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    • 专利摘要:
    揭示一種用於治療患有前列腺癌之人類主體之方法。該方法包含投與一抗前列腺癌有效量之從新鮮柑橘類果皮在清酒中之萃取物獲得之組成物。
    公开号:TW201306857A
    申请号:TW101103050
    申请日:2012-01-31
    公开日:2013-02-16
    发明作者:Yutaka Miyauchi
    申请人:Yutaka Miyauchi；
    IPC主号:A61K36-00
    专利说明:
    用於治療前列腺癌的方法
    本發明有關用於治療前列腺癌的方法。 發明背景
    已知某些存在植物中且可從該植物或果實中萃取出來之天然形成的非營養性劑，可展現出醫學治療特性。特別是，已顯示出某些從柑橘類果汁或從柳橙皮渣萃取物中分離出之類黃酮化合物，已用作為癌症之治療以及預防劑。見美國專利案第7,201,928B1號，其之全部內容在此併入本案以為參考。
    特別地，此專利揭示從來自柳橙汁工廠之冷壓柳橙皮油固體廢料獲得之柳橙皮萃取物，當在老鼠活體模型中試驗時，在結腸癌之治療上顯示出潛在功效。將此等廢皮油固體溶於溫乙醇中，然後在重覆清洗後，用作為供試驗之醫療成份。 發明概要
    吾人發現，從許多不同種類之柑橘皮以及蘆薈之米酒萃取物中製得之組成物，展現出顯著的藥效特性，且在治療以及緩和人類之前列腺癌方面具有效力。更明確而言，吾人發現在本發明之方法中使用之特定組成物，可縮小以及緩解有關人類之前列腺癌。
    本發明之方法包含治療人類之前列腺癌，包含對需要此治療或顯示出前列腺癌現象之人類，投與抗前列腺癌有效量之從新鮮柑橘皮以及蘆薈獲得之萃取物。明確地，本發明提供一種藉由投與一抗前列腺癌有效量之新鮮柑橘果皮之米酒萃取物，來抑制需要此治療之人類之前列腺癌之生長之方法。 圖式簡單說明
    第1A、B、C以及D圖係注射PC-3細胞之小鼠未經治療之照片；第2A、B、C以及D圖係在開始注射25μL之CPE後18天所拍之小鼠的照片；第3A、B、C以及D圖係在開始注射50μL之CPE後18天所拍之小鼠之照片；第4圖係顯示在23天治療後，小鼠之體重差異圖；第5圖係顯示在23天治療後，小鼠之腫瘤體積差異圖；第6A、B、C以及D圖係注射PC-3細胞之小鼠未經治療之照片；第7A、B、C以及D圖係開始口服投與100μL之CPE後17天所拍之小鼠之照片；第8A、B、C以及D圖係開始口服投與200μL之CPE後17天所拍之小鼠之照片；第9圖係顯示在21天治療後，小鼠體重之差異圖；第10A、B、C以及D圖係注射PC-3細胞之小鼠未經治療之照片；第11A、B、C以及D圖係開始注射50μL之CPE後21天所拍之小鼠之照片；第12A、B、C以及D圖係開始注射100μL之CPE後21天所拍之小鼠之照片；第13圖係顯示在21天治療後，小鼠腫瘤體積之差異圖； 發明之詳細說明
    本發明之組成物可經口服、肌肉或皮下投與。較佳的投與方法係口服。通常，人類之每日總口服劑量係從約5至120cc/天，較佳地10至60cc/天，最佳地10至30cc/天。此總劑量可一天分一或三次給予，例如，10cc/天之總劑量可分三次給予，一天二次3cc以及一次4cc。假如每天總劑量係30cc，其可分三次給予，每次10cc；或一次20cc之劑量一次10cc之劑量。此治療通常持續到病人的前列腺癌緩解，此通常由測量血液中蛋白專一性抗原(PSA)之位準或其它用於診斷前列腺癌之存在之習用醫學程序決定。熟悉此技藝之人士可使用在此所述之在動物中以及人類中之實驗結果，決定欲投與至需要前列腺癌治療之人類的有效量。“有效量”意指能抑制動物或人類活體內前列腺腫瘤之生長之濃度。例如，人類試驗劑量可從動物研究中之有效劑量外推而得，諸如ICSO值，或從根據體重或表面積外推之活體內有效量而得，如AUC或曲線下面積。此外推法係業界之慣例。根據本發明之包含新鮮柑橘果皮萃取物之組成物，可使用一或多種填料配方成供以食物補充劑之方法投與。
    保健食品組成物可配方成供任何途徑投與，包括，但不限於，吸入或吹氣(透過口或鼻)、口、頰、非口服、陰道或直腸投與。於口服投與之具體例中，組成物可直接添加至食物，然後當作正常膳食的部分消化。各種於食物中添加或併入保健食品之方法均係熟悉此技藝之人士已知的。在保健食品或膳食補充劑中，本發明之組成物使用之濃度可從1至99重量%。
    用於本發明之組成物亦可以用習用手段，以藥學上可接受之賦形劑(諸如黏結劑、填料、潤滑劑、崩散劑或濕潤劑)製成之錠劑或膠囊之形式投與。用於配製錠劑以及膠囊之特別化合物在美國藥典中有詳細的說明。
    亦可用業界眾所周知之方法包覆包含該萃取物之錠劑，以便擴大或維持藥劑之活性。
    亦可使用供口服投與之液體配方。液體配方可呈溶液、糖漿或懸浮液之形式，或在使用前用水或其它適合的載劑復原之乾品。此液體配方可經由習用手段，用藥學上可接受之添加劑，諸如助懸劑、乳化劑、非水性載劑以及防腐劑製得。再者，特別的添加劑係熟悉此技藝之人士周知者，且列在諸如美國藥典中。於一具體例中，口服配方係配方成能提供控制活性保健食品組份之釋放時間。在頰部投與方面，可將萃取物配製成錠劑或菱形藥錠。
    在吸入投與方面，用於本發明之組成物可以在加壓包裝或噴霧器中，使用適合的推進器，以氣霧噴霧形式傳送。在加壓氣霧方面，可藉由提供閥決定劑量單位，傳送一定量。
    非腸道投與之組成物係配方成可供單次或連續輸注之注射形式。供注射用之配方可配製成單一劑量型式，諸如安瓿，或多劑量單位(添加防腐劑)。供注射用之組成物可呈配製於油性或水性載體中之懸浮液、溶液或乳液之形式。其等亦可含有諸如助懸劑、安定劑和/或分散劑之配方劑。該活性成分亦可以在使用前以適合載體復原之粉末呈現。供非腸道注射用之配方劑之特定的例子可在美國藥典中找到。在直腸投與或陰道投與方面，用於本發明之組成物可配製成栓劑、乳霜、凝膠或留置灌腸劑。
    在膳食補充劑方面，萃取物添加之濃度可從5-95重量%，且根據業界慣用之方法混合。供動物用之膳食補充劑可配製成各種型式，包括，但不限於，液體、粉末或固體藥丸形式。然而，較佳的治療模式係口服投與本發明之組成物。
    本發明之組成物之製備，可經由削下新鮮柑橘類果實之果皮，將如此獲得之果皮與米酒混合，且使該混合物在足以使該柑橘類果皮中任何可溶於米酒之化合物大量萃取至該米酒中之溫度以及壓力下一段時間。較佳地，萃取步驟之溫度係在周遭或室溫下，而壓力係在大氣壓力下。在此使用之室溫意指在溫度控制的建築物裡面之溫度，而周遭溫度意指周圍環境之溫度。可改變該萃取步驟之溫度以及壓力，以符合製造者之個別需求。因此，可使用較高的溫度和/或壓力條件，以便改變萃取率。
    較佳地，該溫度可從約4℃改變至120℃，且壓力從大氣壓(1 atm或1巴)改變至100巴。
    選擇性地，水果可個別削皮，然後萃取其之果皮，之後混合其之萃取物，以及進一步以在此所述之方式處理。較佳地，所使用之米酒係日本清酒，最佳地係一級的精釀清酒。一般而言，此清酒具有酒精含量從約5-20%，較佳地約15%。
    大體上，萃取時間從約1-25天，較佳地從5-20天以及最佳地從7-8天。之後，利用過濾將剩餘的果皮與液體萃取物分開，然後使分離之萃取物熟成約1-60個月之時間，較佳地6至18個月，更佳地約12個月。熟成較佳地在室溫或周遭溫度下進行。然而，此亦可改變，如可使用更高的溫度，以便符合製造者特定的需求。之後液體可以就這樣使用，或經過濾以移除任何固體殘留物。組成物中之酒精並沒有移除，而是在有或無在此所述之方法中之過濾步驟之情況下使用。
    吾人進一步發現，雖然可以使用各種柑橘種類來製備本發明，但特佳的是使用從下列柑橘類果實而來之果皮：臍橙、八朔柑(C.hassaku hort/C.hassaku HORT)、檸檬、酸橙(C.aurantium)、宫內伊予柑(C.Miyauchi iyo Hort.)、溫州蜜柑(c.unshiu)、金桔屬(金桔/金橘)，以及溫州蜜柑(Mikan unsyu)(橘子)。
    從此等品種果實而來之果皮可個別使用，或以各種品種之混合物之形式使用。該萃取物亦可含有木立蘆薈(aloe arborescens)作為添加劑。
    更佳地，該柑橘類果皮係來自在日本生長以及收成之柑橘果實。削皮之前，用水清洗柑橘果實，然後手工去皮。
    適合使用於製備供本發明用包括適當柑橘果實之組成物之方法，述於美國專利案第5,152,990號中，其之全部內容在此併入本案以為參考。 範例 範例1
    病人是診斷為患有排尿問題以及前列腺癌之80歲老年男性。該病人拒絕切除前列腺。以本發明之柑橘果皮萃取物組成物(CCPE)經口服治療該病人一段將近一年之時間。口服劑量率為早上、中午以及睡前5cc，總劑量為15cc/天。在此期間，病人亦接受下列藥劑：LH-RH(促黄體激素釋放劑以類比注射、萘哌地爾(naftopidil)利尿劑以及一種抗雄激素的分子(bicalutamide))，從2004年6月9日至2005年6月6日。一年治療期間，約每個月測量病人的PSA。此治療以及PSA試驗之結果述於表I中。
    範例2
    病人是67歲老年男性。該病人在1994年進行主動脈-冠狀動脈旁路，2005年6月2日出現排尿問題。該病人接受下列藥物治療：卡菲蒂羅(carvedilol)；拜阿斯匹靈(Bayaspirin)；鹽酸地爾硫卓(ditiazem hydrochloride)以及鹽酸美西律(mexiletin hydrochloride)。2005年6月7日開始口服投與本發明之組成物，持續至2007年3月17日。起始口服劑量率為早上5cc，睡前5cc，總劑量10cc/天。在2005年6月6日至2007年3月17日期間測量病人的PSA。治療以及PSA試驗結果述於表II中。
    之前的臨床結果顯示出，口服投與本發明之組成物至診斷患有前列腺癌之人類病人，由在很長的一時間PSA測量值顯著的減少，證明了對癌症產生實質上的改善以及調即。 範例3
    藉由治療帶有人類癌細胞異種移植之SCID小鼠，活體內評估本發明之組成物之治療功效。明確而言，依照指導規範，使雄性裸鼠(5周大)(購自Tzu Chi University Animal Center,Hualien,ROC)維持在無病原菌之無菌分離室中，所有的食物、水、籠子以及床在使用前均經過殺菌處理。所有的程序均經過Japanese National Animal Care and Use Committee of Taiwan核准。在每一隻裸鼠之肩胛骨間，皮下注射配製在0.2mL磷酸鹽緩衝食鹽水(PBS)中之癌細胞(5x106)。移植後，使用卡尺測量腫瘤細胞之大小，依照下式估算腫瘤體積：腫瘤體積(mm3)=LxW2/2，在此L係長，而W是寬。一旦腫瘤達到平均大小為50-100mm3時，在動物上腹膜內注射50μl之PBS(對照組)或CPE(低劑量：25μl，高劑量：50μl)，每周五次，歷時23天。實驗結束時，測量每一組之平均腫瘤體積以及腫瘤/體重比，然後以平均值±SD方式呈現。
    第1A、B、C以及D圖係注射PC-3細胞之小鼠未經治療之照片。此照片是腫瘤體積大小達到約50-100mm3後18天所拍之照片。第2A、B、C以及D圖係在開始注射25μL之CPE(一周五次)後18天所拍之小鼠的照片。
    第3A、B、C以及D圖係在開始注射50μL之CPE(一周五次)後18天所拍之小鼠之照片。於此等照片中，將出現在每一隻動物上之腫瘤圈起來，方便辨識。
    從此等圖式中可以看到，用25μL之CPE治療之小鼠，顯示出PC-3異種移植腫瘤非常顯著地縮小。該等用50μL之CPE治療之小鼠，展現出腫瘤大小幾乎完全縮小。
    第4圖係顯示以上所述3組小鼠，在經CPE注射治療後23天或沒有經治療之對照組之體重差異圖(單位克)。可看見儘管腫瘤的生長，平均體重相對改變不多。
    第5圖係顯示以上所述3組小鼠，在經CPE注射治療後23天或沒有經治療之對照組之腫瘤體積差異圖(單位mm3)。如所示，在未經治療組與接受25μl注射之組間，觀察到顯著的縮小。經50μl治療之組的腫瘤尺寸縮小得更顯著(腫瘤幾乎完全不見)。 範例4
    使用與範例3中所述相同的注射法、組份以及測量程序處理三組，每組四隻之小鼠。一旦腫瘤達到平均尺寸為50-100 mm3後，令動物接受50μl之PBS(對照組)注射，或口服投與CPE，一周五次，劑量100或200μL，歷時21天實驗結束時，測量每一組之平均腫瘤體積以及腫瘤/體重比，然後以平均值±SD方式呈現。
    第6A、B、C以及D圖係注射PC-3細胞之小鼠未經治療之照片。此照片是腫瘤體積大小達到約50-100mm3後17天所拍之照片。第7A、B、C以及D圖係開始口服投與100μL之CPE(一周五次)後17天所拍之小鼠之照片。
    第8A、B、C以及D圖係開始口服投與200μL之CPE(一周五次)後17天所拍之小鼠之照片。於此等照片中，將出現在每一隻動物上之腫瘤圈起來，方便辨識。
    從此等圖式中可以看到，口服投與100μL之CPE治療之小鼠，顯示出PC-3異種移植腫瘤非常顯著地縮小。該等用200μL之CPE治療之小鼠之腫瘤尺寸縮小得更佳顯著。投與200μL之小鼠，有些腫瘤不見了。 範例5
    藉由治療帶有人類癌細胞異種移植之SCID小鼠，活體內評估CPE之治療功效。依照指導規範，使雄性裸鼠(5周大)(購自Tzu Chi University Animal Center,Hualien,ROC)維持在無病原菌之無菌分離室中，所有的食物、水、籠子以及床在使用前均經過殺菌處理。所有的程序均經過Japanese National Animal Care and Use Committee核准。
    在每一隻裸鼠之肩胛骨間，皮下注射配製在0.2mL磷酸鹽緩衝食鹽水(PBS)中之癌細胞(5x106)。移植後，使用卡尺測量腫瘤細胞之大小，依照下式估算腫瘤體積：腫瘤體積(mm3)=LxW2/2，在此L係長，而W是寬。一旦腫瘤達到平均大小為50-100mm3時，令動物接受腹膜內(Lp.)治療或口服投與CPE。在腹膜內注射CPE之治療方面，動物接受50μL之PBS(對照組)注射，或CPE(低劑量：25μL，高劑量：50μL)，一周五次，歷時23天。在口服投與CPE方面，經口給予動物200μL之無菌水(對照組)或CPE(低劑量：50μL，高劑量：100μL)。全部的治療係一周給五天，歷時21天。實驗結束時，切下腫瘤然後稱重，一部分的腫瘤用緩衝福馬林固定，剩下的部分進行西方墨點法分析。實驗結束時，測量各組之平均腫瘤體積以及腫瘤/體重比，以平均值±SD表示。
    結果
    抗癌作用(異種移植模型)
    口服投與CPE可抑制活體內腫瘤之生長：藉由治療帶有人類前列腺癌細胞株PC-3腫瘤異種移植之免疫缺失小鼠，測量活體內CPE之治療功效。動物接受口服投與50以及100μL之CPE(一用五次)，歷時21天。如第9圖所示，各組中之體重沒有顯示出顯著的差異(陽性組：20.41±2.11 g，CPE-50 μL：21.22±0.53 g，CPE-100 μL：21.34±0.90g)，在整個研究期間沒有觀察到不健康之症狀。此證明口服投與CPE沒有引起顯而易見之副作用或毒性。第10A、B、C以及D圖係注射PC-3細胞之小鼠未經治療，在腫瘤體積大小達到約50-100mm3後21天所拍之照片。第11A、B、C以及D圖係開始口服投與50μL之CPE(一周五次)後21天所拍之小鼠之照片。第12A、B、C以及D圖係開始口服投與100μL之CPE(一周五次)後21天所拍之小鼠之照片。在每一個情況下，口服投與CPE均在腫瘤尺寸達到約50-100mm3後開始。此等照片清楚地顯示出，用本發明治療之腫瘤尺寸縮小。
    第13圖係顯示口服投與CPE21天後，小鼠之腫瘤體積縮小。特別是，吾人發現，陽性(未經治療)組中平均腫瘤尺寸為1021.9±476.2 mm3，其在口服CPE 50μL以及100μL組中戲劇性縮小，各展現出體積57.7±42.0mm3。然而，在口服CPE 50μL以及100μL組之間沒有觀察到劑量反應差異。
    此等結果清楚地顯示出，口服投與CPE會增加活體內抗前列腺癌功效。
    第1A、B、C以及D圖係注射PC-3細胞之小鼠未經治療之照片；第2A、B、C以及D圖係在開始注射25μL之CPE後18天所拍之小鼠的照片；第3A、B、C以及D圖係在開始注射50μL之CPE後18天所拍之小鼠之照片；第4圖係顯示在23天治療後，小鼠之體重差異圖；第5圖係顯示在23天治療後，小鼠之腫瘤體積差異圖；第6A、B、C以及D圖係注射PC-3細胞之小鼠未經治療之照片；第7A、B、C以及D圖係開始口服投與100μL之CPE後17天所拍之小鼠之照片；第8A、B、C以及D圖係開始口服投與200μL之CPE後17天所拍之小鼠之照片；第9圖係顯示在21天治療後，小鼠體重之差異圖；第10A、B、C以及D圖係注射PC-3細胞之小鼠未經治療之照片；第11A、B、C以及D圖係開始注射50μL之CPE後21天所拍之小鼠之照片；第12A、B、C以及D圖係開始注射100μL之CPE後21天所拍之小鼠之照片；第13圖係顯示在21天治療後，小鼠腫瘤體積之差異圖。
    权利要求:
    Claims (19)
    [1] 一種用於治療人類主體之前列腺癌之方法，包含對需要此治療之主體投與一抗前列腺癌有效量之新鮮柑橘類果實果皮之米酒萃取物。
    [2] 如申請專利範圍第1項之方法，其中該萃取物係口服投與。
    [3] 如申請專利範圍第1項之方法，其中該萃取物係口服投與，劑量從約5至120 ml，一天1至5次。
    [4] 如申請專利範圍第1項之方法，其中該萃取物係口服投與，一天之總劑量為從10至60 ml。
    [5] 如申請專利範圍第1項之方法，其中該萃取物係口服投與，歷時足以引起該主體之前列腺癌緩解之期間。
    [6] 如申請專利範圍第1項之方法，其中該萃取物之獲得係經由削下新鮮柑橘類果實之果皮，將如此獲得之果皮與米酒混合且使該混合物在足以使該柑橘類果皮中幾乎所有任何可溶於米酒之化合物萃取至該米酒中之溫度以及壓力條件下靜置一段時間。
    [7] 如申請專利範圍第6項之方法，其中該溫度係周遭溫度。
    [8] 如申請專利範圍第6項之方法，其中該溫度係室溫。
    [9] 如申請專利範圍第6項之方法，其中該溫度係從約4℃至120℃，以及該壓力係從大氣壓力至100巴。
    [10] 如申請專利範圍第6項之方法，其中超過一種新鮮柑橘類果實與該米酒混合。
    [11] 如申請專利範圍第10項之方法，其中該新鮮柑橘類果皮係擇自於由下列所構成之群組：在日本生長以及收成之柑橘類果實。
    [12] 如申請專利範圍第6項之方法，其中在削皮之前，用水清洗該柑橘類果實。
    [13] 如申請專利範圍第1項之方法，其中該新鮮柑橘類果實係手工削皮。
    [14] 如申請專利範圍第11項之方法，其中該新鮮柑橘類果實係擇自於由下列所構成之群組：臍橙、八朔柑(C.hassaku hort.)、檸檬、酸橙(C.aurantium)、宫內伊予柑(C.Miyauchi iyo Hort.)、溫州蜜柑(C.unshiu)、金桔屬(金桔/金橘)、溫州蜜柑(Mikan unsyu)(橘子)以及其等之混合物。
    [15] 如申請專利範圍第11項之方法，其中該萃取物進一步含有木立蘆薈(aloe arborescens)。
    [16] 如申請專利範圍第6項之方法，其中該萃取物在周遭溫度下熟成。
    [17] 一種用於具有前列腺癌之人類之治療處遇(therapeutic treatmet)的方法，包含對該人類投與一抗前列腺癌有效量之從新鮮柑橘類果實而來之果皮之米酒萃取物，該新鮮柑橘類果實擇自於由下列所構成之群組：臍橙、八朔柑(C.hassaku hort.)、檸檬、酸橙(C.aurantium)、宫內伊予柑(C.Miyauchi iyo Hort.)、溫州蜜柑(C.unshiu)以及其等之混合物。
    [18] 如申請專利範圍第17項之方法，其中該處遇持續一段足以引起該前列腺癌緩解之時間。
    [19] 如申請專利範圍第17項之方法，其中該處遇之進行係經口服投與該米酒萃取物，劑量為10 ml，一天二至三次。
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    法律状态:
    优先权:
    申请号 | 申请日 | 专利标题
    US201161484417P| true| 2011-05-10|2011-05-10||
    US201161525340P| true| 2011-08-19|2011-08-19||
    PCT/US2011/048532|WO2012154192A1|2011-05-10|2011-08-20|Method for treating prostate cancer|
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