(R&D，#FAB857P、以2：5稀釋在FACS緩衝液中、用於已經與與無抗體的FACS緩衝液孵育的細胞)在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。使用一台FACSCanto II細胞分析儀(BD Bioscience)測量螢光強度。 用PE標記的抗人類XCR1多克隆抗體檢測每一丙胺酸突變體，除了C175A突變體之外(圖15)。如在圖15中所示，因為在該等突變體中，每一丙胺酸突變體在細胞表面上的表達量係變化的，藉由按照以下步驟計算的相對PE平均值(mAb/pAb)評定抗體對每一丙胺酸突變體的反應性。首先，藉由設置PE平均值(藉由使用每一抗體，染色表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞(野生型)而獲得)為1.0，計算每一抗體的相對PE平均值。然後藉由以下等式計算相對PE平均值(mAb/pAb)：小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、或11H2)或人源化抗體(HK1L2或HK5L5)的每一相對PE平均值除以PE-標記的抗人類XCR1多克隆抗體的相對PE平均值。結果顯示，2H6(圖16)、5G7(圖17)、HK1L2(圖19)、和HK5L5(圖20)顯示出對其中在N端或第2環的每一殘基被丙胺酸取代的許多丙胺酸突變體的較低反應性。特別是，觀察到對Y14A、D16A、和L17A的無反應性或弱反應性。另外地，在該等突變體中，對E8A、F13A、C22A、和Y177A的反應性也更低。總而言之，該等結果表明，2H6、5G7、HK1L2、和HK5L5識別人類XCR1胞外域上的E8、F13、Y14、D16、L17、C22和Y177。11H2(圖18)顯示出與除了F13A和D16A的其他mAb相似的反應性，表明11H2結合E8、Y14、L17、C22、和Y177。 實例10在識別相似表位的、用於結合表達人類XCR1的細胞的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)之間的競爭 為了確定識別相似表位的抗人類XCR1抗體是否對結合人類XCR1而彼此競爭，進行了競爭實驗。 按照以下步驟進行競爭實驗。以1：1比率混合親本B300.19細胞和表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞，並且懸浮在FACS緩衝液(含1%胎牛血清的PBS-(Sigma))中。用含10%大鼠血清的FACS緩衝液將細胞在冰上封閉10分鐘。然後將細胞與在FACS緩衝液中從0至10 μg/mL不同濃度的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、或11H2)、小鼠同型對照抗體IgG2a(eBioscience，#16-4724-85)或IgG2b(eBioscience，#16-4732-85)在冰上孵育20分鐘。然後將細胞與在FACS緩衝液中的0.3 μg/mL濃度的與生物素醯化的小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後與PE標記的鏈黴親和素(BD Pharmingen，#554061，用FACS緩衝液以1：50的稀釋係數稀釋)在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。使用一台FACSCanto II細胞分析儀(BD Bioscience)測量螢光強度。 生物素醯化的小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)與表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞的結合與識別人類XCR1上相似表位的未標記的5G7自身、未標記的2H6和11H2競爭(圖21)。另一方面，對於結合表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞而言，對照抗體不與生物素醯化的抗體(5G7)競爭。 實例11小鼠抗人類XCR1單克隆抗體5G7以及人源化抗人類XCR1單克隆抗體HK1L2和HK5L5對不同人類趨化因子受體的反應性 藉由FACS分析評定了小鼠抗人類XCR1抗體5G7和人源化抗人類XCR1單克隆抗體HK1L2和HK5L5對不同人類趨化因子受體的反應性。 以1×106個細胞/mL的濃度將親本B300.19細胞和表達人類趨化因子受體-EGFP的B300.19細胞(XCR1、CXCR1、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、CCR1、CCR2B、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR11、或CX3CR1)懸浮在FACS緩衝液(含1%胎牛血清的PBS-(Sigma))中，並且將100 μl的等分部分分配到96孔圓底平板的孔中。然後離心細胞，並且棄去上清液。用FACS緩衝液以5 μg/mL的濃度稀釋小鼠抗人類XCR1 mAb(5G7)、小鼠同型對照抗體IgG2b(eBioscience，#14-4732-82)、人源化抗人類XCR1單克隆抗體HK1L2和HK5L5、以及對照人類IgG(Mitsubishi，#128-26053-9)。分別以2：5和1：5的稀釋係數用FACS緩衝液稀釋PE標記的山羊抗人類XCR1多克隆抗體(R&D，#FAB857P，和LifeSpan BioScience，#LS-C76885)。向每孔添加五十μL的稀釋抗體，並且將細胞在冰上孵育20分鐘。然後用FACS緩衝液將細胞洗滌三次。將PE標記的抗小鼠IgG多克隆抗體(Jackson，#715-116-151，用FACS緩衝液以1：50的稀釋係數稀釋)添加至已經與5G7或小鼠同型對照抗體孵育的細胞。將PE標記的抗人類IgG多克隆抗體(Jackson，#709-116-149，用FACS緩衝液以1：50的稀釋係數稀釋)添加至已經與HK1L2、HK5L5或人類對照IgG孵育的細胞。將FACS緩衝液添加至已經與抗hXCR1多克隆抗體孵育的細胞。然後將細胞在冰上孵育20分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。使用一台FACSCanto II細胞分析儀測量螢光強度，並且表示為△PE平均值。藉由從用每一抗體染色每一細胞系獲得的每一PE平均值減去背景PE平均值計算△PE平均值。 除了表達人類CX3CR1-EGFP的細胞之外，小鼠抗人類XCR1抗體5G7選擇性地與表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞反應(圖22)。另一方面，除了表達人類CR1-EGFP的細胞之外，山羊抗人類XCR1多克隆抗體與不同的表達人類趨化因子受體-EGFP的細胞反應(圖22)。儘管它們對表達人類XCR1-EGFP的細胞具有高反應性，人源化抗人類XCR1抗體HK1L2和HK5L5顯示出降低的對表達人類CX3CR1-EGFP的細胞的反應性(圖23)。 實例12 5G7 Mab對乳酪分支桿菌誘導的DTH反應的作用 已知延遲性過敏反應(DTH)反應係當這種反應係針對自身抗原時引起自身免疫性疾病，例如甲狀腺炎、類風濕性關節炎和1型糖尿病的主要機制之一(Actor(阿克托)，J.K.和Ampel(安貝爾)，N.M.，(2009年12月)，超敏反應：T淋巴細胞介導的(IV型)。在以下中：Encyclopedia of Life Sciences(ELS)(生命科學百科全書)。John Wiley & Sons,Ltd(約翰威立父子出版公司)：Chichester(奇賈斯特))。對DTH反應而言，T細胞-樹突細胞相互作用係關鍵的。因此認為，抑制T細胞DC(樹突細胞)相互作用對治療那些疾病係有用的。我們研究了在人類XCR1敲入小鼠中，抗人類XCR1，5G7 Mab對DTH反應、乳酪分支桿菌誘導的DTH反應的模型的作用(Mihara(三原)，M.等人，Immunology Letters(免疫學快報)2002，84：223-229；Mohan(穆罕)K等人，Eur.J.Immunol.(歐洲免疫學雜誌)2005,35：1702-1711)。 (方法) 在第0天，用熱滅活的乳酪分支桿菌(100 μg/頭)皮下免疫工程化的hXCR1敲入小鼠(其中表達人類XCR1而不是小鼠XCR1)。在第1天、第3天、第7天和第9天，以500 μg/頭的劑量腹膜內注射5G7 Mab或對照小鼠IgG(Jackson Laboratory)。在用乳酪分支桿菌免疫10天之後，用懸浮在礦物油中的乳酪分支桿菌在右足墊上(20 μg/足、乳酪分支桿菌激發)，並且單獨用礦物油在左足墊上(對照激發)激發小鼠。在激發注射一天之後，藉由測量每一足墊的足墊厚度評定DTH反應。根據以下公式計算足墊腫脹。 足墊腫脹=([A]-[B])-([C]-[D]) [A]=在乳酪分支桿菌激發之後的右足墊的厚度 [B]=在乳酪分支桿菌激發之前的右足墊的厚度 [C]=在對照激發之後的左足墊的厚度 [D]=在對照激發之前的左足墊的厚度 (結果) 結果顯示，用對照IgG治療的小鼠相比，在用5G7 Mab治療的小鼠中，乳酪分支桿菌誘導的DTH反應顯示出顯著更低的DTH反應(圖24)。 (結論) 數據顯示了抗XCR1抗體治療在DTH反應中的效果。提示在治療DTH驅動的自身免疫性疾病，例如甲狀腺炎、類風濕性關節炎和1型糖尿病中，使用抗XCR1抗體可能是有益的。 實例13 5G7 Mab對MOG 37-50肽介導的EAE的作用 多發性硬化(MS)係一種人類中樞神經系統(CNS)的慢性脫髓鞘病，它可以臨床特徵在於緩解-復發或慢性進行性病程。最密集研究的MS的動物模型，實驗性自身免疫腦脊髓炎(EAE)，經典地導致運動功能的不足。很多報導顯示，T細胞在MS和EAE的發病機理中起到決定性作用。因此，我們進行了EAE模型實驗來研究5G7 Mab對MS的發病機理的抑制活性。 (實驗方法)1.樣品小鼠 其中在C57BL/6背景上的表達人類XCR1而不是小鼠XCR1的人類XCR1敲入小鼠(7-12周齡)被用於該實驗。 2. EAE的誘導 根據雜誌歐洲免疫學雜誌，2005,35：76-85中報導的方法進行EAE的誘導，其中表明了CD8+ T細胞在EAE發展中可能的作用。簡言之，用在含20 mg/ml的結核分枝桿菌H37Ra的弗氏完全佐劑(CFA)中乳化的200 μg的髓鞘少突膠質糖蛋白37-50肽(MOG 37-50)皮下注射人類XCR1敲入小鼠。在免疫後第0天和第2天，靜脈內給予200 ng的百日咳毒素。 3.給予抗體的方法 製備在PBS中的抗人類XCR1小鼠單克隆抗體(5G7)及其對照抗體(即小鼠IgG(Jackson Laboratory))至2 mg/mL的終濃度。在第7天、第10天、第14天和第17天，以250 μl/小鼠(500 μg/小鼠)的量，向小鼠靜脈施用每一種以上抗體。 4.該模型的病理學評分 從免疫當天監測EAE的臨床症狀，並且基於以下標準，按等級0-5評分：等級0：無疾病，等級0.5：輕微的尾部癱瘓，等級1：尾部癱瘓，等級2：不平衡的步態，等級2.5：一條癱瘓的後腿，等級3：後肢癱瘓，等級4：癱瘓的前和後腿，以及等級5：垂死或死亡。 (實驗結果和結論) 給予5G7 Mab的所獲得的臨床評分顯示出低於給予對照IgG的小鼠中的那些的水平(圖25)。數據表明，在EAE發展中用抗XCR1抗體治療顯示出一定水平的抑制，並且提示對於人類類中的MS，用抗XCR1抗體治療可能是有益的。 實例14用小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)抑制人類XCL1結合表達人類XCR1的細胞 為了確定小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)是否抑制人類XCL1結合人類XCR1，進行了競爭性配位基結合實驗。 首先，根據以下步驟確定人類XCL1-SSS-His(10)對表達人類XCR1-EGFP的BaF3細胞的結合。以1：1比率混合親本BaF3細胞和表達人類XCR1-EGFP的BaF3細胞，並且懸浮在FACS緩衝液(含1% FBS的PBS-(Sigma))中。在2.5 μM可溶性XCL1(R&D，#695-LT-025/CF)的存在或缺乏下，將細胞在FACS緩衝液中與增加濃度的人類XCL1-SSS-His(10)在冰上孵育30分鐘。接下來，用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後與抗-6x His標籤抗體(BETHYL，#A190-114A，以1：100稀釋在FACS緩衝液中)在冰上孵育20分鐘。再次用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後與PE標記的抗兔IgG抗體(Jackson，#711-166-152，以1：50稀釋在FACS緩衝液中)在冰上孵育20分鐘。接下來，再次用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。使用一台FACSCanto II細胞分析儀(BD Bioscience)測量螢光強度。藉由從總結合(在缺乏2.5 μM的可溶性XCL1下)中減去非特異性結合(在存在2.5 μM的可溶性XCL1下)來確定特異性結合。 根據以下步驟進行競爭性配位基結合實驗。以1：1比率混合親本BaF3細胞和表達人類XCR1-EGFP的BaF3細胞，並且懸浮在FACS緩衝液(含1% FBS的PBS-(Sigma))中。用含10%大鼠血清的FACS緩衝液將細胞在冰上封閉10分鐘。然後將細胞與從0至150 μg/mL不同濃度的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、或11H2)、小鼠同型對照抗體IgG2a(eBioscience，#16-4724-85)或IgG2b(eBioscience，#16-4732-85)在冰上孵育20分鐘。接下來將細胞與飽和濃度0.12 μg/mL的人類XCL1-SSS-His(10)在冰上孵育30分鐘。用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後與抗-6x His標籤抗體(BETHYL，#A190-114A，以1：100稀釋在FACS緩衝液中)在冰上孵育20分鐘。再次用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後與PE標記的抗兔IgG抗體(Jackson，#711-166-152，以1：50稀釋在FACS緩衝液中)在冰上孵育20分鐘。接下來，再次用FACS緩衝液將細胞洗滌三次，並且然後懸浮在FACS緩衝液中。使用一台FACSCanto II細胞分析儀(BD Bioscience)測量螢光強度。 用小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)抑制了人類XCL1結合表達人類XCR1-EGFP的BaF3細胞，並且該等抗體的IC50分別為37.0、6.9、和23.8 nM。另一方面，對照抗體未抑制人類XCL1結合表達人類XCR-EGFP的BaF3細胞。 [圖1]圖1顯示了小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)對表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞的的反應性的FACS分析結果。 [圖2]圖2顯示了小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)對表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞的人類淋巴細胞趨化因子誘導的遷移的中和活性的趨化性實驗的分析結果。 [圖3]圖3顯示了與它們的母源小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)和它的嵌合抗體平行，人源化抗人類XCR1抗體(HK1L2和HK5L5)對表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞的反應性的FACS分析結果。 [圖4]圖4顯示了小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)和人源化抗人類XCR1抗體(HK1L2和HK5L5)對人類BDCA3+樹突細胞的反應性的FACS分析結果。 [圖5]圖5顯示了與它們的母源小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)和它的嵌合抗體的中和活性平行，人源化抗人類XCR1抗體(HK1L2和HK5L5)對表達人類XCR1-EGFP的B300.19細胞的人類淋巴細胞趨化因子誘導的遷移的中和活性的趨化性實驗的分析結果。 [圖6]圖6顯示了與一同種型對照抗體(人類IgG2，κ)平行，人源化抗人類XCR1抗體(HK1L2和HK5L5)和嵌合抗體對人類BDCA3+樹突細胞的人類淋巴細胞趨化因子誘導的遷移的中和活性的跨內皮遷移實驗的分析結果。 [圖7]圖7顯示了本發明的抗體的重鏈CDR 1至3和輕鏈CDR 1至3的胺基酸序列的比較。該圖還顯示了重鏈CDR 1至3和輕鏈CDR 1至3的廣義胺基酸序列。 [圖8]圖8顯示了本發明的小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)對遲髮型接觸性皮炎(DTH)的小鼠模型的藥理作用。圖8A和8B分別顯示了藉由比較在經本發明的小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)與對照抗體之間的DNFB誘導24小時和48小時之後的耳腫脹度(mm)所獲得的結果。 [圖9]圖9顯示了本發明的小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)對不同的人類趨化因子受體的結合特異性。該圖形中的曲線的橫軸表示藻紅蛋白(PE)的螢光強度。 [圖10]圖10顯示了本發明的抗體結合到其上的人類XCR1的胺基酸序列。 [圖11]顯示了使用本發明的抗體，對表達人類XCR1的細胞的細胞毒性。 [圖12]圖12顯示了對本發明的小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)的細胞毒性T淋巴細胞實驗的結果的分析。 [圖13]圖13顯示了本發明的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)對表達嵌合人類/小鼠XCR1的細胞的反應性。 [圖14]圖14顯示了藉由肽ELISA對人類XCR1胞外域上的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、和5G7)結合位點的作圖結果的分析。 [圖15]圖15顯示了藉由使用丙胺酸突變體對人類XCR1胞外域上的抗人類XCR1多克隆抗體結合位點的作圖結果的分析。 [圖16]圖16顯示了藉由使用丙胺酸突變體對人類XCR1胞外域上的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6)結合位點的作圖結果的分析。 [圖17]圖17顯示了藉由使用丙胺酸突變體對人類XCR1胞外域上的小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)結合位點的作圖結果的分析。 [圖18]圖18顯示了藉由使用丙胺酸突變體對人類EXR1胞外域上的小鼠抗人類XCR1抗體(11H2)結合位點的作圖結果的分析。 [圖19]圖19顯示了藉由使用丙胺酸突變體對人類XCR1胞外域上的人源化抗人類XCR1抗體(HK1L2)結合位點的作圖結果的分析。 [圖20]圖20顯示了藉由使用丙胺酸突變體對人類XCR1胞外域上的人源化抗人類XCR1抗體(HK5L5)結合位點的作圖結果的分析。 [圖21]圖21顯示了對在用於結合表達人類XCR1的細胞的小鼠抗人類XCR1抗體(2H6、5G7、和11H2)之間的競爭結果的分析。 [圖22]圖22顯示了小鼠抗人類XCR1單克隆抗體(5G7)和商品化的山羊抗人類XCR1多克隆抗體對不同的人類趨化因子受體的結合特異性。該圖形中的曲線的橫軸表示藻紅蛋白(PE)的螢光強度。 [圖23]圖23顯示了小鼠抗人類XCR1單克隆抗體(5G7)和人源化抗人類XCR1單克隆抗體(HK1L2和HK5L5)對不同的人類趨化因子受體的結合特異性。該圖形中的曲線的橫軸表示藻紅蛋白(PE)的螢光強度。 [圖24]與24顯示了本發明的小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)對由乳酪分支桿菌誘導的遲髮型接觸性皮炎(DTH)的小鼠模型的藥理作用。 [圖25]圖25顯示了本發明的小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)對藉由實驗性自身免疫腦脊髓炎(EAE)的多發性硬化(MS)的小鼠模型的藥理作用。 [圖26]圖26顯示了對本發明的小鼠抗人類XCR1抗體的競爭配位基結合分析的結果的分析。 <110> 日商衛材R&D企管股份有限公司 <120> 抗人類XCR1抗體 <130> P12-035 <140> 101113633 <141> 2012-08-30 <150> US 61/530194 <151> 2011-09-01 <150> US 661/659637 <151> 2012-06-14 <160> 119 <170> PatentIn version 3.4 <210> 1 <211> 121 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(2H6)重鏈可變區 <400> 1 <210> 2 <211> 112 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(2H6)輕鏈可變區 <400> 2 <210> 3 <211> 363 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(2H6)重鏈可變區 <400> 3 <210> 4 <211> 336 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(2H6)輕鏈可變區 <400> 4 <210> 5 <211> 121 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)重鏈可變區 <400> 5 <210> 6 <211> 112 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)輕鏈可變區 <400> 6 <210> 7 <211> 363 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)重鏈可變區 <400> 7 <210> 8 <211> 336 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(5G7)輕鏈可變區 <400> 8 <210> 9 <211> 122 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(11H2)重鏈可變區 <400> 9 <210> 10 <211> 107 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(11H2)輕鏈可變區 <400> 10 <210> 11 <211> 366 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(11H2)重鏈可變區 <400> 11 <210> 12 <211> 321 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 小鼠抗人類XCR1抗體(11H2)輕鏈可變區 <400> 12 <210> 13 <211> 447 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 嵌合抗人類XCR1抗體重鏈 <400> 13 <210> 14 <211> 219 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 嵌合抗人類XCR1抗體輕鏈 <400> 14 <210> 15 <211> 1344 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 嵌合抗人類XCR1抗體重鏈 <400> 15 <210> 16 <211> 660 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 嵌合抗人類XCR1抗體輕鏈 <400> 16 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7之重鏈CDR 1 <400> 17 <210> 18 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7之重鏈CDR 2 <400> 18 <210> 19 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7之重鏈CDR 3 <400> 19 <210> 20 <211> 16 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7之輕鏈CDR 1 <400> 20 <210> 21 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7之輕鏈CDR 2 <400> 21 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7之輕鏈CDR 3 <400> 22 <210> 23 <211> 15 <212> DNA <213> 人工序列 <220> 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<220> <223> 2H6之重鏈CDR 3 <400> 37 <210> 38 <211> 48 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 2H6之輕鏈CDR 1 <400> 38 <210> 39 <211> 21 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 2H6之輕鏈CDR 2 <400> 39 <210> 40 <211> 27 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 2H6之輕鏈CDR 3 <400> 40 <210> 41 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之重鏈CDR 1 <400> 41 <210> 42 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之重鏈CDR 2 <400> 42 <210> 43 <211> 13 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之重鏈CDR 3 <400> 43 <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之輕鏈CDR 1 <400> 44 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之輕鏈CDR 2 <400> 45 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之輕鏈CDR 3 <400> 46 <210> 47 <211> 15 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之重鏈CDR 1 <400> 47 <210> 48 <211> 51 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之重鏈CDR 2 <400> 48 <210> 49 <211> 39 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之重鏈CDR 3 <400> 49 <210> 50 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之輕鏈CDR 1 <400> 50 <210> 51 <211> 21 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之輕鏈CDR 2 <400> 51 <210> 52 <211> 27 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 11H2之輕鏈CDR 3 <400> 52 <210> 53 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7和2H6的互補決定區的廣義胺基酸序列(重鏈CDR 1) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> X is Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gln,Glu,Gly,His,Ile,Leu,Lys,Met,Phe,Pro,Ser,Thr,Trp,Tyr,or Val. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gln,Glu,Gly,His,Ile,Leu,Lys,Met,Phe,Pro,Ser,Thr,Trp,Tyr,or Val. <400> 53 <210> 54 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7和2H6的互補決定區的廣義胺基酸序列(重鏈CDR 2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gln,Glu,Gly,His,Ile,Leu,Lys,Met,Phe,Pro,Ser,Thr,Trp,Tyr,or Val. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gln,Glu,Gly,His,Ile,Leu,Lys,Met,Phe,Pro,Ser,Thr,Trp,Tyr,or Val. <400> 54 <210> 55 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7和2H6的互補決定區的廣義胺基酸序列(重鏈CDR 3) <400> 55 <210> 56 <211> 16 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7和2H6的互補決定區的廣義胺基酸序列(輕鏈CDR 1) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gln,Glu,Gly,His,Ile,Leu,Lys,Met,Phe,Pro,Ser,Thr,Trp,Tyr,or Val. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gln,Glu,Gly,His,Ile,Leu,Lys,Met,Phe,Pro,Ser,Thr,Trp,Tyr,or Val. <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa is Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gln,Glu,Gly,His,Ile,Leu,Lys,Met,Phe,Pro,Ser,Thr,Trp,Tyr,or Val. <400> 56 <210> 57 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7和2H6的互補決定區的廣義胺基酸序列(輕鏈CDR 2) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gln,Glu,Gly,His,Ile,Leu,Lys,Met,Phe,Pro,Ser,Thr,Trp,Tyr,or Val. <220> <221> MISC_FEATURE <223> Xaa is Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gln,Glu,Gly,His,Ile,Leu,Lys,Met,Phe,Pro,Ser,Thr,Trp,Tyr,or Val. <400> 57 <210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 5G7和2H6的互補決定區的廣義胺基酸序列(輕鏈CDR 3) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is Ala,Arg,Asn,Asp,Cys,Gln,Glu,Gly,His,Ile,Leu,Lys,Met,Phe,Pro,Ser,Thr,Trp,Tyr,or Val. <400> 58 <210> 59 <211> 447 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體重鏈(HK1) <400> 59 <210> 60 <211> 121 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體重鏈(HK1)可變區 <400> 60 <210> 61 <211> 1344 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體重鏈(HK1) <400> 61 <210> 62 <211> 363 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體重鏈(HK1)可變區 <400> 62 <210> 63 <211> 447 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體重鏈(HK5) <400> 63 <210> 64 <211> 121 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體重鏈(HK5)可變區 <400> 64 <210> 65 <211> 1344 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體重鏈(HK5) <400> 65 <210> 66 <211> 363 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體重鏈(HK5)可變區 <400> 66 <210> 67 <211> 219 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體輕鏈(L2) <400> 67 <210> 68 <21> 112 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體輕鏈(L2)可變區 <400> 68 <210> 69 <211> 660 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體輕鏈(L2) <400> 69 <210> 70 <211> 336 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體輕鏈(L2)可變區 <400> 70 <210> 71 <211> 219 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體輕鏈(L5) <400> 71 <210> 72 <211> 112 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體輕鏈(L5)可變區 <400> 72 <210> 73 <211> 660 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體輕鏈(L5) <400> 73 <210> 74 <211> 336 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 人源化抗人類XCR1抗體輕鏈(L5)可變區 <400> 74 <210> 75 <211> 57 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 信號序列 <400> 75 <210> 76 <211> 57 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 信號序列 <400> 76 <210> 77 <211> 57 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 信號序列 <400> 77 <210> 78 <211> 57 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 信號序列 <400> 78 <210> 79 <211> 60 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 信號序列 <400> 79 <210> 80 <211> 60 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 信號序列 <400> 80 <210> 81 <211> 12 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 5'適配子ad29S <400> 81 <210> 82 <211> 50 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 獲得5'適配子之29AS <400> 82 <210> 83 <211> 26 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引物 <400> 83 <210> 84 <211> 21 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引物 <400> 84 <210> 85 <211> 26 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引物 <400> 85 <210> 86 <211> 26 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引物 <400> 86 <210> 87 <211> 19 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引物 <400> 87 <210> 88 <211> 27 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引物 <400> 88 <210> 89 <211> 21 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引物 <400> 89 <210> 90 <211> 24 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引物 <400> 90 <210> 91 <211> 333 <212> PRT <213> Abramis brama <400> 91 <210> 92 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 92 <210> 93 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 93 <210> 94 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 94 <210> 95 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 95 <210> 96 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 96 <210> 97 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 97 <210> 98 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 98 <210> 99 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 99 <210> 100 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 100 <210> 101 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 101 <210> 102 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 102 <210> 103 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 103 <210> 104 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 104 <210> 105 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 105 <210> 106 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 106 <210> 107 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 107 <210> 108 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 108 <210> 109 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 109 <210> 110 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 110 <210> 111 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 111 <210> 112 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 112 <210> 113 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 113 <210> 114 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 114 <210> 115 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 115 <210> 116 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 116 <210> 117 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 肽_胞外區 <400> 117 <210> 118 <211> 24 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 候選表位 <400> 118 <210> 119 <211> 12 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 候選表位 <400> 119
权利要求:
Claims (27) [1] 一種結合人類XCR1的抗體，其中該抗體結合包括選自下組的至少三個胺基酸的線性表位或非連續表位，該組由以下各項組成：SEQ ID NO：91的胺基酸序列中的第8、第11、第12、第13、第14、第16、第17、第22、第23、第176、和第177個胺基酸。 [2] 如請求項1所述的抗體，其中該抗體係：包括包含在以下(g)至(i)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(j)至(l)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體；包括包含在以下(m)至(o)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(p)至(r)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體；或包括包含在以下(a)至(c)中說明的重鏈CDR 1至3的一重鏈可變區和包含在以下(d)至(f)中說明的輕鏈CDR 1至3的一輕鏈可變區的抗體：(a)一由SEQ ID NO：41的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(b)一由SEQ ID NO：42的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(c)一由SEQ ID NO：43的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(d)一由SEQ ID NO：44的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(e)一由SEQ ID NO：45的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(f)一由SEQ ID NO：46的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3；(g)一由SEQ ID NO：17的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1；(h)一由SEQ ID NO：18的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(i)一由SEQ ID NO：19的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(j)一由SEQ ID NO：20的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1；(k)一由SEQ ID NO：21的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，(l)一由SEQ ID NO：22的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3；(m)一由SEQ ID NO：29的胺基酸序列組成的重鏈CDR 1，(n)一由SEQ ID NO：30的胺基酸序列組成的重鏈CDR 2，(o)一由SEQ ID NO：31的胺基酸序列組成的重鏈CDR 3；(p)一由SEQ ID NO：32的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 1，(q)一由SEQ ID NO：33的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 2，以及(r)一由SEQ ID NO：34的胺基酸序列組成的輕鏈CDR 3。 [3] 如請求項1或2所述之抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO：60或64的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：68或72的胺基酸序列的一輕鏈可變區。 [4] 如請求項1至3中任一項所述之抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：68的胺基酸序列的一輕鏈可變區。 [5] 如請求項1至3中任一項所述之抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO：64的胺基酸序列的一重鏈可變區和包含SEQ ID NO：72的胺基酸序列的一輕鏈可變區。 [6] 如請求項1至5中任一項所述之抗體，其中該抗體包括一人類恒定區。 [7] 如請求項1至6中任一項所述之抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的一重鏈和包含SEQ ID NO：67的胺基酸序列的一輕鏈。 [8] 如請求項1至6中任一項所述之抗體，其中該抗體包括包含SEQ ID NO：63的胺基酸序列的一重鏈和包含SEQ ID NO：71的胺基酸序列的一輕鏈。 [9] 如請求項1至8中任一項所述之抗體，包括一Fc區，其中該Fc區被突變以誘導在ADCC活性方面的變化。 [10] 如請求項9所述之抗體，其中該Fc區被突變以降低ADCC活性。 [11] 如請求項1至10中任一項所述之抗體，其中該抗體被結合到一細胞毒性分子上。 [12] 如請求項1至11中任一項所述之抗體，其中該抗體抑制人類XCR1與人類XCL1之間的相互作用。 [13] 如請求項1至12中任一項所述之抗體，其中該抗體抑制樹突細胞的細胞遷移。 [14] 如請求項1至13中任一項所述之抗體，其中該抗體抑制細胞毒性T淋巴細胞的活性。 [15] 一種藥用組合物，包括如請求項1至14中任一項所述之抗體和一藥學上可接受的載體或添加劑。 [16] 如請求項15所述之藥用組合物，其中該藥用組合物係用於免疫疾病的治療劑。 [17] 如請求項16所述之藥用組合物，其中該免疫疾病係皮膚免疫疾病。 [18] 如請求項17所述之藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、類牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性水皰性疾病(例如天皰瘡、類天皰瘡、或後天性大皰性表皮鬆解症)、膿皰病、妊娠皰疹、線狀IgA大皰皮病、斑禿、白癜風、與膠原病有關的皮膚病(系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合症、或混合性結締組織病)、與阿狄森病有關的皮膚病、與移植物抗宿主病(GVHD)有關的皮膚病、濕疹、或蕁麻疹。 [19] 如請求項17所述之藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、或包涵體肌炎。 [20] 如請求項17所述之藥用組合物，其中該皮膚免疫疾病係特應性皮炎或接觸性皮炎。 [21] 如請求項16所述之藥用組合物，其中該免疫疾病係甲狀腺炎、類風濕性關節炎、1型糖尿病、或多發性硬化。 [22] 一種核酸，包括編碼如請求項1至14中任一項所述之抗體的核苷酸序列。 [23] 一種治療免疫疾病之方法，包括將有效量的如請求項1至14中任一項所述之抗體或如請求項15所述之藥用組合物給予感染免疫疾病的人類。 [24] 如請求項23所述之方法，其中該免疫疾病係皮膚免疫疾病。 [25] 如請求項24所述之方法，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、類牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、包涵體肌炎、自身免疫性水皰性疾病(例如天皰瘡、類天皰瘡、或後天性大皰性表皮鬆解症)、膿皰病、妊娠皰疹、線狀IgA大皰皮病、斑禿、白癜風、與膠原病有關的皮膚病(系統性紅斑狼瘡、乾燥綜合症、或混合性結締組織病)、與阿狄森病有關的皮膚病、與移植物抗宿主病(GVHD)有關的皮膚病、濕疹、或蕁麻疹。 [26] 如請求項24所述之方法，其中該皮膚免疫疾病係牛皮癬、特應性皮炎、接觸性皮炎、皮肌炎、多發性肌炎、或包涵體肌炎。 [27] 如請求項23所述之方法，其中該免疫疾病係甲狀腺炎、類風濕性關節炎、1型糖尿病、或多發性硬化。
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