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    本發明提供一種咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其抑制PI3K及mTOR兩者且因此適用於治療癌症。
    公开号:TW201307343A
    申请号:TW100148428
    申请日:2011-12-23
    公开日:2013-02-16
    发明作者:David Anthony Barda；Mary Margaret Mader
    申请人:Lilly Co Eli；
    IPC主号:A61K31-00
    专利说明:
    PI3-激酶/mTOR雙重抑制劑
    磷酸肌醇3-激酶(PI3K)為傳播調節各種細胞過程之細胞內信號傳導級聯的脂質激酶家族。舉例而言，PI3K活化起始促進癌細胞生長、存活及代謝的信號轉導級聯。雷帕黴素之哺乳動物目標(mammalian target of rapamycin；mTOR)為回應於遺傳、後生及環境條件協調細胞週期進程及細胞生長的關鍵信號傳導節點。mTOR信號傳導中所涉及之路徑在前癌人類組織中失調。鑒於PI3K及mTOR在細胞週期路徑中所具有之作用，抑制PI3K及mTOR兩者可適用於治療某些人類疾病，諸如癌症。
    PI3K抑制劑及PI3K/mTOR雙重抑制劑在此項技術中已知。WO 2010/038165揭示認定為PI3-Kα酶之調節劑或抑制劑及/或PI3-Kα/mTOR雙重抑制劑的某些咪唑并[1,5]啶化合物。WO 2010/139731及WO 2010/139747揭示認定為用於治療蛋白質或脂質激酶依賴性疾病(特定言之PI3K依賴性疾病)的某些咪唑并喹啉酮化合物。
    仍然存在提供替代性PI3K/mTOR抑制劑之需要，特定言之具有有益物理性質(諸如改良之溶解度)及/或所需臨床性質(諸如改良之活體內效能及/或藥物動力學效能)之有效PI3K/mTOR抑制劑，其可用於治療細胞增生性病症(諸如癌症)。本發明提供有效PI3K/mTOR抑制劑。更特定言之，本發明提供適用作抗癌劑之具有有益物理性質及/或所需臨床性質的有效PI3K/mTOR抑制劑。
    本發明提供一種為8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
    作為一特定實施例，本發明提供為8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮之化合物。
    另一實施例為呈結晶形式之8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮。
    本發明亦提供呈結晶形式之8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮，其特徵在於具有在8.57處及9.06、15.93、18.29及18.87 2θ±0.2中一或多處出現之特徵峰的X射線粉末繞射圖案。
    本發明提供一種醫藥組合物，其包含8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
    本發明提供一種醫藥組合物，其包含8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽，另外包含一或多種治療成分。
    本發明提供一種治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量的8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽。
    本發明提供8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其係用於製造用於治療癌症之藥物。
    本發明提供8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於療法中。
    本發明提供8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於治療癌症。
    另外，本發明提供如本文所述之方法及用途的較佳實施例，其中癌症係選自由以下組成之群：膀胱癌、結腸癌、胃癌(gastric cancer)、頭部及頸部癌症、NSCLC、乳癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、神經膠母細胞瘤、肺癌、腎癌、肉瘤、造血及淋巴組織癌症、CNS癌症、子宮頸癌、子宮內膜癌、肝癌、皮膚癌、胃癌(stomach cancer)、甲狀腺癌、上呼吸消化道癌症及泌尿系統癌症。
    除非另有指示，否則如以上及在本發明之通篇描述中所用，以下術語應理解為具有以下含義：「醫藥學上可接受之鹽(Pharmaceutically acceptable salt/pharmaceutically acceptable salts)」係指本發明化合物之相對無毒性的無機及有機鹽。
    術語「治療(treatment/treat/treating)」及其類似措詞意欲包括減緩或逆轉病症之發展。此等術語亦包括緩和、改善、減輕、消除或減少病症或病狀之一或多種症狀，即使病症或病狀實際上並未消除且即使病症或病狀之發展本身並未減緩或逆轉。
    「治療有效量」或「有效量」意謂本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽或含有本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組合物的對組織、系統、動物、哺乳動物或人類引起研究者、獸醫、醫師、或其他臨床醫師所尋求之生物或醫學反應或所需治療效果的量。
    本發明之化合物能夠與例如多種無機及有機酸反應形成醫藥學上可接受之鹽。該等醫藥學上可接受之鹽及其常用製備方法為此項技術中所熟知。參見例如P.Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use,(VCHA/Wiley-VCH,2002)；S.M.Berge等人「Pharmaceutical Salts」,Journal of Pharmaceutical Sciences，第66卷，第1期，1977年1月。
    本發明之化合物較佳使用一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑調配為醫藥組合物且利用多種途徑投與。該等組合物較佳用於經口、皮下或靜脈內投藥。該等醫藥組合物及其製備方法為此項技術中所熟知。參見例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy(A.Gennaro等人編，第21版，Mack Publishing Co.,2005)。
    實際上投與之本發明化合物的量將由醫師根據相關情形確定，該等情形包括待治療病狀、所選投藥途徑、實際投與之本發明化合物、個別患者之年齡、體重及反應及患者症狀的嚴重程度。每日劑量通常處於約1 mg至約2000 mg範圍內。在一些情況下，低於上述範圍下限之劑量濃度可能更加適當，而在其他情況下可能採用較大劑量。
    本發明之化合物可利用此項技術中已知的多種程序以及以下製備及實例中所述之程序製備。所述各途徑之特定合成步驟可以不同方式組合來製備本發明之化合物。
    試劑及起始物質對於一般技術者通常易於獲得。其他可藉由有機及雜環化學之標準技術、與合成已知結構類似化合物類似之技術及以下製備及實例中所述的程序(包括任何新穎程序)製得。提供以下製備及實例用以更詳細說明本發明且代表化合物之典型合成。本發明之化合物的名稱一般由SymyxDraw 3.2提供。
    如本文中所用，以下術語具有以下說明之含義：「ATP」係指三磷酸腺苷；「AUC」係指曲線下面積；「CNS」係指中樞神經系統；「DMEM」係指達爾伯克氏改良伊格爾培養基(Dulbecco's modified eagle medium)；「DMSO」係指二甲亞碸；「DTT」係指二硫蘇糖醇；「4E-BP1」係指4E結合蛋白1；「FBS」係指胎牛血清；「EDTA」係指乙二胺四乙酸；「EGTA」係指乙二醇-雙(â-胺基乙醚)-N,N,N',N'-四乙酸；「GFP」係指綠色螢光蛋白；「GST」係指麩胱甘肽-S-轉移酶；「HEC」係指羥乙基纖維素；「HEPES」係指N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙烷磺酸；「HPLC」係指高壓液相層析；「IC50」係指最大半數抑制濃度；「IMDM」係指伊思考夫氏改良達爾伯克氏培養基(Iscove's Modified Dulbecco's Media)；「MEM」係指最低必需培養基；「MS」係指質譜分析法；「NMR」係指核磁共振；「NSCLC」係指非小細胞肺癌；「PBS」係指磷酸鹽緩衝鹽水；「PGK」係指磷酸甘油酸激酶；「PIP2」係指磷脂醯肌醇(4,5)二磷酸；「PO」係指經口；「POPS」係指軟脂醯基-油醯基磷脂醯絲胺酸；「PPI」係指質子泵抑制劑；「RPMI」係指Roswell Park Memorial Institue；「RT」係指室溫；「TFA」係指三氟乙酸；「TMED50」係指臨限值最低有效劑量；「TR-FRET」係指時差式螢光能量轉移；「Tris」係指參(羥甲基)胺基甲烷；「Triton-X」係指4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇第三辛基苯氧基聚乙氧基乙醇聚乙二醇第三辛基苯基醚；且「Tween-20」係指聚山梨醇酯20；「XRD」係指X射線粉末繞射。 製備1
    (2S)-2-甲氧基丙-1-胺鹽酸鹽
    將[(2S)-2-羥丙基]胺基甲酸第三丁酯(870 g，4.96 mol)於四氫呋喃(10 L)中之溶液冷卻至5℃。經8分鐘逐份添加氫化鈉(60%分散液，248 g，6.21 mol，1.25當量)。反應在5℃下攪拌30分鐘。經5分鐘內逐滴添加碘代甲烷(387 mL，6.21 mol，1.25當量)且使反應在5℃至10℃下進行45分鐘。用水(1 L)淬滅反應且用乙酸乙酯(4 L)萃取。獲得有機層，且將其在真空中濃縮獲得殘餘物。殘餘物與甲苯(2×1 L)共蒸發，用二氯甲烷(2 L)稀釋且過濾。再用二氯甲烷(500 mL)沖洗剩餘固體。在真空中濃縮合併之二氯甲烷液態濾液獲得粗中間物N-[(2S)-2-甲氧基丙基]胺基甲酸第三丁酯(880 g，94%)。
    將粗中間物N-[(2S)-2-甲氧基丙基]胺基甲酸第三丁酯(806 g，4.26 mmol)懸浮於二氯甲烷(3.22 L)中且在15℃下經30分鐘逐滴添加4 M HCl之二噁烷溶液(2.66 L)。混合物在室溫下攪拌2小時。過濾且再用二氯甲烷(2×250 mL)洗滌固體殘餘物且在真空中移除揮發物，得到固體沈澱物。向固體中添加甲基第三丁基醚(2 L)且過濾；再用甲基第三丁基醚(2×500 mL)洗滌固體，乾燥且用丙酮(4×500 mL)進一步洗滌固體，獲得作為標題化合物之白色固體(171 g，32%)。1H NMR(300.13 MHz,DMSO)：8.11(s,3H),3.62-3.55(m,1H),3.26(s,3H),2.87(dd,J=3.6,13.2 Hz,1H),2.68(dd,J=8.5,13.2 Hz,1H),1.10(d,J=6.3 Hz,3H)。 製備2
    6-溴-4-氯-喹啉-3-甲酸乙酯
    在氮氣氛圍下將6-溴-4-羥基喹啉-3-甲酸乙酯(11 g，37 mmol)懸浮於無水二甲基甲醯胺(148.6 mL)中。經5分鐘經由注射器添加磷醯氯(20.7 mL，222 mmol，6當量)且在室溫下劇烈攪拌3小時。藉由將混合物傾入冰水(1.5 L)中來淬滅反應且繼續攪拌直至全部冰均已融化。藉由過濾獲得所形成之固體，用水沖洗且使其完全乾燥，得到標題化合物(11.4 g，94%)。MS(ESI)m/z(M+H)+ 314.0,316.0。 製備3
    2-(5-溴-3-吡啶基)丙-2-醇
    方法1
    在內部溫度低於30℃的情況下，向3 M溴化甲基鎂於乙醚中之溶液中(98 mL，293 mmol，3當量)添加5-溴吡啶-3-甲酸乙酯(22.5 g，98 mmol)於四氫呋喃(350 mL)中之溶液。反應完成時，在冰浴中冷卻混合物且用飽和氯化銨水溶液淬滅，且保持攪拌直至大部分固體溶解。添加水(500 mL)且用乙酸乙酯(3×500 mL)萃取。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且將有機層濃縮成殘餘物。殘餘物利用矽膠管柱層析法以乙酸乙酯：己烷(1：1)之溶劑溶離進行純化，得到呈油狀之標題產物(19.4 g，92%)。MS(ESI)m/z(M+H)+ 214.9,216.9。 方法2
    在內部溫度低於18℃的情況下，經30分鐘在冷卻浴中向3 M溴化甲基鎂於乙醚中之溶液中(800 mL，3當量)逐滴添加5-溴吡啶-3-甲酸甲酯(173 g，800 mmol)於四氫呋喃(2.6 L)中之溶液。混合物在室溫下攪拌1小時，隨後將其冷卻至0℃且用飽和氯化銨水溶液(500 mL)淬滅。添加碳酸氫鈉飽和水溶液(1 L)且分離各層。獲得有機層且將其與甲苯(1 L)一起濃縮以共沸殘餘水，得到呈橙色油狀之標題化合物(168 g，97%)。1H NMR(300.13 MHz,DMSO)：8.66(d,J=1.9 Hz,1H),8.55(d,J=2.2 Hz,1H),8.06(t,J=2.2 Hz,1H),5.38(s,1H),1.45(s,6H)。 製備4
    2-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-3-吡啶基]丙-2-醇。
    在氮氣中充分沖洗2-(5-溴-3-吡啶基)丙-2-醇(18.5 g，85.7 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(44 g，171 mmol，2當量)及乙酸鉀(25.2 g，257 mmol，3當量)於1,4-二噁烷(428 mL)中之混合物。添加氯化(1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵)鈀(II)(3.5 g，4.3 mmol)且將反應抽空及用氮氣沖洗兩次。混合物在90℃下加熱隔夜。冷卻且用乙酸乙酯(1 L)稀釋且音波處理30分鐘。經Celite®墊過濾且經硫酸鈉乾燥液態濾液。過濾後，濃縮有機液體且使殘餘物再溶解於乙酸乙酯(1 L)中且再經由Celite®墊過濾。濃縮濾液且使殘餘物依次懸浮於乙醚(100 mL)及己烷(700 mL)中。簡單音波處理且過濾獲得固體殘餘物，得到呈粗固體狀之標題化合物(18.5 g)。MS(ESI)m/z(M+H)+ 264.0。 製備5
    6-溴-4-[[(2S)-2-甲氧基丙基]胺基]喹啉-3-甲酸乙酯
    將6-溴-4-氯-喹啉-3-甲酸乙酯(389 g，1.24 mol)及(2S)-2-甲氧基丙-1-胺鹽酸鹽(171 g，1.36 mol，1.1當量)懸浮於乙醇(5.84 L)中。添加二異丙基乙胺(474 mL)且混合物在50℃下加熱隔夜。16小時後，使反應冷卻至室溫且在真空中濃縮。添加甲基第三丁基醚(2 L)至殘餘物中且攪拌20分鐘。過濾沈澱物且用甲基第三丁基醚(2×250 mL)對其進行洗滌。在真空中濃縮濾液，以幾乎定量產率獲得標題化合物。化合物未經進一步純化即用於下一步驟中。MS(ESI)m/z(M+H)+ 367.0,369.0。 製備6
    6-溴-4-[[(2S)-2-甲氧基丙基]胺基]喹啉-3-甲酸
    在室溫下向6-溴-4-[[(2S)-2-甲氧基丙基]胺基]喹啉-3-甲酸乙酯(454 g，1.24 mol)於四氫呋喃(4.54 L)中之溶液中添加氫氧化鈉(296.7 g，7.42 mol，6當量)於水(454 mL)中之溶液。混合物在50℃下加熱隔夜。18小時後，使反應冷卻至0℃，在23℃下之溫度下經30分鐘添加37% HCl水溶液直至pH=6(約450 mL)。用濾紙過濾所形成之沈澱物，且隨後用水(2 L)、丙酮(2 L)及甲基第三丁基醚(2 L)對其進行洗滌。乾燥白色固體，得到標題化合物(359 g，86%)。MS(ESI)m/z(M+H)+ 338.9,340.9。 製備7
    8-溴-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮
    在70℃下將6-溴-4-[[(2S)-2-甲氧基丙基]胺基]喹啉-3-甲酸(510 g，1.5 mol)懸浮於二甲基甲醯胺(7.65 L)中且添加三乙胺(419 mL，3 mol，2當量)。經30分鐘逐滴添加二苯基磷醯疊氮化物(390 mL，1.8 mol，1.2當量)。混合物加熱至70℃(內部溫度)維持1小時。冷卻至10℃且用水(5 L)稀釋。混合物攪拌1小時，過濾沈澱物，用水(2×1 L)及甲基第三丁基醚(2×1 L)對其進行洗滌，且隨後讓其乾燥，得到呈白色固體狀之標題化合物(445 g，88%)。MS(ESI)m/z(M+H)+ 335.9,337.9。 製備8
    8-溴-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮
    方法1
    將8-溴-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(10 g，30 mmol)及溴化四-N-丁銨(3 g，9.3 mmol)懸浮於二氯甲烷(150 mL)中。在室溫下添加2 M氫氧化鈉水溶液(75 mL，150 mmol)。添加碘甲烷(7.5 mL，120 mmol)且混合物在28℃下劇烈攪拌隔夜。進行相分離。在真空中濃縮有機物。用丙酮(50 mL)洗滌殘餘物以移除溴化四-N-丁銨。過濾混合物，得到呈固體粉末狀之標題化合物(5 g，48%)。MS(ESI)m/z(M+H)+ 350.0,352.0。 方法2
    將8-溴-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(285 g，847.7 mmol)及溴化四-N-丁銨(82 g，254 mmol)懸浮於二氯甲烷(2.85 L)中。在室溫下添加2 M氫氧化鈉水溶液(1.7 L，3.4 mol)。添加硫酸二甲酯(160.8 mL，1.7 mol)且混合物劇烈攪拌3小時。進行相分離且獲得有機層。在真空中濃縮有機層且於水中(2.4 L)歷時30分鐘製成漿料。過濾形成之固體沈澱物且用水(2×500 mL)、己烷(2×500 mL)對其進行洗滌且乾燥。獲得呈白色固體狀之標題化合物(207 g，70%)。MS(ESI)m/z(M+H)+ 350.0,352.0。 方法3
    將8-溴-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(50 g，149 mmol)及溴化四-N-丁銨(14.4 g，44.7 mmol)懸浮於二氯甲烷(500 mL)中。添加8%氫氧化鈉溶液(600 mmol)。添加碘甲烷(23.2 g，163.4 mmol)且在室溫下攪拌22小時。分離有機相且用水(250 mL)洗滌。隨後濃縮有機相且自二氯甲烷中再結晶，隨後在65℃以下乾燥，得到標題化合物(42.7 g，82%)。1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ 8.70(s,1 H),8.50(d,1 H,J=2.4 Hz),7.97(d,1 H,J=9.2 Hz),7.65(d,1 H,J=9.2,2 Hz),4.32(m,2 H),3.82(m,1 H),3.79(s,3 H),3.28(s,3 H),1.32(d,3 H,J=6.4 Hz)。 製備9
    5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-甲酸乙酯
    向雙(頻哪醇根基)二硼(35.88 g，141.3 mmol)於二甲基甲醯胺(175 mL)中之溶液中添加參(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(3.98 g，4.35 mmol)、三環己基膦(2.44 g，8.7 mmol)及乙酸鉀(42.65 g，435 mmol)。將N2鼓泡至混合物中維持15分鐘，隨後將其加熱至80℃至85℃。隨後，在80℃至85℃下緩慢添加含5-溴菸鹼酸乙酯(25.0 g，108.8 mmol)之二甲基甲醯胺(75 mL)至混合物中，且所形成之混合物在80℃至85℃下攪拌4小時至5小時。反應混合物冷卻至15℃至35℃，且隨後添加甲基第三丁基醚(250 mL)及水(250 mL)。用矽藻土過濾混合物且分離有機物與水層。用甲基第三丁基醚(250 mL)反萃取水層。用鹽水(150 ml)及水(150 ml)洗滌合併之有機層。在真空下濃縮有機物，用甲基第三丁基醚/庚烷(1：6)再結晶粗產物，且隨後使其在55℃以下乾燥，得到呈灰色固體狀之標題化合物(18.67 g，62%)。1H NMR(丙酮-d6,400 MHz)δ 1.40-1.43(m,15H),4.44(q,J=7.1Hz,2H),8.57(t,J=1.9Hz,1H),9.02(d,J=1.5Hz,1H),9.225(d,J=2.3Hz,1H)。 製備10
    5-[1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-2-側氧基-咪唑并[4,5-c]喹啉-8-基]吡啶-3-甲酸乙酯
    在N2下向含有8-溴-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-咪唑并[4,5-c]-2-酮(35 g，100 mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-甲酸乙酯(29.1 g，105 mmol)、乙基乙酸鈉(28.7 g，350 mmol)、二氯化1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵-鈀(II)二氯甲烷(0.817 g，1.0 mmol)之三頸燒瓶中添加1,4-二噁烷(200 mL)及水(200 mL)。隨後反應混合物加熱至85℃且繼續攪拌10小時。使反應混合物冷卻至室溫。用Kieselguhr®二氧化矽-硫醇過濾混合物以移除催化劑。逐滴添加水(400 mL)且固體沈澱。過濾混合物且用水(400 mL)洗滌固體。在室溫下在乙酸乙酯(70 mL)中攪拌固體1小時；過濾，用乙酸乙酯(70 mL)洗滌，且在真空下在65℃以下乾燥，得到標題化合物(33.6 g，80%)。1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ 9.25(d,1 H,J=2 Hz),9.15(d,1 H,J=2.4 Hz),8.75(s,1 H),8.73(d,1 H,J=1.6 Hz),8.65(t,1 H),8.24(d,1 H,J=8.8 Hz),7.89(dt,1 H,J=8.8,1.6 Hz),4.47(q,2 H),4.38(m,2 H),3.90(m,1 H),3.64(s,3 H),3.26(s,3 H),1.45(t,3 H),1.37(d,3 H,J=6 Hz)。 實例1
    8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮
    方法1
    在密封管中將8-溴-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(0.600 g，1.7 mmol)及2-[5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-3-吡啶基]丙-2-醇(0.9 g，3.43毫莫耳)溶解於四氫呋喃(75 mL)及水(7.5 mL)中。用氮氣沖洗混合物。添加氟化鉀(400 mg，6.89毫莫耳)、參(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(200 mg，0.22毫莫耳)及四氟硼酸三第三丁基鏻(200 mg，0.68毫莫耳)。將反應物密封於氮氣中且在65℃至70℃加熱隔夜。混合物冷卻至室溫，過濾以移除無機殘餘物。濃縮濾液且用二氯甲烷(120 mL)及水(30 mL)稀釋。分離有機層且使其經硫酸鎂粉末乾燥。其在真空下中濃縮成棕色油狀物。殘餘物藉由矽膠管柱層析法用含30%至65%乙酸乙酯之己烷之溶離溶劑，隨後用含0%至7%甲醇之二氯甲烷純化。濃縮含有產物之溶離份且隨後與乙醚(2×10 mL)、丙酮(10 mL)、丙酮及乙醚(各10 mL)共蒸發。乾燥固體殘餘物，得到呈橙色粉末狀之標題化合物(0.30 g，44%)。MS(ESI)m/z(M+H)+ 407.0。 方法2
    在室溫下使氮氣穿過2-(5-溴-3-吡啶基)丙-2-醇(100 g，464 mmol，1.25當量)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)-1,3,2-二氧硼(141.4 g，557 mmol，1.5當量)及乙酸鉀(127.5 g，1.3 mol)於1,4-二噁烷(2.6 L)中之懸浮液沖洗30分鐘。在氮氣下添加二氯-((雙-二苯基膦基)二茂鐵基)-鈀(II)二氯甲烷加合物(9 g，11.14 mmol)且混合物加熱至90℃。攪拌混合物3小時。使反應混合物冷卻至80℃，且隨後添加8-溴-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(130 g，371 mmol)，碳酸鈉(118 g，1.1 mol)於水(910 mL)中之溶液，及二氯-((雙-二苯基膦基)二茂鐵基)-鈀(II)二氯甲烷加合物(9 g，11.14 mmol)。混合物在相同溫度攪拌1.5小時。使相分離以獲得有機層，且使其冷卻至40℃，隨後在真空中濃縮。殘餘物(350 g)藉由矽膠管柱層析法用1：1：1至1：1：20之二氯甲烷/乙酸乙酯/甲醇的溶離溶劑混合物梯度純化。獲得含有產物之溶離份。濃縮且在40℃下將殘餘物於乙酸乙酯(10 L/kg)中歷時15分鐘製成漿液，過濾且用乙酸乙酯(2×1 L/kg)及甲基第三丁基醚(2×2 L/kg)洗滌固體。使洗滌之固體溶解於甲醇(10 L/kg)中，用SiliaBond®硫醇(0.4 g/g)處理以移除殘餘金屬。懸浮液在23℃下攪拌4小時且過濾。以甲醇(1 L/kg)洗滌固體。合併全部濾液且甲醇洗滌且在真空中濃縮。使固體保留於溶劑(約100 mL)中。物質自溶劑中結晶。過濾固體物質且在1毫巴/40℃下乾燥隔夜，得到呈白色固體狀之標題化合物(77 g，51%)。MS(ESI)m/z(M+H)+ 407.1。1H NMR(500.23 MHz,DMSO)：9.05(s,1H),8.95(d,J=2.2 Hz,1H),8.79(d,J=2.0 Hz,1H),8.69(d,J=1.5 Hz,1H),8.33(t,J=2.1 Hz,1H),8.18(d,J=8.8 Hz,1H),8.12(dd,J=1.7,8.8 Hz,1H),5.41(s,1H),4.56(dd,J=8.3,15.2 Hz,1H),4.37(dd,J=4.2,15.2 Hz,1H),3.85-3.80(m,1H),3.57(s,3H),3.12(s,3H),1.56(d,J=1.2 Hz,6H),1.26(d,J=6.1 Hz,3H)。 方法3
    在N2保護下在低於0℃之溫度下向5-[1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-2-側氧基-咪唑并[4,5-c]喹啉-8-基]吡啶-3-甲酸乙酯(32.0 g，76.1 mmol)於四氫呋喃(320 mL)中之溶液中緩慢添加MeMgBr(1.4 M於四氫呋喃/甲苯中，221.4 g，6.92×)溶液。混合物在N2保護下在-5℃至0℃下攪拌1小時。緩慢添加NH4Cl溶液(15%，320 mL)以淬滅反應，同時溫度維持低於25℃。隨後添加乙酸乙酯(320 mL)。使混合物升溫至25℃至30℃且攪拌半小時。分離兩個層後，用四氫呋喃(160 mL)反萃取水層。用鹽水(192 mL)洗滌合併之有機物。向有機層中添加活性炭(1.6 g)且在65℃至75℃下攪拌4小時至5小時。用Kieselguhr®二氧化矽-硫醇(1.6 g)過濾混合物。有機層在65℃至75℃下攪拌2小時至3小時；隨後利用Kieselguhr®二氧化矽-硫醇過濾混合物。在真空下移除有機層，且用乙酸乙酯/四氫呋喃再結晶，得到呈淡黃色固體狀之8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(22.34 g，72.2%)。
    向三頸燒瓶中添加如上在此方法3中製備之8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(50.0 g，123 mmol)及四氫呋喃(1500 mL)。攪拌混合物且將其加熱至45℃至55℃，形成絕對溶液。過濾且在真空下在低於45℃下將濾液濃縮至2.0 V至3.0 V且添加乙酸乙酯(500 mL)，隨後在真空下在低於45℃下濃縮至7 V至8 V。漿液在70℃至80℃下攪拌6小時至10小時，隨後冷卻至20℃至25℃且過濾。向殘餘物中添加乙酸乙酯(135 g至140 g)及乙醇(13.5 g至14.0 g)。漿液在70℃至80℃下攪拌6小時至10小時；隨後冷卻至20℃至25℃且過濾。在真空下濃縮，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物(37.9 g，75.8%)。1H NMR(CDCl3,400 MHz)δ 8.86(d,1 H,J=2 Hz),8.76(d,1 H,J=2.4 Hz),8.71(s,1 H),8.64(d,1 H,J=1.6 Hz),8.21(t,2 H),7.85(d,1 H,J=6.8 Hz),4.36(q,2 H),3.88(m,1 H),3.62(s,3 H),3.23(s,3 H),2.79(s,1 H),1.95(s,1 H),1.71(d,6 H,J=0.8 Hz),1.33(d,3 H,J=6.4 Hz)。 實例2
    8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮，形式I方法1
    將不純的游離鹼(實例1)在乙酸乙酯中製成漿液，同時白色固體開始自淡褐色溶液中沈澱。在放置於通風櫥內之手套箱中過濾固體，且使其在真空中於手套箱內乾燥隔夜。產物在真空下留置隔夜(11 g，63.18%產率)。
    利用配備有CuKa源(λ=1.54060Å)及Vantec偵測器於35 kV及50 mA下操作之Bruker D4 Endeavor X射線粉末繞射儀獲得結晶固體之X射線粉末繞射(XRD)圖案。樣品在4°與40° 2θ之間掃描，其中步長為0.0087° 2θ且掃描速率為0.5秒/步，且具有0.6 mm發散狹縫、5.28 mm固定抗散射狹縫及9.5 mm偵測器狹縫。將乾粉裝填於石英樣品固持器上且使用玻璃載玻片獲得光滑表面。在晶體學技術中已熟知任何指定晶形之角峰位置可能稍微不同。舉例而言，峰位置可因分析樣品時之溫度或濕度的變化、樣品移位或存在或不存在內標而偏移。在本發明情況下，在不防礙指定晶形之明確鑑別之情況下，2θ±0.2的峰位置變化性將考慮此等可能的變化。可基於識別峰(單位為°2θ)(通常為更顯著的峰)之任何獨特組合來確認晶形。基於8.85°2θ及26.77°2θ處之NIST 675標準峰來調節在環境溫度及相對濕度下收集的晶形繞射圖案。
    因此，所製備之化合物樣品之特徵在於使用CuKa輻射時XRD圖案具有如以下表1中所述的繞射峰(2θ值)。特定言之，圖案含有在8.57以及9.06、15.93、18.29及18.87中一或多者處出現之特徵峰，其中繞射角之容許度為0.2°。
    方法2
    將合理量之實例1的游離鹼溶解於乙醇或四氫呋喃中以製得溶液。蒸發溶液以得到標題化合物。
    因此，所製備之標題化合物樣品之特徵在於使用CuKa輻射時XRD圖案具有如以下表1中所述的繞射峰(2θ值)。特定言之，圖案含有在8.60以及選自由9.08、15.93、18.25及18.83組成之群的峰中一或多者處出現之特徵峰，其中繞射角之容許度為0.2°。
    實例3
    8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮單水合物
    實例3可藉由將甲醇化物形式之游離鹼(甲醇化物為自游離鹼之甲醇溶液獲得的晶形)連同無水形式之游離鹼(參見實例2)的混合物在合理量之水中歷時24小時製成漿液來製備。或者，將無水形式之游離鹼(參見實例2)懸浮於丙酮/水(比率95：5，aw=0.57)之溶液中，且以單水合物形式進行接種將使無水形式I在24小時內完全轉化為所需單水合物。
    獲得實例3之X射線粉末繞射(XRD)的條件基本上與實例2中所述之條件相同。
    因此，所製備之標題化合物樣品之特徵在於使用CuKa輻射時XRD圖案具有如以下表3中所述的繞射峰(2θ值)。特定言之，圖案含有13.57處之峰以及選自由6.75、9.71、16.35、16.98及19.54組成之群的峰中之一或多者，其中繞射角之容許度為0.2°。
    實例4
    8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮蘋果酸鹽

    實例4可藉由將游離鹼(53.5 mg)懸浮於丙酮(2 mL)中且隨後併入L-蘋果酸(22 mg)來製備。將固體溶解成澄清溶液。白色結晶固體自溶液中沈澱。真空過濾且風乾固體。在真空烘箱(65℃)中將蘋果酸鹽乾燥隔夜，得到標題化合物。
    獲得實例4之X射線粉末繞射(XRD)的條件基本上與實例2中所述之條件相同。
    因此，所製備之標題化合物樣品之特徵在於使用CuKa輻射時XRD圖案具有如以下表4中所述的繞射峰(2θ值)。特定言之，圖案含有5.39處之峰以及選自由10.33、12.16、15.57及20.08組成之群的峰中之一或多者，其中繞射角之容許度為0.2°。
    實例5
    8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮反丁烯二酸鹽
    實例5可藉由向1-丁醇(0.5 mL)中添加游離鹼8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮(60.2 mg)且隨後添加21.9 mg反丁烯二酸來製備。添加庚烷(5×0.5 mL)，此產生濃稠白色漿液，且在90℃/500 rpm下攪拌。真空過濾且在氮氣下乾燥。在自過濾回收期間損失固體，不過足以進行XRD。其他結晶反丁烯二酸鹽藉由向1-丁醇(0.5 mL)中添加游離鹼(101.0 mg)且隨後添加34 mg反丁烯二酸來製備。添加庚烷(6×0.5 mL)及來自第一次製備之反丁烯二酸鹽之晶種，且混合物在90℃/500 rpm下攪拌1小時。藉由真空過濾回收固體且在氮氣下乾燥固體。在真空烘箱(65℃)中將固體進一步乾燥隔夜，得到標題化合物。
    獲得實例5之X射線粉末繞射(XRD)的條件基本上與實例2中所述之條件相同。
    因此，所製備之標題化合物樣品之特徵在於使用CuKa輻射時XRD圖案具有如以下表5中所述的繞射峰(2θ值)。特定言之，圖案含有5.10處之峰以及選自由8.55、15.45、15.78及22.50組成之群的峰中之一或多者，其中繞射角之容許度為0.2°。
    mTOR(FRAP1)活體外酶分析
    使用mTOR LanthaScreenTM激酶分析(Invitrogen)來測定化合物針對mTOR激酶之IC50值。此為使用經長壽命鋱標記之抗體作為供體物質及經綠色螢光蛋白(GFP)標記之4E-BP1作為接受體物質的時差式螢光共振能量轉移(TR-FRET)分析格式。使用TR-FRET比率來監測mTOR活性，其中蛋白質磷酸化的增加引起TR-FRET比率增加。在淺的黑色384孔淺孔微孔盤(Proxiplate)中使用12.5微升反應體積進行激酶反應。添加以下試劑來獲得最終反應條件：50毫莫耳濃度N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙烷磺酸(HEPES)(pH 7.5)、1毫莫耳濃度乙二醇-雙(β-胺基乙醚)-N,N,N',N'-四乙酸(EGTA)、0.01% Tween 20、10 mM氯化錳、2 mM DL-二硫蘇糖醇(DTT)、0.4微莫耳濃度GFP-4E-BP1(mTOR之生理性受質，4E-BP1表現及純化為與綠色螢光蛋白之融合體，Invitrogen)、70 ng/ml mTOR(重組人類mTOR，殘基1360-2549，經麩胱甘肽-S-轉移酶(GST)標記，在昆蟲細胞中表現，Invitrogen)、4%二甲亞碸及化合物之連續稀釋液(自20,000 nM至1 nM以1：3稀釋)。向化合物中添加酶及受質，且隨後添加三磷酸腺苷(ATP)至10 μM以起始反應。在室溫下培育60分鐘，且隨後添加12.5 μL含有4 nM經鋱標記之抗磷酸-蘇胺酸-46 4E-BP1抗體及20 mM乙二胺四乙酸(EDTA)、0.67 mM參(羥甲基)乙胺鹽酸鹽(Trizma®)(pH 7.5)、0.02%疊氮化鈉及0.01%壬基苯基聚乙二醇(Nonidet® P40)的抗體稀釋緩衝液。在室溫下培育60分鐘，且用340 nm波長激發濾光片及495 nm及520 nm波長之發射濾光片在EnVision盤讀取器中讀取。使用以520 nm濾光片(GFP所特有)量測之信號除以用495濾光片(鋱所特有)量測之信號來計算TR-FRET比率。使用由反應資料相對於盤上對照組(分析資料點相對於無ATP之盤上對照組的TR-FRET比率)計算之抑制百分比資料來得出各化合物的IC50值。使用ACTIVITYBASE 4.0將抑制百分比及10點化合物濃度資料擬合成四參數邏輯方程式。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有0.165 μM(±0.0925，n=5)的絕對IC50值。此等結果表明本發明範疇內之化合物為mTOR的有效抑制劑。 磷酸肌醇3-激酶α(PI3Ka)活體外酶分析
    使用PI3Ka閃爍近接分析(PI3Ka Scintillation Proximity Assay，PI3Ka SPA)來測定化合物針對PI3Ka激酶的IC50值。此分析藉由量測磷脂醯肌醇(4,5)二磷酸(PIP2)中併入的γ-P33-ATP來評估PI3Ka在化合物抑制劑存在下的活性。在具有透明底部的96孔半面積平底白色聚苯乙烯盤中在40 μL反應體積中進行激酶反應。添加PI3Ka以起始反應。最終反應條件為43.75 mm 2,2-雙(羥甲基)-2,2',2"-氮基三乙醇(Bis-Tris)(pH 7.0)，306 mm氯化鈉(NaCl)，1.76 mM聚乙二醇辛基苯基醚(TritonTM X-100)，10 μm三磷酸腺苷(ATP)，2.9 mM氯化鎂(MgCl2)及1 μCi/孔γ-p33-三磷酸腺苷(γ-p33-ATP)，5.0 nm PI3Ka人類重組酶，0.2 mm軟脂醯基-油醯基磷脂醯絲胺酸(POPS)，0.04 mm磷脂醯肌醇(4,5)二磷酸(PIP2)，4% DMSO及化合物的連續稀釋液(自20,000 nM至1 nM以1：3稀釋)。添加PI3Ka後在室溫下培育90分鐘。添加40 μL含有2.5 mg/mL連接有新黴素之珠粒(Amersham，目錄號RPNQ0506)及21 mM乙二胺四乙酸(EDTA)之終止緩衝液來終止反應。將盤在1000轉/分(RPM)下離心30分鐘，且用針對P33校正之Wallac Microbeta Trilux計數放射性。藉由使用由使用反應資料相對於盤上對照組(活性酶對比62.5毫莫耳濃度經EDTA抑制的酶對照組)所計算之抑制百分比資料來得出實例1的IC50值。使用ACTIVITYBASE 4.0將抑制百分比及10點化合物濃度資料擬合成四參數邏輯方程式。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有0.00607 μM(±0.00338，n=2)的絕對IC50值。此等結果表明本發明範疇內之化合物為PI3Ka的有效抑制劑。 磷酸肌醇3-激酶β(PI3Kb)活體外酶分析
    使用PI3Kβ近接閃爍分析(PI3Kβ SPA)來測定化合物針對PI3Kb的IC50值。此分析藉由量測磷脂醯肌醇(4,5)二磷酸(PIP2)中併入的γ-P33-ATP來評估PI3Kβ在化合物抑制劑存在下的活性。在具有透明底部的96孔半面積平底白色聚苯乙烯盤中在40 μL反應體積中進行激酶反應。添加PI3Kβ以起始反應。最終反應條件為43.75 mm 2,2-雙(羥甲基)-2,2',2"-氮基三乙醇(Bis-Tris)(pH 7.0)，87.5 mm氯化鈉(NaCl)，1.76 mM聚乙二醇辛基苯基醚(Triton TM X-100)，40 μm三磷酸腺苷(ATP)，1.0 mM氯化鎂(MgCl2)及1 μCi/孔γ-p33-三磷酸腺苷(γ-p33-ATP)，6.0 nm PI3Kβ人類重組酶，0.2 mm軟脂醯基-油醯基磷脂醯絲胺酸(POPS)，0.04 mm磷脂醯肌醇(4,5)二磷酸(PIP2)，4% DMSO及化合物的連續稀釋液(自20,000 nM至1 nM以1：3稀釋)。添加PI3Kβ後在室溫下培育90分鐘。藉由添加40 μL含有2.5 mg/mL連接有新黴素之珠粒(Amersham，目錄號RPNQ0506)及21 mM乙二胺四乙酸(EDTA)之終止緩衝液來終止反應。將盤在1000轉/分(RPM)下離心30分鐘，且用針對P33校正之Wallac Microbeta Trilux計數放射性。藉由使用由使用反應資料相對於盤上對照組(活性酶對比62.5毫莫耳經EDTA抑制的酶對照組)所計算之抑制百分比資料來得出化合物的IC50值。使用ACTIVITYBASE 4.0將抑制百分比及10點化合物濃度資料擬合成四參數邏輯方程式。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有0.0776 μM(±0.0401，n=2)的絕對IC50值。此等結果表明本發明範疇內之化合物為PI3Kb的有效抑制劑。 磷酸肌醇3-激酶δ(PI3Kd)及磷酸肌醇3-激酶γ(PI3Kg)活體外酶分析
    使用Adapta®激酶分析進行ADP之螢光基免疫分析偵測。此為使用經銪標記之抗ADP抗體及經Alexa Fluor® 647(AF647)標記之ADP示蹤物來監測激酶ADP產生的時差式-FRET(TR-FRET)分析格式。使用TR-FRET比率來監測PI3Kδ或PI3Kγ活性，其中脂質磷酸化之增加及ADP產生相應增加引起TR-FRET降低。
    酶反應：在Corning®低容積白色384孔盤(Corning® # 3674)中使用10微升反應體積進行PI3Kd的激酶反應。添加試劑以獲得以下最終反應條件：0.47奈克至2.6奈克PI3Kδ(在昆蟲細胞中表現且自昆蟲細胞純化之重組全長人類PI3Kd，Invitrogen)及50微莫耳濃度PIP2：含PS之32.5毫莫耳濃度HEPES(pH 7.5)、50毫莫耳濃度氯化鈉、0.015% CHAPS、1.5毫莫耳濃度氯化鎂、0.5毫莫耳濃度EGTA、25微莫耳濃度ATP、1% DMSO及連續稀釋的化合物(自20,000奈莫耳濃度至1奈莫耳濃度以1：3稀釋)。向化合物中添加ATP且隨後添加受質/激酶混合物以起始反應。將盤震盪30秒且隨後在室溫下培育60分鐘。在Corning®低容積白色384孔盤(Corning® # 3674)中使用10微升反應體積進行PI3Kg的激酶反應。添加試劑以獲得以下最終反應條件：3.5奈克至26奈克PI3Kγ(在昆蟲細胞中表現且自昆蟲細胞純化之重組全長人類PI3Kg，Invitrogen)及50微莫耳濃度PIP2：含PS之32.5毫莫耳濃度HEPES(pH 7.5)、0.5毫莫耳濃度EGTA、1.5毫莫耳濃度氯化鎂、25微莫耳濃度ATP、1% DMSO及連續稀釋的化合物(自20,000奈莫耳濃度至1奈莫耳濃度以1：3稀釋)。向化合物中添加ATP且隨後添加受質/激酶混合物以起始反應。將盤震盪30秒，在1000×g下離心2分鐘且隨後在室溫下培育60分鐘。
    ADP偵測：向PI3Kδ及PI3Kγ酶反應中添加5微升偵測混合物(30 mM EDTA，30 nM Eu-抗ADP抗體及EC60濃度之ADP示蹤物供與5 mM至100 mM ATP反應，Invitrogen)。將盤震盪30秒，在1000×g下離心2分鐘且隨後在室溫下培育60分鐘。使用340 nm波長激發濾光片以及665 nm及615 nm波長之發射濾光片利用螢光盤讀取器讀取盤。使用以665 nm濾光片(AF647聚GT發射所特有)量測之信號除以用615濾光片(銪所特有)量測之信號來計算TR-FRET比率。使用TR-FRET比率藉由反向計算擬合成S形劑量-反應模型編號205(來自IDBS之XLfit)之ATP/ADP標準曲線來計算ADP濃度。使用由反應資料相對於盤上對照組(分析資料點之ADP濃度相對於無ATP之盤上對照組)計算之抑制百分比資料來得出各化合物的IC50值。使用XLfit(IDBS)將抑制百分比及10點化合物濃度資料擬合成S形劑量-反應模型205(來自IDBS之XLfit)。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現針對PI3Kd具有0.0380 μM的絕對IC50值且針對PI3Kg具有0.0238 μM的絕對IC50值。此等結果表明本發明範疇內之化合物為PI3Kd及PI3Kg的有效抑制劑。 DNA依賴性蛋白激酶(DNA-PK)活體外酶分析
    使用Z'LYTE®激酶分析格式(Invitrogen)來測定化合物針對DNA-PK的IC50值。此為基於磷酸化與非磷酸化之雙重標記肽受質(香豆素在胺基端上，螢光素在羧基端上)對蛋白水解之敏感性的螢光基偶合酶分析格式。使用螢光共振能量轉移(FRET)比率來監測DNA-PK活性，其中肽之磷酸化保護肽免受蛋白水解裂解且維持受質之FRET。在Corning®低容積NBS黑色384孔盤(Corning® #3676)中使用10微升反應體積進行激酶反應。添加試劑以獲得以下最終反應條件：50毫莫耳濃度N-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙烷磺酸(HEPES)(pH 7.5)、0.01% BRIJ-35非離子性界面活性劑、10毫莫耳濃度氯化鎂、1毫莫耳濃度乙二醇-雙(β-胺基乙醚)-N,N,N',N-四乙酸(EGTA)、1 mM DL-二硫蘇糖醇(DTT)、2.5微克/毫升小牛胸腺DNA(CT DNA)、3.88奈克DNA-PK、2.5微莫耳濃度經Ser/Thr 26標記之肽(Invitrogen)、1%二甲亞碸及化合物的連續稀釋液(自20,000奈莫耳濃度至1奈莫耳濃度以1：3稀釋)。向化合物中添加酶及受質，隨後添加25.0微莫耳濃度三磷酸腺苷(ATP)以起始反應。將盤震盪30秒且隨後在室溫下培育60分鐘。添加5微升顯色試劑溶液B(Invitrogen)之1：16稀釋液，將盤震盪30秒且隨後在室溫下培育60分鐘。用400 nm波長激發濾光片及445 nm及520 nm之發射濾光片利用螢光盤讀取器讀取盤。使用以445 nm濾光片(香豆素所特有)量測之信號除以用520濾光片(螢光素所特有)量測之信號來計算TR-FRET比率。使用由反應資料相對於盤上對照組(0%抑制之DMSO對照及100%抑制的無ATP反應)計算之抑制百分比資料得出化合物的IC50值。使用XLfit(IDBS)將抑制百分比及10點化合物濃度資料擬合成S形劑量-反應模型(模型編號205)。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有0.00424 μM的絕對IC50值。此等結果表明本發明範疇內之化合物為DNA-PK的有效抑制劑。 U87MG細胞中磷酸化p70S6激酶(Thr389)、AKT(Thr308)及AKT(Ser473)的AlphaScreen SureFire偵測
    針對p-p70S6激酶(Thr389)(TGR Biosciences，TGRAS50K)、p-AKT(Thr308)(TGR Biosciences，TGRA2S50K)及p-AKT(Ser473)(TGR Biosciences，TGRAS50K)使用AlphaScreen SureFire®來測定實例1分別對內源性磷酸化p70S6激酶(Thr389)、AKT(Thr308)及AKT(Ser473)之形成的作用。此均質分析格式使用磷酸化分析物的免疫-夾心捕捉，且隨後用經抗體塗佈之Alphascreen珠粒進行偵測來產生擴增之信號。
    在由補充有10%胎牛血清(FBS，GIBCO，10091-141)、1%非必需胺基酸(GIBCO，11140-050)及1%丙酮酸鈉(GIBCO，11360-070)之DMEM(GIBCO 11965-092)組成的U87MG生長培養基中維持U87MG細胞。使用標準細胞培養程序來收集細胞，且隨後使用Vi-Cell進行計數。將100 μL含U87MG細胞之生長培養基(50,000個細胞/孔)接種至Costar #3596 96孔盤中，且在37℃、5% CO2下培育隔夜。
    在分析當天，用在含有6% DMSO之培養基中稀釋的實例1(20 μL/孔)處理細胞。在37℃下培育1小時，隨後移除培養基且向各孔中添加50 μL 1×SureFire溶解緩衝液(TGR Biosciences SureFire®套組組分)，且在輕微震盪下在室溫下培育10分鐘。將6 μL溶解產物及10 μL反應混合物(60份反應緩衝液/10份活化緩衝液/1份各供體及接受體珠粒，Perkin Elmer，6760617R)轉移至384孔淺孔微孔盤(Perkin Elmer，6006280)中用於進行p-p70S6激酶(Thr389)及p-AKT(Ser473)分析。將盤密封且在室溫下培育4小時。將4 μL溶解產物及5 μL反應混合物(40份反應緩衝液/10份活化緩衝液/1份受體珠粒)轉移至384孔淺孔微孔盤中用於進行p-AKT(Thr308)分析。在室溫下培育2小時且隨後向各孔中添加2 μL稀釋混合物(20份稀釋緩衝液/1份供體珠粒)。將盤密封且在室溫下再培育2小時。利用配備有TurboModule之Perkin Elmer EnVision使用標準AlphaScreen®設定(Ex680 nm及Em520 nm-620 nm)來讀取盤。自反應資料相對於盤上對照組計算抑制百分比資料。隨後使用ACTIVITYBASE 4.0將抑制百分比與10點化合物濃度資料擬合成四參數邏輯方程式以得出實例1的IC50值。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有如表6中所提供之絕對IC50值。此等結果表明本發明範疇內之化合物抑制U87MG細胞中PI3K及mTOR路徑中之酶。
    細胞增殖分析
    使用CellTiter-Glo發光細胞活力分析系統(可購自Promega)藉由基於所存在ATP(其表明存在代謝活性細胞)之定量測定培養物中活細胞之數目來量測實例1之抗增殖活性。
    將細胞於100 μL細胞特異性培養基(針對U87MG使用DMEM、10% FBS、25 mM 4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(HEPES)、1.0 mM丙酮酸鈉及0.1 mM非必需胺基酸(ATCC，目錄號30-2002)；針對HT1080使用伊格爾氏MEM(Eagle's MEM)、10% FBS(ATCC，目錄號30-2003)；針對H1975、A2780、SJSA-1及786-O使用RPMI 1640、10% FBS(ATCC，目錄號30-2001)；針對A204使用麥克考伊氏5A(McCoy's 5A)、10% FBS(ATCC，目錄號30 2007))以2000個細胞/孔接種於96孔盤中，例外為第1行僅使用培養基作為空白對照組。將盤在37℃及5% CO2下培育隔夜。次日，在DMSO中以1 mM製備化合物儲備液且在96孔圓底聚丙烯盤中於DMSO中連續稀釋。化合物以10個濃度一式兩份進行分析，每盤4種化合物。
    將4 μL DMSO連續稀釋液轉移至96孔盤中且添加196 μL培養基以產生用於給藥的10×儲備液。將11 μL各給藥儲備液輕緩轉移至細胞盤的相應孔中，產生0.2% DMSO濃度及111 μL最終體積。向對照行(第12行)及背景行(第1行)中添加11 μL培養基。細胞與化合物一起在37℃、5% CO2下培育72小時或96小時(針對H1975、786-O、HT1080、A2780、A204及SJSA-1使用72小時且針對U87MG使用96小時)。
    製備CellTiter-Glo試劑(Promega，目錄：G7571)且在完成培育之後向各孔中添加100 L，藉由在軌道震盪器上混合2分鐘使細胞均質化，且隨後在室溫下培育10分鐘以使發光信號穩定。用Wallac Victor V盤讀取器記錄發光原始資料。使用抑制百分比資料計算實例1的IC50值。針對各劑量反應擬合四參數邏輯曲線。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有如表7中所提供之絕對IC50值。此等結果表明本發明範疇內之化合物適用於抑制U87MG、H1975、786-O、A2780、HT-1080、A204及SJSA-1細胞株的增殖。
    使用Oncotest(Freiburg,Germany之GmbH)收集在免疫缺乏裸小鼠中皮下生長的人類腫瘤異種移植物以量測實例1對多種腫瘤類型的反應。直接移植自患者且在裸小鼠中繼代之異種移植物保留親本患者腫瘤之大部分特徵，包括組織學及對抗癌藥物之敏感性，其在較高程度上重演供體患者對標準抗癌藥物的反應。直接自於裸小鼠中生長之人類腫瘤異種移植物製備腫瘤細胞。量測對軟瓊脂中腫瘤細胞之錨定獨立性群落形成的抑制。
    在表10中所示之患者來源之人類腫瘤異種移植物模型中測試實例1，該等模型包含13種不同人類腫瘤組織型(亦即膀胱癌、結腸癌、胃癌、頭部及頸部癌症、非小細胞肺癌(腺癌、鱗狀細胞癌及大細胞癌)、乳癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌及腎癌以及黑色素瘤、胸膜間皮瘤及肉瘤)的2至10種模型，其中md為中等分化，pd為不良分化，ud為未分化且wd為充分分化。 自人類腫瘤異種移植物製備單細胞懸浮液
    以連續繼代形式在胸腺發育不良裸小鼠(NMRI nu/nu品系)中皮下生長實體人類腫瘤異種移植物，且在無菌條件下移出腫瘤，以機械方式分解且隨後在RPMI 1640培養基中與由IV型膠原酶(41 U/mL)、DNase I(125 U/mL)、透明質酸酶(100 U/mL)及分散酶II(1.0 U/mL)組成之酶混合液一起在37℃下培育45分鐘。使細胞穿過200 μm及50 μm篩孔尺寸的篩，且用無菌PBS緩衝液洗滌兩次。在Neubauer血細胞計中使用錐蟲藍排除(trypan blue exclusion)來測定活細胞百分比。 利用來自人類異種移植物之細胞的細胞群落分析程序
    根據修改之兩層軟瓊脂分析(Hamburger等人，Science 197：461-643,1997)在24孔格式中進行細胞群落分析。底層由0.2毫升/孔IMDM(補充有20%(v/v)胎牛血清、0.01%(w/v)慶大黴素(gentamicin))及0.75%(w/v)瓊脂組成。將0.8×104個至5×104個細胞添加至0.2 mL補充有0.4%(w/v)瓊脂之相同培養基中，且塗鋪於24孔盤中之底層上。藉由在0.2 mL培養基中連續暴露(藥物上覆層)來施用測試化合物。在接種24小時後以3倍濃縮溶液形式添加藥物上覆層。各盤中包括6個未經處理之對照孔及一式三份經6個濃度藥物處理之組。在37℃及7.5% CO2下在濕潤氛圍中將培養物培育至多20天且使用倒置顯微鏡嚴密監視群落生長。在此期間，活體外腫瘤生長導致形成直徑大於50 μm之群落。在最大群落形成時，用自動影像分析系統(OMNICON 3600，Biosys GmbH)計數群落。將活群落染色24小時，隨後用氯化2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基四唑(1 mg/ml，100微升/孔)之無菌水溶液進行評估。
    依據群落形成之百分比來表示藥物效果。將經處理孔中群落之平均數目與未經處理對照之平均群落計數比較(以測試組對比對照組值，T/C值[%]來表示相對群落計數)：
    繪製化合物濃度對比相對群落計數，且利用兩點曲線擬合分別確定絕對IC50及IC70值，或抑制群落形成50%(T/C=50%)及70%(T/C=30%)所必需的藥物濃度。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有如表8中所提供之絕對IC50值。此等結果表明本發明範疇內之化合物適用於抑制此等患者來源之細胞株的增殖。
    E545Kp110a白血病模型
    白血病細胞株建立：用在病毒5'LTR(長末端重複序列)控制下表現臨床上分離之人類p110α活化突變(胺基酸變化為E545K，核苷酸層面上為G1633A)且在PGK啟動子(MSCV6 FLAG-p110α G1633A PGK/GFP)控制下表現GFP(綠色螢光蛋白)的反轉錄病毒轉導來源於轉殖基因胚胎的胚胎肝細胞B6.Cg-Tg[IghMyc]22Bri/J(Jackson Laboratory,Bar Harbor,ME)，建立目標驅動的白血病細胞。將轉導之細胞轉移至經致死性輻射照射的宿主動物中。轉導之細胞使接受者骨髓中之造血幹細胞的群體恢復且因除去接受者之原始骨髓而援救接受動物免於輻射引起的死亡。經由每週監測眶後收集之少量血液(10 μL)中的白血球計數來觀察所援救初級動物的白血病發展。自證實有白血病之初級經輻照動物收集血液且連續繼代至二級(非輻照)宿主動物以便建立為白血病細胞株。
    實驗動物：使用8至10週齡且體重為20 g至22 g之雌性C57BL/6小鼠(Taconic,Cambridge City,IN)作為白血病接受動物。使動物在接種之前適應正常低脂飲食(4.5%)且在研究期間繼續任意取用該飲食。藉由耳朵穿孔來鑑別各組中之個別小鼠。用來自供體動物的白血病細胞接種動物(第0天)。
    同源白血病模型：自先前接種所關注白血病細胞株之供體動物之眶後收集少量血液(10 μL)且藉由白血球計數測量白血病細胞負荷。自具有足夠白血病負荷之動物收集供體血液，用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)稀釋至每200微升500,000個白血球，且在第0天每隻動物眶後注射200 μL以引發白血病。將接種p110α(E545K)/myc細胞之小鼠分配成五隻一組之數組用於以實例1處理，及十隻一組用於媒劑處理之對照組。在接種後第5天至第11天，各組每天經口管飼僅給予媒劑；每天1次(QD)給予每公斤體重實例1之5 mg、10 mg、20 mg測試物品((mg/kg)。在第12天自動物之眶後收集至少10 μL血液以在白血病細胞分析中評估白血病進展。
    白血病細胞分析：自各研究動物收集十(10)μL全血且在Coulter TQ-Prep上處理使得紅血球溶解，且固定剩餘有核白血球用於分析。即刻分析經固定之細胞，或將其儲存在黑暗中在4℃下用於將來分析。以Cytomics FC 500(Beckman Coulter)之螢光抗體細胞揀選(FACS)分析對細胞進行分析。計數各樣品中前向散射/側向散射((FS/SS)圖之特定區域內(定義為在正常動物中顯示極少/無白血病細胞但在白血病對照動物中顯示顯著白血病細胞的區域)的白血病細胞。每樣品藉由使用Beckman Coulter Flow-Count螢光球體之固定截止值來將此等資料標準化為每單位血液體積之白血病細胞(最初向各起始血液樣品中添加等量螢光球體，其中每樣品之相等計數等於每樣品之相等體積計數)。
    測試物品：基於每週一次，將實例1與1%羥乙基纖維素(HEC)/0.25%聚山梨醇酯80/0.05%消泡劑/純水混合且用探針式音波處理器音波處理至懸浮。將所調配之測試物品冷藏於4℃且於黑暗中儲存至使用時(在各投藥之前再懸浮)。
    統計分析：用Beckman Coulter之CXP軟體將流式細胞量測術資料列表。使用媒劑組作為對照組用Dunnett方法、單因子ANOVA來確定實例1作用的統計顯著性(JMP Statistical Discovery Software，SAS Institute)。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有如表9中所提供之TGI%值。此等結果表明本發明範疇內之化合物抑制生長由突變型E545K PI3Ka(發現於許多人類癌症中之熱點突變之一)之腫瘤的生長。
    TGI%為相對於對照未經處理組的腫瘤生長抑制百分比
    TGI% SEM為TGI%平均值標準誤差 異種移植物腫瘤模型
    在培養物中擴增人類神經膠母細胞瘤細胞U87MG及人類腎癌細胞786-O，收集且皮下注射至無胸腺裸小鼠之後脅。在培養物中擴增人類非小細胞肺癌細胞NCI-H1975，收集且皮下注射至CD-1 nu/nu小鼠之後脅。在適當媒劑中製備測試化合物且當腫瘤形成時(植入後7天至21天)藉由經口管飼投與。藉由在處理過程中每週兩次進行的腫瘤體積量測確定腫瘤反應。體重視為毒性的一般性量測值。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有如表10中所提供之TGI%值。此等結果表明本發明範疇內之化合物適用於顯示U87MG、786-O及NCI-H1975模型中之劑量依賴性抗腫瘤活性。
    %TGI為相對於對照未經處理組的腫瘤生長抑制百分比，
    TGI% SEM為TGI%平均值標準誤差，且加下劃線的值指示顯著性。 PI3Ka及mTOR活體內目標抑制之測定
    將U87MG人類神經膠母細胞瘤細胞(5×106個)於0.2 mL基質膠中皮下植入無胸腺裸小鼠之側腹中。植入後10天，依照時程、單次給藥/單個時間點或劑量反應方案對小鼠經口給藥，以便測定TMED50(臨限最低有效劑量)。腫瘤在收集時急驟冷凍且收集血液用於測定母體化合物血漿暴露量及在劑量反應研究之情況下計算TMEC50(臨限最低有效濃度)。使用無RNase糰粒研磨器(RNase Free Pellet Pestle)(Kimble-Kontes)將腫瘤在500 μL XY溶解緩衝液(10 μg/ml抗纖維蛋白溶酶肽(Leupeptin)、10 μg/ml胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶抑制劑、10 μg/ml甲苯磺醯基苯基-丙胺醯基氯甲基酮、10 μg/ml抑肽酶(Aprotinin)、60 mM β-磷酸甘油、1% Triton X100、25 mM Tris(pH 7.5)、2.5 mM焦磷酸酯、150 mM NaCl、2 mM對甲苯磺醯基-L-精胺酸甲酯、15 mM磷酸對硝基苯酯、5 mM苯甲脒、1 mM釩酸鈉、10 mM氟化鈉、50 μg/ml苯基-甲烷磺醯氟、1 mM 1,4-二硫蘇糖醇(DTT)、15 mM EDTA(pH 8.0)、5 mM EGTA(pH 8.0)、1 μM微囊藻素(Microcystin)、1 μM岡田井酸(Okadaic Acid)及每10 mL 1片Roche完全蛋白酶抑制劑小型錠劑)中均質化。等分溶解產物且即刻分析或儲存在-80℃下用於隨後測試。使用Meso Scale Discovery(Gaithersburg,MD)ELISA技術之多工格式且量測PI3K及mTOR之活體內目標抑制以評估對AKT之蘇胺酸308位點(PI3K的下游效應物)的磷酸化、p70 S6K之蘇胺酸389位點及S6RP的絲胺酸240/244位點(mTORC1的下游效應物)的磷酸化、AKT之絲胺酸473位點(mTORC2的下游效應物)的磷酸化的影響。向含有以適當捕捉抗體預點漬之96孔盤的碳電極添加20 μg溶解產物。使用經釕標記之偵測抗體探測所關注之蛋白質。在含有共反應物TPA之讀取緩衝液存在下使電流穿過電極，且用MSD Sector 6000儀器定量及記錄由電化學發光所產生之光。計算相對於媒劑對照組之抑制百分比且使用JMP套裝軟體進行ANOVA分析以便確定統計顯著性。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有如表11中所提供之活性，其中加下劃線的值指示顯著性。此等結果表明本發明範疇內之化合物顯示活體內抑制PI3K及mTOR的能力。
    溶解性測定
    藉由稱量約1 mg化合物添加至小瓶中且將所需體積(亦即0.5 mL)之相應介質添加至各小瓶中來製備實例2於各所需介質中的2 mg/mL溶液。在環境條件下將加蓋小瓶在旋轉混合物上放置隔夜(約16小時)，隨後使用0.22 μm Ultrafree-MC過濾器(MilliporeTM)進行過濾且量測濾液之pH值(Orion 720A pH計)。藉由將100 μL濾液轉移至HPLC小瓶中且添加900 μL 50%乙腈/水溶液來製備用於HPLC分析之樣品。使用HPLC方法測定溶解性(HPLC移動相為含0.1% TFA之15%乙腈及含0.1% TFA之85%水；管柱：Bonus RP，4.6×75 mm，3.5 cm；偵測器：264 nm UV；管柱溫度=40℃；流動速率：1.5 mL/min；注射體積=1 μL)。

    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例2之化合物且發現具有如表12中所提供之溶解性結果。此等結果表明實例2在胃腸道(GIT)之生理pH值範圍內顯示合意溶解性。此物理化學性質將有助於避免將很可能正進行多種藥物療法(諸如質子泵抑制劑(PPI)，其可能引起與在GIT之生理pH值範圍內內具有可變溶解性之藥物的藥物-藥物相互作用)之腫瘤患者的暴露量變化性。此係因為胃之pH值變化(亦即患者服用或未服用PPI或食品之效應)可能引起因溶解性差異而導致的暴露量變化性。在腫瘤學中避免可能的藥物-藥物相互作用尤其重要，其原因在於癌症患者通常同時接受許多藥物，許多抗癌藥物之治療窗狹窄且患者中之個體間及個體內變化性較大。具有合意溶解性的化合物亦避免對複雜及昂貴調配物的需要，該等調配物可用來增加因較低溶解性所致功效所需之全身性暴露或減少因食品效應及PPI導致之暴露量變化性。 在犬中之藥物動力學性質
    通常使用米格魯犬(Beagle dog)來測定醫藥產品的活體內暴露量及藥物動力學參數。雖然犬類的胃腸生理學在一些態樣中與人類不同，但其適用於預測藥物吸收及鑑定非線性藥物動力學的潛在問題。
    為測定實例1在犬中之藥物動力學參數，經由經口管飼於含1%羥乙基纖維素、0.25%聚山梨醇酯80、0.05%消泡劑之純水懸浮液(「HEC懸浮液」)中對雄性及雌性犬(每劑量至多4隻動物，獨立研究)給予實例1。所投與劑量之範圍在HEC懸浮液中1 mg/kg與12 mg/kg之間。
    在給藥後0小時(給藥前)、0.5小時、1小時、2小時、4小時、8小時及24小時自各犬收集血液樣品至含有乙二胺四乙酸鉀之管中。一些研究亦包括在0.25小時及12小時時間點收集的樣品。將此等樣品離心以獲得血漿，隨後冷凍，隨後進行分析。樣品進行蛋白質沈澱，且使用PE-Sciex API4000質譜儀藉由液相層析法/串聯質譜法分析萃取物中實例1之存在。標準曲線在1 ng/ml至5000 ng/ml範圍內。高於定量上限之血漿濃度藉由稀釋進行測定。將實例1之實測濃度儲存於Watson v.7.4(一種用於儲存及管理電子資料之經驗證實驗室資訊管理系統)中，且使用WATSON軟體藉由非隔室分析來計算藥物動力學參數。
    在實質上如上操作之此分析中測試本發明範疇內的化合物。舉例而言，測試實例1之化合物且發現具有如表13中所提供之平均AUC。如下表中所示，實例1之曲線下面積(AUC)值在1 mg/kg至12 mg/kg範圍內隨劑量線性增加。個別AUC值之線性回歸分析產生0.86之確定R2的相關性及y=1474.3x+44.311的線性方程。各劑量之平均AUC值的線性回歸分析產生0.96之確定R2的相關性及y=1544.7x-735.34的線性方程。此等結果表明本發明範疇內之化合物在犬中在藥理學相關劑量範圍內具有線性藥物動力學性質，且無吸收飽和之跡象。此為有利於藥物開發及臨床投藥的性質，允許全身暴露量在經口投藥下獲得可預測的增加。
    权利要求:
    Claims (10)
    [1] 一種化合物，其為8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮或其醫藥學上可接受之鹽。
    [2] 如請求項1之化合物，其為8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮。
    [3] 如請求項2之化合物，其為呈結晶形式之8-[5-(1-羥基-1-甲基乙基)吡啶-3-基]-1-[(2S)-2-甲氧基丙基]-3-甲基-1,3-二氫-2H-咪唑并[4,5-c]喹啉-2-酮，其中X射線粉末繞射圖案具有特徵峰在2θ±0.2出現於8.57以及於9.06、15.93、18.29及18.87中之一或多者。
    [4] 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至3中任一項之化合物或鹽及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
    [5] 如請求項4之醫藥組合物，其另外包含一或多種治療成分。
    [6] 一種如請求項1至3中任一項之化合物或鹽的用途，其係用於製造用於治療癌症之藥物。
    [7] 如請求項6之用途，其中該癌症係選自由以下組成之群：膀胱癌、結腸癌、胃癌(gastric cancer)、頭及頸癌、NSCLC、乳癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、神經膠母細胞瘤、肺癌、腎癌、肉瘤、造血及淋巴組織癌、CNS癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、肝癌、皮膚癌、胃癌(stomach cancer)、甲狀腺癌、上呼吸消化道癌及泌尿系統癌。
    [8] 如請求項1至3中任一項之化合物或鹽，其係用於療法。
    [9] 如請求項1至3中任一項之化合物或鹽，其用於治療癌症。
    [10] 如請求項9之化合物或鹽，其中該癌症係選自由以下組成之群：膀胱癌、結腸癌、胃癌(gastric cancer)、頭及頸癌、NSCLC、乳癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、神經膠母細胞瘤、肺癌、腎癌、肉瘤、造血及淋巴組織癌、CNS癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、肝癌、皮膚癌、胃癌(stomach cancer)、甲狀腺癌、上呼吸消化道癌及泌尿系統癌。
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    法律状态:
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    优先权:
    申请号 | 申请日 | 专利标题
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